线粒体与细胞凋亡机制

细胞凋亡是生理性的细胞死亡过程,受到多种基因的精确调节,一类被统称为ｃａｓｐａｓｅ的半胱氨酸蛋白酶是细胞凋亡程序的执行者,综们被激活后作用于细胞内的一些蛋白质,经起细胞凋亡。线粒体中含有许多凋亡相关因子,在凋亡信号转导中起着重要作用。细胞受到凋亡刺激后,细胞色素ｃ、ＡＩＦ、ｃａｓｐａｓｅ－９等凋亡相关因子从线粒体中释放出来。细胞色素ｃ通过和Ａｐａｆ－１、ｃａｓｐａｓｅ－９相互作用,激活ｃａｓｐａｓ     

线粒体与细胞凋亡

细胞凋亡是一种由基因控制的自主性死亡过程。近年来研究发现,线拉体在细胞凋亡过程中起重要作用,它可以通过改变膜通透性、释放凋亡活性物质等介导细胞凋亡。     

线粒体与细胞凋亡

细胞凋亡是一种重要生物学过程,在细胞生长发育以及对外界刺激的反应中有关键的作用。近年来发现线粒体跨膜电位与线粒体通透性改变在细胞凋亡过程中起重要作用。并且提出了线业体通透性改变孔道复合物的假说,引起广泛的注意,本文谨作一简单介绍。     

细胞凋亡与线粒体细胞色素c

１细胞色素ｃ在细胞凋亡中的作用Ｋｅｒｒ于１９７２年提出了细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）,随后发现细胞凋亡现象普遍存在于各种生物中,与细胞的生长发育,免疫调节以及许多病变如肿瘤有直接关系。与细胞坏死不同,细胞凋亡是一个相对主动的过程,伴随着一系列形态上...     

线粒体在细胞凋亡中的作用

线粒体在凋亡中的作用越来越受到重视,它在细胞凋亡中起中心作用,释放凋亡活性物质,介导凋亡的酶促反应,参与凋亡调控,决定细胞是凋亡还是坏死。     

猪丁型冠状病毒诱导的细胞线粒体凋亡

猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新型的猪肠道致病性冠状病毒,可引起猪群剧烈腹泻及呕吐,但致病机制尚不清楚。本研究检测了PDCoV感染诱导的细胞凋亡。Caspase酶活性检测显示,在PDCoV感染的细胞中,caspase 3、caspase 8和caspase 9的活性随病毒感染量的增多而显著提高,类似的现象未能在紫外灭活病毒感染的细胞中观察到,表明PDCoV感染可同时激活内源性与外源性细胞凋亡通路,并暗示细胞凋亡的诱导依赖于病毒复制。为深入探究PDCoV诱导的内源性细胞凋亡,分别检测胞浆和线粒体中细胞色素C与凋亡诱导因子。结果显示,与正常细胞相比,PDCoV感染细胞从线粒体释放到胞浆的细胞色素C显著增多,且其释放量随着感染时间的延长而增多,而凋亡诱导因子始终定位于线粒体,提示PDCoV感染通过促使线粒体膜间隙的细胞色素C进入胞浆而启动caspase依赖的线粒体凋亡通路。本研究初步揭示了PDCoV诱导细胞凋亡的机制。     

三氧化二砷通过线粒体途径诱导人白血病HL-60细胞凋亡

目的:研究三氧化二砷(Arsenic trioxide,ATO)对人白血病HL-60细胞凋亡的影响,并以线粒体通路为靶点探讨其可能的机制。方法:采用1μg/m L、5μg/m L及10μg/m LATO处理HL-60细胞24小时后,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过细胞内MDA与GSH含量检测反映氧化应激水平,采用免疫印迹法检测凋亡相关分子表达,并通过免疫荧光染色检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平。结果:5μg/m L及10μg/m L ATO可显著诱导人白血病HL-60细胞凋亡,并显著增加其氧化应激水平,增加促凋亡分子Bax和Caspase-3的表达,而抑制抗凋亡分子Bcl-2的表达,降低HL-60细胞线粒体膜电位的水平。结论:一定剂量的ATO可诱导人白血病HL-60细胞凋亡,而这一作用可能是通过诱导线粒体相关性凋亡信号通路激活实现。     

镉诱导HEK293细胞凋亡及其线粒体凋亡途径

本课题研究了氯化镉(CdCl_2)诱导HEK293细胞(人胚胎肾细胞系)的凋亡,初步探讨了凋亡过程中Caspase-3、Bcl-2的变化和凋亡诱导因子(AIF)的转移以及它们的意义。MTT法检测CdCl_2对HEK293细胞增殖的抑制作用;通过倒置显微镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、激光共聚焦观察细胞凋亡;应用Western blot法和荧光免疫法测定Caspase-3酶原、Bcl-2蛋白的变化以及检测AIF蛋白在细胞中的定位。结果显示:CdCl_2对HEK293细胞具有显著的生长抑制作用,并呈明显的剂量和时间依赖性。在琼脂糖凝胶电泳中,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,其中30μmol/L作用6-9h梯状条带最为清晰,时间过长或浓度过高则梯状条带逐渐模糊,表明镉浓度过高或处理时间过长,细胞有坏死。流式细胞仪检测也印证了这一结果。形态学观察可见明显的细胞凋亡特征。同时线粒体膜电位明显下降,发现Caspase-3酶原蛋白、Bcl-2蛋白含量减少,并具有时间依赖性;另外检测到线粒体AIF向细胞核转移。而Bcl-2转染后有一定的抑制凋亡作用。实验结果提示,CdCl_2能够诱导HEK293细胞凋亡,线粒体损伤导致AIF转移与细胞色素c释放,从而引发的非Caspases与Caspases凋亡途径可能在镉引发的细胞凋亡过程中起重要作用,而Caspase-3, Bcl-2起着重要的调控作用。     

线粒体,细胞包素c与细胞凋亡

线粒体是细胞的一个独特而重要的细胞器,它为细胞各种生命活动提供能量.许多研究表明,线粒体的作用远比人们了解的复杂和多样.近年来研究发现,线粒体与细胞凋亡密切相关,表现在如下一些方面.     

地塞米松诱导培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡

目的　研究地塞米松诱导纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡的作用。方法　不同浓度的地塞米松(浓度为 10 -3 、 10 -4、 10 -5mol/L)与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育 18小时后 ,吖啶橙染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变 ,流式细胞仪检测细胞凋亡和结晶紫比色法酶标仪测定活细胞数。结果　 (1)吖啶橙染色荧光显微镜观察 :10 -4组偶见细胞凋亡 ,10 -3 组可见许多细胞有典型的凋亡形态学改变核固缩 ,深染 ,或肿胀 ,碎裂 ,并可见凋亡小体。 (2 )流式细胞仪检测细胞凋亡 :10 -3 组细胞凋亡率为 15 99% ,与其它三组相比明显增高 ,有显著性差异 (P <0 0 1)。 (3)结晶紫法酶标仪测定活细胞数 :10 -3 组OD值为 0 . 185与其它三组相比明显下降 ,有显著性差异 (P <0 0 1) ,表明活细胞数明显减少。结论　大剂量地塞米松可诱导体外的星形胶质细胞凋亡。     

还原型谷胱甘肽对亚砷酸钠诱导的内皮细胞凋亡的保护作用

本文主要观察还原型谷胱甘肽(GSH)对亚砷酸钠(Ars)诱导的培养内皮细胞凋亡的保护作用。体外培养人内皮细胞株ECV-304,用4×10     

胡桃楸提取液诱导Hela细胞凋亡的研究

目的：初步探讨胡桃揪提取液对Hela细胞的凋亡诱导作用。方法：通过形态学观察,琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术（FCM）检测凋亡细胞。结果：形态学观察发现核固缩、出现凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳可见DNA ladder条带。流式细胞仪检测有凋亡峰。结论：胡桃揪提取液可诱导Hela细胞凋亡。     

维甲酸诱导的人大肠癌细胞凋亡

本研究应用光镜、电镜技术、DNA凝胶电泳、流式细胞术及末端脱氧核苷酰转移酶原位标记(TUNEL法),观察全反式维甲酸ATRA诱导的人大肠癌CCL229细胞凋亡特征。RA诱导CCL229细胞凋亡,光、电镜下观察到凋亡小体形成等典型的形态学改变,琼脂糖凝胶电泳上呈现特征性的DNA ladder,DNA直方图上显示亚二倍体峰。10-8mol/L-105mol/L范围内,RA诱导CCL229细胞凋亡表现出时间和剂量依赖性。     

OxLDL诱发大鼠血管内皮细胞凋亡模型的建立

目的　建立OxLDL诱发大鼠血管内皮细胞凋亡的模型。方法　SD大鼠尾静脉注射非氧化的LDL ,2 4h后取主动脉血管内皮细胞铺片 ,采用光学显微镜和荧光显微镜进行形态学观察 ,TUNEL法染色计算凋亡细胞比例。结果　( 1)静脉注射LDL组观察到明显的凋亡形态学改变 ,对照组未见凋亡内皮细胞 ;( 2 )静脉注射LDL ( 4mg/kg、 6mg/kg、8mg/kg)组凋亡细胞比例分别为 8 10 %、 18 92 %、 2 2 0 3 % ,三组间有非常显著性差异 (P <0 0 1)。结论　 ( 1)尾静脉注射LDL后 2 4h可引起血管内皮细胞凋亡 ;( 2 )静脉注射LDL引起大鼠血管内皮细胞凋亡呈剂量依赖性     

胡桃楸提取液诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的：考察胡桃楸提取液是否具有诱导K562细胞p52蛋白及p21蛋白的作用,初步探讨胡桃楸提取液诱导K562细胞凋亡机制。方法：以Western-blot方法检测胡桃楸提取液对K562细胞p53蛋白及诱导K562细胞p53蛋白和p21蛋白的表达。     

神经营养因子对p75NTR诱导哺乳动物神经细胞凋亡的影响

目的：研究R2L1细胞的凋亡以及神经营养因子对凋亡的影响,方法：形态学观察,细胞活性测定和流式细胞仪分析。结果：R2L1细胞去和因清培养12小时即发生凋亡。24小时后大部分细胞凋亡。48小时后细胞基本上都死亡。结论：NGF、NT－3和抗p75NTR抗体能抑制R2L1细胞在去血清培养后发生的凋亡,而BDNF却无此报制功能。     

双歧杆菌诱发实验性大肠癌凋亡的电镜观察

本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,用透射电镜观察了青春型双歧杆菌对移植瘤超微结构的影响。结果表明：双歧杆菌经荷瘤鼠腹腔注射后能诱导多量大肠癌细胞凋亡,凋亡早期的细胞主要表现为核染色质浓缩边聚;中期为核膜破裂,胞核崩解,凋亡小体形成;晚期主要为邻近活细胞吞噬凋亡小体。提示双歧杆菌诱导大肠癌细胞程序化死亡可能是其抑瘤机制之一。     

去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究

体外实验证明１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ,可诱导Ｋ５６２细胞发生凋亡。提取加药组细胞ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳呈现典型的ＤＮＡ“梯子”,同时加药组细胞出现核固缩、碎裂及胞浆浓缩等形态学变化。流式细胞测试结合形态学观察,特别是细胞超微结构观察,证明去甲斑蝥素诱导的Ｋ５６２细胞凋亡大部分发生在细胞周期的Ｍ期,也有部分发生在间期。免疫细胞化学结果表明,１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ,与对照组相比,加药组细胞中ｂｃｌ┐２蛋白表达增强,而Ｂａｘ蛋白表达减弱,两组间有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。     

NPPB对低渗诱导海马神经元凋亡的拮抗作用

目的观察体积调节性氯离子通道阻滞剂NPPB对低渗条件下神经元凋亡的影响。方法采用原代培养的大鼠海马神经元细胞,实验分为对照组(无低渗溶液处理)、低渗组、低渗加NPPB干预组;在不同时间点(10min、30min、60min),应用AnnexinⅤ/PI流式细胞检测以及免疫细胞荧光三标法(TUNEL/MAP-2/DAPI)检测各实验组神经元凋亡的情况。结果与对照组相比,神经元在低渗干预10min后凋亡细胞明显增多,60min时神经元的凋亡达到高峰(P0.01),而NPPB干预组在各时间点凋亡神经元相对低渗组明显下降(P0.01),较正常对照组增高。结论低渗条件可诱导体外培养海马神经元细胞凋亡,体积调节性氯离子通道阻滞剂NPPB可以显著降低低渗诱导的神经元凋亡,提示VRAC通道参与了低渗诱导的神经元凋亡。