长白山鹅膏菌肽类毒素的HPLC分析

采用HPLC法对长白山地区分布的10种鹅膏菌中的α-鹅膏毒肽（α-amanitin)、β鹅膏毒肽（β-amanitin)和鬼笔毒肽（phalloidin)3种毒素的含量进行了测定。结果表明：白鹅膏（A.verna)和磷柄白鹅膏（A.virsa)中含有α-amanitin和β－amanitin两种毒素,二者β－amanitin的含量分别为1861．85μg/g和2477.02μg/g,均高于欧洲产毒鹅膏（A.phalloides)中的含量（1607μg/g）而接近灰花纹鹅膏Amanita fuliginea中的量（2633.80μg/g)。毒鹅膏A.phalloides中含有3种毒素,并且菌蕾中的含量高于成熟子实体,尤其菌蕾中Phalloidin的含量（1113.35μg/g)是灰花纹鹅膏成熟子实体中（432．5μg/g）的3倍。     

我国鹅膏菌新发现种——致命鹅膏(Amanita exitialis)的肽类毒素分析

采用高效液相色谱（HPLC）技术对在广州发现的鹅膏菌新种——致命鹅膏(Amanita exitialis)不同组织部位的肽类毒素(鹅膏毒肽和鬼笔毒肽)的含量进行了分析,结果表明,致命鹅膏是一种剧毒蘑菇,其毒素含量相当高,子实体中组织部位不同,毒素含量以及鹅膏毒肽和鬼笔毒肽在其中的分布也不一样,菌盖中的毒素含量最高,达8152.6μg/g干重,菌柄的毒素含量次之,为3742.3μg/g干重,菌托中的毒素含量最低,只有1142.5μg/g干重;在菌盖、菌柄和菌托中都以鹅膏毒肽为主,尤其以αamanitin的相对含量最高,但从菌盖至菌柄到菌托,鬼笔毒肽尤其是Phallacidin的相对含量依次增加。     

长白山鹅膏菌肽类毒素的HPLC分析*

采用HPLC法对长白山地区分布的10种鹅膏菌中的-鹅膏毒肽(-amanitin)、鹅膏毒肽(-amanitin)和鬼笔毒肽(phalloidin)3种毒素的含量进行了测定。结果表明:白鹅膏(A.verna)和鳞柄白鹅膏(A.virsa)中含有-amanitin和-amanitin两种毒素,二者-amanitin的含量分别为 1861.85g/g和2477.02g/g,均高于欧洲产毒鹅膏(A.phalloides)中的含量(1607g/g)而接近灰花纹鹅膏Amanita fuliginea中的量(2633.80g/g)。毒鹅膏A.phalloides中含有3种毒素,并且菌蕾中的含量高于成熟子实体,尤其菌蕾中Phalloidin的含量(1113.35g/g)是灰花纹鹅膏成熟子实体中(432.5g/g)的3倍。     

长白山鹅膏菌肽类毒素的HPLC分析

采用HPLC法对长白山地区分布的10种鹅膏菌中的-鹅膏毒肽(-amanitin)、鹅膏毒肽(-amanitin)和鬼笔毒肽(phalloidin)3种毒素的含量进行了测定。结果表明:白鹅膏(A.verna)和鳞柄白鹅膏(A.virsa)中含有-amanitin和-amanitin两种毒素,二者-amanitin的含量分别为 1861.85g/g和2477.02g/g,均高于欧洲产毒鹅膏(A.phalloides)中的含量(1607g/g)而接近灰花纹鹅膏Amanita fuliginea中的量(2633.80g/g)。毒鹅膏A.phalloides中含有3种毒素,并且菌蕾中的含量高于成熟子实体,尤其菌蕾中Phalloidin的含量(1113.35g/g)是灰花纹鹅膏成熟子实体中(432.5g/g)的3倍。     

云南楚雄致命鹅膏中环肽毒素的检测与分析

采用反相高效液相色谱法对采自云南楚雄双柏县的致命鹅膏在3个不同生长期中不同部位的6种环肽毒素含量进行了检测和分析。结果表明,致命鹅膏含有α-, β-鹅膏毒肽、羧基三羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽,未检出γ-鹅膏毒肽和二羟鬼笔毒肽。生长期毒素总量最高（9.3mg/g）、从成熟期（7.5mg/g）到衰老期（6.5mg/g）逐渐降低,但鬼笔毒肽的相对含量随着年龄增长而逐渐增加,鹅膏毒肽与鬼笔毒肽比值从生长期、成熟期到衰老期分别为2.6、1.4和0.9。在3个不同发育阶段中,4种毒素含量从菌盖、菌柄到菌托逐渐降低,而鬼笔毒肽的相对含量逐渐增加。α-鹅膏毒肽和β-鹅膏毒肽在生长期菌盖中含量最高,分别为7.4mg/g和3.1mg/g,而羧基三羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽在衰老期的菌盖中含量最高,分别为2.8mg/g和2.1mg/g。     

我国鹅膏菌新发现种--致命鹅膏(Amanita exitialis)的肽类毒素分析

采用高效液相色谱(HPLC)技术对在广州发现的鹅膏菌新种——致命鹅膏(Amanita exitialis)不同组织部位的肽类毒素(鹅膏毒肽和鬼笔毒肽)的含量进行了分析,结果表明,致命鹅膏是一种剧毒蘑菇,其毒素含量相当高,子实体中组织部位不同,毒素含量以及鹅膏毒肽和鬼笔毒肽在其中的分布也不一样,菌盖中的毒素含量最高,达8152．6μg／g干重,菌柄的毒素含量次之,为3742．3μg／g干重,菌托中的毒素含量最低,只有1142．5μg／g干重;在菌盖、菌柄和菌托中都以鹅膏毒肽为主,尤其以α-amanitin的相对含量最高,但从菌盖至菌柄到菌托,鬼笔毒肽尤其是Phallacidin的相对含量依次增加。     

我国28种鹅膏菌主要肽类毒素的检测分析*

利用高效液相色谱(HPLC)技术对产于我国的28种鹅膏菌的主要肽类毒素(鹅膏毒肽和鬼笔毒肽)进行了检测分析,并和采于欧洲(德国)的毒鹅膏Amanita phalloides作对照,结果表明,3种东亚所特有的鹅膏菌(灰花纹鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种)和欧洲毒鹅膏所含毒素种类多、含量高,其子实体菌盖部位主要毒素总量分别达到12583.7μg/g、8152.6μg/g、1058.2μg/g、7456.2μg/g干重子实体,这4种鹅膏菌可称之为剧毒鹅膏菌。其它25种鹅膏菌中有10种检测出含有微量鹅膏毒肽,含量在19.5μg/g-151.2μg/g之间。在4种剧毒鹅膏菌中,子实体组织部位不同,毒素含量以及鹅膏毒肽和鬼笔毒肽在其中的分布也不一样,菌盖中的毒素含量最高,菌柄的毒素含量次之,菌托中的毒素含量最低;对于灰花纹鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种,无论在菌盖、菌柄和菌托中,鹅膏毒肽类毒素的含量都高于鬼笔毒肽类毒素,尤其以α-amanitin的相对含量最高;而在欧洲毒鹅膏中,菌盖、菌柄和菌托中都以鬼笔毒肽为主,尤其以phallacidin的相对含量最高,并且从菌盖至菌柄到菌托,鬼笔毒肽的相对含量依次增加。     

我国28种鹅膏菌主要肽类毒素的检测分析

利用高效液相色谱(HPLC)技术对产于我国的28种鹅膏菌的主要肽类毒素(鹅膏毒肽和鬼笔毒肽)进行了检测分析,并和采于欧洲(德国)的毒鹅膏。Amanita phalloides作对照,结果表明,3种东亚所特有的鹅膏菌(灰花纹鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种)和欧洲毒鹅膏所含毒素种类多、含量高,其子实体菌盖部位主要毒素总量分别达到12583．7μg／g、8152．6μg／g、1058．2μg／g、7456．2μg／g干重子实体,这4种鹅膏菌可称之为剧毒鹅膏菌。其它25种鹅膏菌中有10种检测出含有微量鹅膏毒肽,含量在19．5μg／g—151．2μg/g之间。在4种剧毒鹅膏菌中,子实体组织部位不同,毒素含量以及鹅膏毒肽和鬼笔毒肽在其中的分布也不一样,菌盖中的毒素含量最高,菌柄的毒素含量次之,菌托中的毒素含量最低;对于灰花纹鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种,无论在菌盖、菌柄和菌托中,鹅膏毒肽类毒素的含量都高于鬼笔毒肽类毒素,尤其以α-amanitin的相对含量最高;而在欧洲毒鹅膏中,菌盖、菌柄和菌托中都以鬼笔毒肽为主,尤其以phallacidin的相对含量最高,并且从菌盖至菌柄到菌托,鬼笔毒肽的相对含量依次增加。     

α—鹅膏毒肽和二羟鬼笔毒肽的制备和鉴定

α-鹅膏毒（环）肽和二羟鬼笔毒（环）肽是剧毒的鹅膏菌和其它几种致死毒菌中由一些修饰氨基酸组成的环肽毒素,由于α-鹅膏毒肽对真核生物的mRNA合成的专一性抑制和二羟鬼笔毒肽对肌动蛋白的专一性束缚,因而它们在分子生物学和细胞学研究中具有重要应用,对其需求逐渐增加,为此,作者使用了一种改良的毒素提取方法,以制备高效液相色谱从灰花纹鹅膏菌中分离制备α-鹅膏毒肽和二羟鬼笔毒肽,并通过紫外吸收光谱和质谱进行鉴定,表明α-鹅膏毒肽和二羟鬼笔毒肽的分离效果好,纯度高,本方法对其它毒菌中的α-鹅膏毒肽和二羟鬼笔毒肽的分离制备具有同样的应用价值。     

块磷鹅膏的培养条件及所产Amanitins毒素的分析

采集并组织分离到块磷鹅膏Amanita spissa的纯培养菌丝。探讨了各种培养条件对块磷鹅膏菌丝生长的影响,实验结果表明,在28℃,pH 6.0,避光的条件下块磷鹅膏的菌丝体生长最好。液体反应器人工培养块磷鹅膏获得成功,其液体培养的菌丝体干重在摇瓶中为0.893g/L,在气升式反应器内可达到2.33g/L。固体斜面培养和气升式反应器液体培养的菌丝体的HPLC分析表明菌丝体内含有鹅膏毒肽,而不含有鬼笔毒肽。两种培养条件下菌丝体的-αamanitin毒素含量略有不同,固体斜面菌丝体为26.02μg/gDCW、反应器培养菌丝体为15.25μg/gDCW。通过抑芽法试验也证明固体和液体培养菌丝体中含有-αamanitin,且具有和子实体中-αamanitin相同的生物学活性。结果表明有可能通过液体大规模培养鹅膏菌丝体来生产鹅膏毒素。     

三种鹅膏菌培养条件及所产肽类毒素的比较研究

以外生菌根菌鹅膏菌属三个种Amanita muscaria,A.pseudoporphyria和A.fritillaria为研究材料,以生长速率为评价指标,对其最适生长温度、pH值、光照、培养基、C及N源的利用等基本培养条件及所产肽类毒素进行了比较研究。研究结果表明,三种菌株最适生长温度有差异,A.pseudoporphyria和A.fritillaria的最适温度为28℃,A.muscaria的最适温度为22℃;A.muscaria菌丝体生长的pH值范围为5-7,另外两个菌株的pH值范围为3-6;24h光照、12h光暗交替和24h黑暗对鹅膏菌的生长速率影响不大;SPDM培养基和MMN培养基都适合三种菌株的生长,但对于A.muscaria来说PDM培养基更适合其生长。鹅膏菌能够利用比较广泛的C、N源,但三个种在利用的C、N源种类上有一定的差别。通过抑芽法实验和HPLC分析分别表明三种鹅膏菌所含肽类毒素在种类和含量上有所不同,但都对绿豆发芽有一定的抑制作用。A.pseudoporphyria和A.fritillaria菌丝体中α-amanitin的含量分别为35.56μg/gDCW(drycellweight细胞干重)和26.02μg/gDCW,不含有phalloidin和β-amanitin;A.muscaria菌丝体中没有检测到α-amanitin、β-amanitin和phalloidin。结果表明供试的三种鹅膏菌在基本培养条件及所产肽类毒素方面存在种水平上的差异。     

The effects of aphidicolin and α-amanitin on DNA synthesis in preimplantation mouse embryos

The effects of aphidicolin and α-amanitin on DNA synthesis by preimplantation mouse embryos were studied. It was found that both blastocyst and 8-cell embryos showed marked inhibition of ³H-thymidine incorporation into DNA by aphidicolin at concentrations of 20–50 μg/ml. However, aphidicolin did not inhibit the conversion of morula embryos to blastocyst embryos, although aphidicolin-treated blastocysts lost their blastocoel and collapsed into a compact form after prolonged exposure to the drug. Both 8-cell and blastocyst embryos were found to be susceptible to inhibition of DNA synthesis by α-amanitin.     

Effect of amino acids and α-amanitin on the development of rabbit embryos in modified protein-free KSOM with HEPES

Four experiments were conducted to test the effects of Eagle's non-essential amino acids (NEAA) and essential amino acids (EAA), glycine, and the RNA polymerase inhibitor α-amanitin, on the development of preimplantation rabbit embryos in modified protein-free KSOM medium. Embryos were distributed randomly into different treatments and cultured in 5% O₂:5% CO₂:90% N₂. In experiment 1, 100% of the embryos became blastocysts in the medium with Eagle's IX NEAA and 0.5X EAA, but 100% stopped development at the morula stage in KSOM without amino acids. These morulae failed to develop further when transferred to amino acid supplemented medium after 72 hr of culture. Glycine alone in modified KSOM (experiment 2) was ineffective in supporting development of 8–16-cell stage embryos past the morula stage. In experiment 3, the addition of IX NEAA and 0.5X EAA at 0, 12, 24, 36, and 48 hr of culture resulted, respectively, in 57, 65, 65, 44, and 14% blastocysts on Day 3 (P<0.05) and 86, 77, 77, 78, and 69% on Day 5 (P<0.05). Omission of Eagle's amino acids until 48 hr clearly delayed embryo development. In experiment 4, when α-amanitin (20 μM) was added to the medium containing Eagle's amino acids after 0, 12, 24, 36, and 48 hr of culture most embryos cleaved only once or twice after adding the α-amanitin. Without the inhibitor, 94% of the zygotes developed into blastocysts. These results indicate that modified KSOM or KSOM plus glycine could not support rabbit embryo development past the morula stage, but this block was overcome by adding Eagle's amino acids. An exogenous source of amino acids was not critical for embryo development during the first 24 hr of culture, but was required after that for development to equal controls. Addition of α-amanitin at multiple pre-blastocyst stages limited further embryo development to one or two cleavage divisions, with no blastocyst development. © 1996 Wiley-Liss, Inc.     

Human mutant cell lines with altered RNA polymerase II

A human fibrosarcoma cell line, HT-1080-6TG-9AM, resistant to α-amanitin at concentrations up to 10 μg/ml, was isolated after ethylmethanesulfonate mutagenesis and stepwise selection. The mutation is stable and dominant. RNA polymerase II purified from the mutant cells showed an altered affinity for labeled α-amanitin and the sensitivity of the enzyme to the fungal toxin was decreased 50-to 100-fold. This functional test demonstrated that the biochemical basis for the resistance of the cells to α-amanitin is due to an alteration of RNA polymerase II.     

几种不同鹅膏菌毒素对真核生物RNA聚合酶Ⅱ抑制作用的比较研究

用鹅膏菌属（Amanita）含α-毒伞肽的毒素粗提液培养新鲜绿豆,结果在36小时后,各种不同毒苗的毒素粗提液培养的绿豆生长情况有明显不同,用紫外吸收法测定蛋白质含量,发现毒素粗提液培养的绿豆细胞中蛋白质含量比蒸馏水培养的有明显下降,这表明α-毒伞肽的作用机理的确是通过抑制RNA聚合酶Ⅱ而寻致蛋白质合成减少。