云芝菌丝体多糖的分离纯化研究

利用热水抽提从云芝菌丝体中提取胞内多糖,初步纯化后,用DEAE-Sepharose CL-6B进行分离,从中分离出两个带电荷多糖组分即CVP-I和CVP-Ⅱ,对这两个组分分别用Sepharose CL-6B凝胶柱层析进行纯度鉴定,均出现单一峰,然后用紫外扫描发现这两个组分均出现蛋白多糖的特征吸收,从而可以判断这两个组分是蛋白结合多糖。     

酚氧化酶纸条制备与应用

制备出一种酚氧化酶试纸条,一３７℃６ｈ内可完成酵母样真菌的酚氧化酶试验,较常规培养基试验法至少能提前１８－２４ｈ获得结果。该纸条置４℃保存,有效期６个月,对鉴定酵母样真菌具有快速、准确实用性。     

软体动物和甲壳动物酚氧化酶的研究进展

软体动物和甲壳动物的很多品种都是重要的经济养殖品种.随着养殖业集约化程度的提高,各种病害频繁发生,造成了巨大的经济损失.于是越来越多的人开始关注软体动物和甲壳动物的免疫防御系统,并对其进行研究.酚氧化酶(phenoloxidase,PO)是一种含铜的氧化酶,广泛存在于微生物、动物和植物体内.作为酚氧化酶原激活系统的重要一员,PO在无脊椎动物的先天免疫机制中起着重要的作用,有关其生物化学、免疫学和分子生物学特性的研究一直以来受到广泛关注,尤其在节肢动物中进展很快.作者对酚氧化酶在软体和甲壳动物中的功能、组织定位及表达、基因克隆和序列分析及其系统演化等几个方面的研究进展进行了综述.基因序列分析和系统进化树证据均表明,催化功能相同的软体动物酪氨酸酶与节肢动物PO的基因有较大差异.该结果对目前被广泛接受并使用的酪氨酸酶专门用于哺乳类,酚氧化酶专门用于无脊椎动物的分类法提出了挑战.因此作者建议,将酚氧化酶专门用于节肢动物,酪氨酸酶用于软体动物等非节肢动物和脊椎动物.     

中国对虾（Penaeus chinensis）酚氧化酶的分离纯化及其部分生物化学性质

以中国对虾 (Penaeuschinensis)的血淋巴为材料 ,利用凝胶过滤和离子交换等方法 ,对酚氧化酶 (phe noloxidase ,E .C .1 .1 0 .3.1 )进行了分离纯化和生物化学性质研究。实验发现 ,酚氧化酶原 (prophenoloxidase)的分子量为 87.5kD左右 ,在实验操作过程中极易发生降解或自身降解 ,变成有活性的大小约 77kD的酚氧化酶 ,1 0g/LSDS可使该酶原全部被激活而成为有活性的酚氧化酶。以L 二羟苯丙氨酸 (L DOPA)为特异性底物对酚氧化酶活性进行研究发现 ,其最适pH值为 6 .0左右 ,最适温度为 4 0℃ ,Km 值约为 1 .99mmol/L。利用多种氧化酶抑制剂对酚氧化酶纯化样品的酶活性进行研究 ,发现抗坏血酸 (ascorbicacid)、半胱氨酸 (cysteine)和二硫苏糖醇(dithiothreitol)对酚氧化酶活性具有很强的抑制作用 ,硫脲 (thiourea)对酚氧化酶活性也具有较强的抑制作用 ,而酚氧化酶对苯甲酸 (benzoicacid)、柠檬酸 (citricacid)和亚硫酸钠 (sodiumsulfite)不敏感 ,而且该酶对酪氨酸等单酚还具有高特异性的酚氧化酶活性 ,表明它可能是一种酪氨酸酶型的酚氧化酶 ;此外 ,该酶对EDTA和金属离子非常敏感 ,其活性能被Cu2 强烈抑制 ,被Mg2 强烈激活 ,表明该酶很可能是一种金属酶 (metalloenzyme)     

酚氧化酶试纸条制备与应用

制备出一种酚氧化酶试纸条,于３７℃６ｈ内可完成酵母样真菌的酚氧化酶试验,较常规培养基试验法至少能提前 １８～２４ｈ获得结果。该纸条置４℃保存,有效期６个月,对鉴定酵母样真菌具有快速、准确、实用性。     

昆虫酚氧化酶原激活酶研究

昆虫酚氧化酶原激活酶(Prophenoloxidase activating proteinase,PAP)是酚氧化酶原激活过程中的一个关键酶,是昆虫先天性体液免疫体系的重要组成部分。外界的免疫刺激能够诱导级联反应上游的蛋白对酚氧化酶原激活酶的前体进行剪切激活,而激活后的酚氧化酶原激活酶能够将无活性的酚氧化酶原剪切激活为有活性的酚氧化酶并最终生成细胞毒素物质来消灭外源物。本文综述了昆虫酚氧化酶原激活酶的结构与特性及其在酚氧化酶原级联激活系统中的作用机制,并探讨了寄生蜂对寄主昆虫酚氧化酶原激活酶的调控。     

亚洲玉米螟血淋巴中酚氧化酶的研究

酚氧化酶(Phenoloxidase,简称PO)大量存在于亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)幼虫的血浆中,血细胞中甚少.该酶的活力与幼虫的发育期相关,在蜕皮和化蛹前后活力达高峰.PO可以粘附在酵母菌细胞表面,但未发现具有调理作用.以Sephadex G-200层析,对PO进行了部分纯化,比活力可提高56倍.试虫感染酵母菌后,活体内血浆PO活力即刻下降;体外证明,感染血浆可抑制正常血浆PO活力,以胰蛋白酶和昆布多糖测试以及行耐温实验,表明该抑制物为蛋白质性质.对PO的防卫作用进行了简要的讨论.     

棉铃虫血淋巴酚氧化酶活性的微量测定

昆虫血淋巴黑化的形成由激活酚氧化酶原的级联系统所引发 ,酚氧化酶在昆虫体液免疫中起着重要作用。用抗凝剂从棉铃虫血淋巴中分离获得了血浆及完整的血细胞 ,以L DOPA为底物 ,牛胰蛋白酶为激活剂 ,测定了血浆及血细胞裂解液中酚氧化酶及酚氧化酶原的活性。结果表明 ,血浆及血细胞中两者都有一定量的分布。这一昆虫血淋巴酚氧化酶的微量测定方法 ,所需样品量少 ,耗时短 ,简便易行。     

节肢动物中酚氧化酶家族的组成与进化

节肢动物分布广泛,物种数量繁多,有较高衍生价值,因此近年来对节肢动物的研究越来越深入。已有研究者对节肢动物线粒体和核糖体的基因序列进行研究,而近年发现,与DNA序列相比,蛋白质序列的进化式样更为简单,用于探讨系统发育的效果更好。酚氧化酶(phenoloxidase)作为先天免疫的重要成员,有作为研究节肢动物进化的分子标记的可能。本研究对节肢动物酚氧化酶家族的组成进行分析,并构建基于该家族蛋白序列的系统进化树,试图阐明酚氧化酶家族在节肢动物中的进化关系,并为节肢动物的进化研究提供更多理论依据。     

棉铃虫感染中华卵索线虫后血淋巴酚氧化酶活性的变化及其分离纯化

研究了中华卵索线虫Ovomermis sinensis感染棉铃虫Helicoverpa armigera幼虫后宿主体内酚氧化酶活性的变化。研究结果表明,在感染后的第1天,中华卵索线虫的侵入引起酚氧化酶活性的增加,感染组酶活性是同期对照组的1.12倍; 但在随后的寄生期间,中华卵索线虫抑制了宿主的酚氧化酶活性,其中以第5天的抑制最为强烈： 同期对照组酶活性是感染组的1.52倍。对酚氧化酶进行了初步的分离纯化,纯化倍数为41.5倍,酶得率为12.7%,比活力为4 030.6 U/mg。     

亲和层析法分离胆固醇氧化酶

利用胆固醇氧化酶和底物胆固醇之间的亲和力,以胆固醇为吸附剂构成底物亲和层析柱.发酵液经盐析、透析后直接进行亲和层析.研究了洗脱液A和B的流速、洗脱液B中表面活性剂的浓度,确定了适合的层析条件,使比酶活从0.45U/mg提高到15.5U/mg.     

蹒跚的步履——从“扶贫”到“自主”

在贵州贫困山区几乎所有的村寨,都留着一个人的脚印,那是在整整30年里散布下的脚印。那些脚印记录的是贵州乡村旅游艰难曲折发展的步履,而留下这脚印的人就是贵州省原旅游局长、世界旅游组织专家委员会专家杨胜明。与她面对面地交谈,你丝毫不会感到在其它场合里司空见惯的官气,而是在不知不觉中被一种难以名状的力量所感染,这兴许就是能把在一般人看来尚属奢华的旅游与穷困山区百姓命运联系起来的一种气质和使命感。杨胜明在2007年出过一本书:《蹒跚的步履》,近百万字真实地记录了她作为一位政府官员对贫困山区发展旅游的认识过程和步步深入的施政轨迹,从以经济目标出发的旅游扶贫,到村寨全面发展和文化遗产保护的乡村旅游,再到倡导村民自主发展的核心理念……每一步转变和前进都折射出她所著书名中的"蹒跚"二字。如今,乡村旅游的蹒跚之旅尚处在进行时态,或许进入了更加艰深的阶段。世界旅游组织将贵州的乡村旅游作为长期观察点,并于2006年在贵州召开了"乡村旅游国际论坛",会上发表了一份具有里程碑意义的《贵阳宣言》,而这一切皆出于一个原因:这是一个世界性的难题,尚无成功案例。杨胜明抱定决心去破解这道难题,她说:"乡村旅游肯定是我终生的事业"。     

外科手术:从“夺命”到“救命”的历史

<正>在人类漫长的历史中,疾病和瘟疫的肆虐记载不绝于书。公元1世纪罗马帝国每日死亡人数达万余人的可怕瘟疫,14世纪中叶造成欧洲大约一半人口死亡的鼠疫都是如此可怕。直到19世纪中期,虽然近代科学有了很大发展,但医学的发展却似乎相对滞后。     

害虫管理:从“综合”到“整合”

害虫综合治理(Integratedpestmanagement,IPM)中的"Integrated"除了综合的意思,其实更多表述的是"整合"。在进行害虫防治时,不能将各个措施简单地综合应用,而应在充分了解各种措施之间相互作用的基础上,将其整合成一个系统(整体),更好地服务于害虫管理。本文基于国内外害虫管理的进展与实践,论述了近年来害虫管理发展的4种理念更新、4项策略演变和3大技术革新,提出了害虫管理优先方案5个步骤,指出了整合过程的5个层次及11个科学问题,强调害虫管理应本着"预防为主、生态优先、综合治理"的植保方针,秉持"生态、有效、经济、简便"技术原则,重点从综合走向整合,构建我国不同区域特色的害虫管理生态工程,开展害虫整合治理,达到经济可行、生态可持续、社会可接受的目的。     

从北大荒到“中华大粮仓”

<正>"北大荒"一词,最早见于我国最古老的地理学典籍之一—《山海经》。《山海经·大荒北经》中记载:"大荒之中,有山曰不咸山(即长白山),有肃慎氏之国。"这里的"大荒北",只是一个地域的历史名词,泛指今天的长白山以北广大地区,后泛指地处世界三大黑土带之一的我国东北原始大荒原。历史发展到今天,狭义的北大荒,就是指现在的黑龙江垦区。     

从华为员工到“农家乐”掌柜

在位于牛背梁国家森林公园一侧的＂红庙河农家乐＂用餐时,发现有一位戴眼镜、很斯文的小伙子在忙着上菜,对人非常和蔼,很有礼貌。一开始大家都以为是掌柜的儿子在帮忙,就随口和他聊天,没想到他就是此农家乐的掌柜,有一个比较传统的名字——郑传家,在攀谈中,更让我们惊异的是他居然是大学本科毕业生,曾任职于华为公司,2011年初选择回乡接手父母经营了多年的＂农家乐＂。他的经历吸引了我们,我们邀请他和我们聊聊,小伙子略带腼腆地接受了我们的邀请。     

槲皮素对黄粉虫血淋巴酚氧化酶的生理效应

用酶标仪法测定了槲皮素对黄粉虫Tenebrio molitor酚氧化酶（phenoloxidase, PO）的生物活性。结果表明：在离体条件下,对黄粉虫血淋巴PO的IC₅₀为0.625 mmol/L。在活体情况下,当槲皮素-DMSO溶液或槲皮素水悬浮液（5 μL）注入虫体后,在浓度低于1.0 mmol/L时对黄粉虫血淋巴PO具有激活作用,当浓度高于2.0 mmol/L时则对PO具有明显的抑制作用;单独注射5 μL DMSO溶液对PO活性亦有一定的激活作用。试虫被注射槲皮素后,PO活性在2～4 h内迅速下降,然后缓慢上升,处理8 h左右达到最高点,其后低浓度处理PO活性保持不变,而高浓度处理则逐渐下降,提示低浓度槲皮素可以引起试虫的免疫反应。在PO测活体系中加入0.5％的BSA后对PO活性无影响,并能使槲皮素在测活体系中保持稳定。     

亚洲玉米螟幼虫血清中酚氧化酶原的性

采用40%硫酸铵沉淀、Blue Sepharose CL-6B亲和层析和Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析等方法,从亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis (Guenée) 幼虫血清中分离纯化了酚氧化酶原。酚氧化酶原全酶相对分子量约为158 kD,亚基相对分子量约为80 kD和78 kD。酚氧化酶原为糖蛋白,该酶原易被0.1 mmol/L CPC (氯代十六烷基吡啶)、 50%甲醇、 1 mg/mL昆布多糖和1 mg/mL胰蛋白酶激活。该酶反应的最适pH为7.0,最适温度为25～30℃,Ca²⁺和Mg²⁺可增强该酶的活性。     

栎皮酮对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用

研究了栎皮酮对甜菜夜蛾Spodopteraexigua 酚氧化酶活力的影响。结果表明: 栎皮酮对该虫的单酚酶和二酚酶活性均表现很强的抑制作用,其I⁵⁰分别为0.079 mmol/L和0.087 mmol/L。其中,栎皮酮对单酚酶活力表达的迟滞时间有明显的延长效应,浓度 为0.079 mmol/L时可使单酚酶活力表达迟滞时间从134s 延长到330s;而当浓度为0.158 mmol/L时,其迟滞时间则延长至440s。以L 多巴为底物时,栎皮酮对二酚酶的抑制作用表现 为典型的竞争型抑制类型,抑制常数K_I为33.16 mmol/L。在研究金属离子对栎皮酮吸收 峰影响实验中发现,Cu²⁺对吸收峰影响最大,可使栎皮酮最大吸收波长从367 nm改变为 435 nm;而加入Mg^2+与Ca²⁺后,其最大吸收峰却无明显的偏移。