表达人α-1，2-岩藻糖苷转移酶、衰变加速因子和CD59基因的转基因小鼠的建立及其抗异种移植排斥反应的研究

在进行非协调性异种器官移植时,目前已经证实表达人α-1,2-岩藻糖苷转移酶（HT）或者补体调节蛋白的供体动物器官均可以部分克服超急性排斥反应．本文的研究目的是探讨是否共表达人HT和补体调节蛋白（衰变加速因子与CD59）的转基因小鼠的外周血单核细胞能更有效的克服异种移植排斥反应．利用受精卵显微注射技术建立转人HT,DAF和／或CD59基因的小鼠动物模型,流式细胞技术筛选表达不同基因的转基因小鼠．将小鼠的外周血单核细胞与15％的人血清共孵育,检测细胞表面天然抗体的沉积、补体的激活以及黏附分子的表达等．三种目的基因均可以在转基因小鼠体内表达,并且HT基因的表达显著减少了引起异种移植排斥反应的主要抗原半乳糖α-1,3-半乳糖（α—Gal）的表达．功能实验表明,与单一目的基因表达的转基因小鼠相比,共表达HT／DAF或HT／CD59的转基因小鼠的外周血单核细胞对抗人血清介导溶破细胞的能力显著增强．而且三基因共表达的外周血单核细胞对抗人血清介导溶破细胞的能力最强,可以克服超急性排斥反应并且可以减少黏附分子的表达．高水平表达人HT,DAF和CD59基因的转基因小鼠可以完全克服异种器官移植超急性排斥反应并且可以部分克服急性血管排斥反应．本研究表明,表达三种基因的转基因小鼠的器官异种移植时存活时间可以显著延长,对异种移植来说也许是更合适的选择．     

猪作为异种器官移植供体的研究进展

异种器官移植是现代和未来医学的重要研究领域之一,转基因猪有望为人类提供移植所需的器官,本对猪作为异种器官移植供体的可能性,移植引起的免疫排斥反应及病毒感染等问题进行了综述和讨论。     

不同手术方法对小鼠同种异基因移植皮片存活的比较

目的采用不同手术缝合方式观察小鼠移植皮片存活及生长情况,以建立一种简单易行、快速经济的小鼠同种异基因皮肤移植方法.方法 受体BALB/c小鼠随机分为3组(Z组、J组和T组),每组20只,通过背-背法进行供体C57BL/6的皮片移植,Z组、J组和T组分别采用四周缝合、对角缝合和粘贴固定的皮片缝合方法.每天监测小鼠体重变化及生长状态,观察26天,实验第3、7、15和26天观察各组受体移植皮片存活情况,其中皮片变硬、结痂脱落或坏死判定为移植排斥.第26天取小鼠皮肤移植组织以及肝脾组织进行病理检测.结果 各组小鼠移植物平均体重变化趋势类似,第6天达到最低水平,移植皮片病理检测结果显示,各组均见移植皮片真皮内淋巴细胞浸润,3组病理结果类似,肝脾病理检测发现淋巴细胞大量浸润,说明造模成功.实验26天后,Z组、J组和T组小鼠皮片分别有7、5和3只受体小鼠皮片仅观察到炎症反应.结论 3种手术方式建模均成功,但采用粘贴固定方式进行小鼠背部皮肤移植具有手术方式简单有效、对皮肤损伤小的优点,是一种较好的小鼠同种异基因皮肤移植手术方法.     

异种移植中转基因动物技术应用的现状

超急性排斥反应一直是异种移植中的主要障碍,转基因技术为跨越这一障碍发挥了重要作用,转基因技术克服超急性排斥反应的主要技术策略有：利用抗补体基因插入技术创建转基因猪,供体抗原遗传修饰和受体基因治疗。     

PERV病毒在异种移植中的感染风险及预防对策

猪与人体在器官结构、生理解剖上相似性高,被认为是最佳的异种移植供体,能够有效解决人类供体器官短缺的问题。猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus, PERV)是一种C型逆转录病毒,以一种前病毒DNA的形式整合在猪的细胞基因组中,随细胞染色体的复制而复制,无法通过无特定病原体(specific pathogen-free, SPF)培育消除,其在异种移植中具有潜在的感染风险。了解PERV的特性,探索PERV预防策略,将有助于猪作为异种移植供体在临床的应用。     

用补体控制因子阻止异种移植排斥反应

京都府立医科大学第2外科教授周隆宏、赤见敏和和东雪基础研究所小组确认表达人补体抑制因子CD59基因的小鼠细胞株可避免人淋巴细胞的攻击。如能抑制排斥反应,将使异种移植的实用化前进一大步。赤见等于9月在东京召开的日本移植学会上发表了这项成果。该小组将阻碍补体反应的终因子(C9因子)活化的人细胞表面分子CD59的cDNA导入小鼠细胞株(A31)。重组A31细胞与人血清反应时,由补体介导的细胞障碍随血清浓度不同(3～25％)而抑制程度不同(浓度8％时能抑制94％、浓度25％抑制47％)。异种移植的最大难关是超急性排斥反应。在移植患者的血液流入移植脏器血管的同时引起排斥反应。     

凝结芽胞杆菌对免疫功能影响的实验研究

目的 研究凝结芽胞杆菌（TQ33）对实验动物免疫功能模型的影响。方法 以鸡红细胞混悬液对小鼠腹腔注射,观察TQ33对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;制备绵羊红细胞（SRBC）,观察血球凝集程度,测定血清溶血素;以靶细胞（YAC-1细胞）与脾细胞（效应细胞）的反应检测TQ33。对小鼠NK细胞活性的影响;采用淋巴细胞转化法观察TQ33对细胞免疫的影响;计算小鼠胸腺／体重及脾脏／体重为脏器系数观察TQ33对小鼠脏器的影响。结果 与对照组比较,TQ33显著增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;对小鼠体液免疫功能有一定的增强作用;可增强小鼠NK细胞活性;对ConA诱导下的小鼠淋巴细胞转化有增强作用;对脏器系数没有显著的影响。结论 凝结芽胞杆菌具有明显的免疫调节作用,预示有良好的应用前景。     

转基因猪提供移植器官

美国明尼苏达大学的研究者们提出了一个设想:生产基因工程猪作为人类器官移植的器官供体.目前,移植器官的人类供体不足,并且很难找到匹配的器官.这就是说许多需要进行器官移植的患者,将得不到器官. 为了食用已大量繁殖动物,所以用饲养动物作为器官供体在道德问题上可能不会有争议.根据动物的大小及可用性,最适合的动物可能是猪. 在进行上述手术之前,必须解决因排异反应产生的问题.人:人移植也会引起一些排异反应,但通常可用药物加以解决.然而在异种移植体上会发生更严重的超急性排斥反应,被移植的器官将遭到人免疫系统非常强烈的攻击,几小时内该器官被破坏,以致于失去正常的功能.     

壳聚糖载黄芪多糖纳米粒调节糖尿病小鼠免疫功能

研究低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒(LCA)对糖尿病(DM)小鼠免疫功能的影响。注射链脲佐菌素与环磷酰胺混合试剂建立DM合并免疫力低下小鼠模型,酶法制备低分散度壳聚糖,离子交联法制备低分散度壳聚糖纳米粒,超声包埋黄芪多糖制备药物对昆明小鼠灌胃,每天1次,连续30 d。ELISA法检测小鼠血清Ig M、Ig G与INF-γ的含量,碳粒廓清法测定非特异性免疫功能,耳肿胀法检测迟发型变态反应,MTT法检测脾淋巴细胞增殖率以反映细胞免疫功能。结果显示灌胃350 mg/(kg·d)LCA显著提高血清Ig M、Ig G的分泌,显著降低INF-γ表达量,增强碳粒廓清率,提高小鼠迟发型变态反应(DTH),改善脾淋巴细胞增殖反应。适当剂量的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒能提高DM小鼠体液免疫、非特异性免疫及细胞免疫功能,且效果优于纯黄芪多糖。     

绿色荧光蛋白在α-1,3半乳糖基转移酶敲除猪组织器官的表达分析

猪是人类异种器官移植的理想供体,然而猪-人的异种器官移植会产生剧烈的排斥反应。虽然已制备的α-1,3半乳糖基转移酶基因敲除（Galactosyltransferase gene knockout, GTKO）猪可有效缓解猪-人异种器官移植引起的超急性免疫排斥,但缺少报告基因直观示踪移植后的细胞迁移及器官排斥状态。本文将CAG启动子驱动增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein, EGFP）的表达载体导入GTKO猪耳成纤维细胞,通过体细胞核移植技术制备了EGFP猪。利用双荧光蛋白观测镜、荧光显微镜及定量PCR扩增观察、检测和分析克隆猪各组织器官中EGFP蛋白和转录本的表达状况。结果显示,EGFP蛋白及转录本在克隆猪各组织器官中均有表达,但在肝脏和中枢神经系统中表达较弱。本文成功获得了各组织器官表达EGFP的GTKO猪,为EGFP示踪异种细胞组织移植奠定了基础。     

绿色荧光蛋白在α-1,3半乳糖基转移酶敲除猪组织器官的表达分析

猪是人类异种器官移植的理想供体,然而猪-人的异种器官移植会产生剧烈的排斥反应。虽然已制备的α-1,3半乳糖基转移酶基因敲除(Galactosyltransferase gene knockout,GTKO)猪可有效缓解猪-人异种器官移植引起的超急性免疫排斥,但缺少报告基因直观示踪移植后的细胞迁移及器官排斥状态。本文将CAG启动子驱动增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达载体导入GTKO猪耳成纤维细胞,通过体细胞核移植技术制备了EGFP猪。利用双荧光蛋白观测镜、荧光显微镜及定量PCR扩增观察、检测和分析克隆猪各组织器官中EGFP蛋白和转录本的表达状况。结果显示,EGFP蛋白及转录本在克隆猪各组织器官中均有表达,但在肝脏和中枢神经系统中表达较弱。本文成功获得了各组织器官表达EGFP的GTKO猪,为EGFP示踪异种细胞组织移植奠定了基础。     

仿刺参多糖抗肿瘤及对荷瘤小鼠免疫调节作用

目的 观察仿刺参多糖(AJPS)抗肿瘤及免疫调节作用.方法 采用MTT法检测AJPS对人肝癌HepG-2细胞抑制率;以Hca-F肝癌小鼠为模型,采用MTT法、放免法测定荷瘤小鼠细胞免疫指标.结果 AJPS抑制HepG-2细胞生长,抑制小鼠移植瘤生长;增强脾淋巴细胞和巨噬细胞活性,促进TNF-α和IL-2的产生.结论 AJPS具有对HepG-2细胞的直接杀伤作用;AJPS对荷瘤小鼠有免疫调节活性,在肿瘤的免疫治疗中发挥作用.     

重组CHO细胞乙肝表面抗原诱导小鼠细胞免疫应答的研究

为了研究重组CHO细胞乙肝表面抗原(CHO-rHBsAg)在小鼠中诱导T细胞免疫应答的能力,全面评价疫苗的免疫原性,以CHO-rHBsAg免疫BALB/c小鼠,常规制备小鼠脾脏淋巴细胞并在体外以抗原或特异多肽刺激;采用ELISA法测定抗原特异性T淋巴细胞分泌的细胞因子,乳酸脱氢酶法(LDH)测定抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性,酶联斑点法(ELISPOT)测定CTL频数(CTLp),应用流式细胞仪分析T淋巴细胞亚群。结果显示,rHBsAg可在小鼠中诱导Th1及Th2类细胞因子;加铝佐剂的rHBsAg较未加佐剂的抗原可诱导较高水平的IFN-γ、CTL克隆及较高百分比的CD8+T淋巴细胞亚群。重组CHO细胞来源的HBsAg可在BALB/c小鼠中诱导一定程度的细胞免疫应答。     

编委推荐

<正>Cell Stem Cell |通过胚胎互补诱导多能干细胞在猪体内产生人源化中肾异体器官移植是代替原始器官发挥功能的有效方法,但是受到移植器官短缺和缺乏具有组织相容性供体等方面的限制。一种有希望的解决方法是通过胚胎与多能干细胞(PSCs)的互补,产生具有人类组织的大型哺乳动物异种嵌合体。利用该方法,目前在小鼠和大鼠之间已经成功实现了胰腺、胸腺和肾脏等器官的异种器官形成。     

MEC-1移植法构建慢性淋巴细胞白血病小鼠模型

目的 制备并评估慢性淋巴细胞白血病小鼠模型，以期为慢性淋巴细胞白血病的治疗提供临床前模型。方法 通过文献查阅及实验确定环磷酰胺(cyclophosphamide, CTX)注射剂量以制备免疫抑制小鼠模型；通过腹腔注射、尾静脉注射将1×10⁷个MEC-1细胞连续3 d移植到小鼠体内，以制备慢性淋巴细胞白血病小鼠；应用流式细胞术、免疫组化等方法，检测慢性淋巴细胞白血病小鼠外周血白细胞、CD19⁺CD5⁺B淋巴细胞变化情况，并分析肝、脾、胸腺、肺、淋巴及骨髓中MEC-1细胞浸润情况。结果 确定CTX注射剂量为150 mg/kg注射4 d能够显著降低小鼠免疫系统功能；移植MEC-1细胞后小鼠表现慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia, CLL)特征，其白细胞及B淋巴细胞数量增多、骨髓细胞发生增殖。结论 CTX注射剂量为150 mg/kg连续注射4 d,可以使小鼠免疫功能显著下降；成功制备CLL小鼠模型。     

当归内酯对免疫抑制小鼠免疫功能的重建作用(英文)

探讨当归内酯(ASDL)对免疫抑制小鼠免疫功能的重构作用。通过小鼠腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制动物模型。采用免疫器官重量法和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验检测了ASDL对非特异性免疫功能的影响;用血清溶血素分光光度法检测了对体液免疫功能的作用;用MTT法进行了致分裂原诱导的小鼠脾淋巴细胞的增值反应实验,再用乳酸脱氢酶法测定了NK和CTL细胞活性,从而确定ASDL对小鼠细胞免疫功能的影响。结果表明:ASDL能够对免疫低下小鼠的非特性和特异性免疫功能起到一定的重构作用。但是这种效果并不是剂量依赖性的,20 mg/kg这个剂量的效果明显好于5和80 mg/kg这两个剂量。上述结果表明ASDL能够显著提高免疫低下小鼠的免疫功能。     

频谱水对BALB/c小鼠T淋巴细胞转化的影响

目的探讨频谱水对实验小鼠细胞免疫功能的影响。方法将60只SPF级BALB/c小鼠随机分成喝泡频谱水组、喝自来水泡频谱水组、喝泡自来水组（对照组）,分别检测每组经ConA处理后T淋巴细胞转率。结果前两组处理组与对照组相比较,T淋巴细胞转化率增高,差异有显著性。结论频谱水可以提高机体的细胞免疫功能。     

FCA-iRNA对寒冷应激小鼠细胞免疫及胸腺cAMP的影响

本文观察了FCA-iRNA对寒冷应激小鼠细胞免疫的影响,FCA-iRNA组与对照组比较发现其可使小鼠胸腺重量增加,末梢血淋巴细胞增高,尤其是淋巴细胞酸性非特异酯酶阳性率明显增高。提示FCA-iRNA可使寒冷所致细胞免疫功能降低有所改善。同时发现FCA-iRNA使胸腺cAMP含量有所降低,考虑其与淋巴细胞分裂增殖、细胞免疫功能改善有关。     

板蓝根提取物对小鼠免疫功能的影响

目的 研究板蓝根提取物对小鼠免疫功能的影响.方法 称重法检测小鼠免疫器官指数,血球分析仪分析小鼠外周血免疫细胞数量,比浊法检测小鼠血清中溶菌酶含量,溶血空斑形成实验检测B淋巴细胞抗体形成.结果 板蓝根提取物能明显增加小鼠免疫器官指数,提高小鼠外周血中免疫细胞数量.与对照组相比,外周血中淋巴细胞和白细胞数量分别增加(8.4±1.42)％和(10.52±1.63)％,血清中溶菌酶含量增加(10.82±1.08)％,溶血空斑形成数量增加(13.9±1.3)个/107脾细胞.结论 板蓝根提取物可提高小鼠的体液免疫和细胞免疫等功能.     

甲型肝炎、乙型肝炎病毒混合抗原的细胞免疫学研究

评价甲型肝炎病毒和乙型肝炎病毒混合抗原对细胞免疫反应的影响。采用小鼠迟发型超敏反应(DTH)、脾脏淋巴细胞增殖实验和淋巴细胞亚型分群实验 ,对甲肝抗原 (HAAg)、乙肝表面抗原 (HBsAg)和甲乙肝混合抗原 (HAAg +HBsAg)进行检测 ,并进行统计学分析。混合抗原没有降低相应单价抗原的各项细胞免疫反应强度 ,且较单一 ,HBsAg表现出了显著的抗原特异性T淋巴细胞和Th2细胞增殖作用 (P <0 .0 5 )。混合抗原表现出良好的细胞免疫反应原性 ,同时可能辅助B细胞 ,增强体液免疫应答能力。