高速逆流色谱法分离纯化灯心草的四个菲类化合物

本研究建立了高速逆流色谱法分离纯化灯心草中四个主要菲类成分effusol、dehydroeffusol、juncusol、dehydrojuncusol的方法。以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,流速2mL/min,主机转速850 rpm,温度25℃,对灯心草经80%乙醇回流提取,乙酸乙酯超声萃取得到的粗提物经高速逆流色谱2次纯化,得到dehydroeffusol、effusol、dehydrojuncusol、juncusol的纯度分别为99.3%、98.5%、98、7%、97.4%。     

高速逆流色谱结合制备液相色谱分离纯化桂枝中化学成分

本文首次采用高速逆流色谱结合高效液相色谱的方法对桂枝正丁醇相进行分离纯化。首先,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(8∶2∶6∶4,v/v)为高速逆流色谱溶剂系统,将桂枝正丁醇萃取相分为两个馏分,然后结合制备高效液相,共分离得到4个高纯度化合物。通过核磁共振波谱鉴定其化学结构,分别为香豆素(1)、反式-邻甲氧基桂皮酸(2)、桂皮酸(3)、反式-桂皮醛(4),这四种化合物纯度经高效液相检测均大于95%。该方法简便、快速、节省溶剂,可以对桂枝正丁醇相进行快速有效的分离纯化,具有较好的实用价值,为桂枝资源的进一步开发应用提供了技术和物质支持。     

高速逆流色谱分离真菌Aspergullus versicolor中二苯醚类化合物

首次运用高速逆流色谱(HSCCC)技术从经表观遗传试剂诱导的曲霉属真菌Aspergullus versicolor的次级代谢产物中快速分离纯化得到二苯醚类化合物diorcinol,建立了快速分离制备杂色曲霉次级代谢产物中的二苯醚类化合物的方法。本研究首先对经过表观遗传试剂诱导的菌株DJ013的发酵液用乙酸乙酯浸提,萃取富集二苯醚类成分,然后以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(4∶5∶4∶5,v/v)为两相溶剂系统进行高速逆流色谱分离纯化,上相为固定相,下相为流动相,流速5.0 m L/min,实验温度25℃,转速为800 rpm,检测波长为220 nm。对所得到的目标化合物经超高效液相色谱(UPLC)纯度分析,其纯度在97%以上。通过质谱、核磁等波谱技术鉴定所分离得到的目标化合物为二苯醚类化合物diorcinol。与前期研究中采用的柱色谱法、HPLC等多种方法相结合的长达48 h的制备周期相比,高速逆流色谱法仅需55 min,效率大大提高。该结果表明,本研究建立的高速逆流色谱方法可高效高纯度获得具有抗菌活性的二苯醚类化合物,将为二苯醚化合物的进一步研究提供高效制备方法。     

高速逆流色谱技术分离纯化红葱中的萘醌类化合物

采用高速逆流色谱(HSCCC)技术从红葱中快速分离纯化得到红葱乙素和异红葱乙素,建立了快速分离制备红葱中萘酚类化合物的方法。首先采用95%乙醇加热回流提取得红葱提取物,再用乙酸乙酯萃取富集萘醌类成分,然后用高速逆流色谱分离纯化,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(6∶4∶5∶5,v/v)组成二元溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,仪器转速为850 rpm,流速为2.0 m L/min,检测波长为254 nm。从200 mg富集萘醌类成分的粗提物中,一次性分离制备得到60 mg异红葱乙素和49 mg红葱乙素,经高效液相色谱法(HPLC)分析,其纯度分别为97.3%和98.6%。通过核磁共振氢谱(~1H NMR)和核磁共振碳谱(~(13)C NMR)鉴定化合物为红葱乙素和异红葱乙素。研究结果表明,该方法快速、高效,适用于红葱中萘酚类化合物的分离纯化。     

高速逆流色谱分离纯化钩吻中钩吻素甲

采用高速逆流色谱法,分别以正己烷-乙酸乙酯-无水乙醇-水(3∶3∶2∶3 V/V)和氯仿-甲醇-0.2 mol/L盐酸(4∶3∶1.5 V/V)为溶剂体系,从300 mg钩吻总碱中分离纯化出一种钩吻生物碱单体30.78 mg,高效液相色谱技术分析其质量分数为97.76%,核磁共振谱、质谱分析确证其为钩吻素甲;通过小鼠醋酸扭体法检测,表明钩吻总碱和钩吻素甲对小鼠均具有显著的镇痛活性。高速逆流色谱技术可高效分离纯化具有镇痛活性的钩吻素甲。     

高速逆流色谱分离制备甘草中的甘草苷和芒柄花苷

应用高速逆流色谱分离制备甘草中的甘草苷和芒柄花苷。将甘草乙酸乙酯提取物经聚酰胺柱粗分后,30%乙醇洗脱物用高速逆流色谱进一步分离,所用两相溶剂系统为乙酸乙酯-水(5∶5,v/v),转速850 rpm,流速2.0 mL/min,检测波长254 nm,从50 mg30%乙醇洗脱物中得到甘草苷8.7 mg、芒柄花苷4.2 mg,纯度分别为99.5%和97.3%。所得产物的结构经核磁共振谱(NMR)鉴定。利用该方法可以对甘草中的甘草苷和芒柄花苷进行快速的分离和纯化。     

高速逆流色谱分离纯化雷公藤中的雷公藤红素

以雷公藤植物粗提物为原料,建立了高速逆流色谱分离纯化雷公藤红素的分离纯化方法。优化了两相溶剂体系的组成及配比。优化后的分离纯化溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水,其体积之比为2∶3∶3∶2(上相为固定相,下相为流动相),实验温度为室温,主机转速为800 rpm,正向洗脱,流动相流速为2.0 m L/min。目标产物的分离时间较短、产品纯度高(97.5%)、分离过程稳定。     

黄连中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选分离及质谱分析

为筛选黄连中α-葡萄糖苷酶抑制剂,本研究采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-DAD-MS)对黄连提取物中的化学成分进行分析鉴定,并采用高速逆流色谱分离其中的活性成分。选用反相C18色谱柱,以0.02%醋酸溶液(A)和甲醇(B)为流动相,进行梯度洗脱;利用电喷雾质谱(ESI-MS)正离子模式在线检测化学成分;以α-葡萄糖苷酶作为生物靶分子,以超滤质谱技术筛选酶抑制剂。再经高速逆流色谱分离纯化,以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水(3.0∶1.7∶0.5∶6.0,v/v/v/v)为两相溶剂系统,所得分离收集液经高效液相色谱法检测。实验通过HPLC-DAD-MS共鉴定出5个化学成分,分别为药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马亭和小檗碱。通过HSCCC分离得到两种α-葡萄糖苷酶抑制剂巴马亭和小檗碱。利用液相色谱-超滤-质谱-高速逆流色谱联用技术可以快速分离鉴定黄连中的化合物。此方法对于筛选有效成分具有快速和灵敏等优势。     

聚酰胺色谱结合高速逆流色谱分离制备萹蓄黄酮类化合物

采用聚酰胺色谱结合高速逆流色谱法分离纯化了萹蓄中3种黄酮类化合物,建立了快速分离制备萹蓄中3种黄酮类化合物的方法。通过聚酰胺柱色谱富集黄酮类成分,再经过高速逆流色谱分离,以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(体积比为4∶1∶5∶0.1)组成的二相系统作为固定相与流动相,在主机转速为850 rpm,流速为2.0m L/min,检测波长为254 nm的条件下制备样品。从150 mg富集黄酮成分的馏分中,一次性分离制备得到纯度为94.86%的杨梅树皮苷(myricitrin)7.5 mg,94.28%的黄芪苷(astragalin)13.8 mg,91.86%的合欢草素1(desmanthin-1)20.6 mg。所得馏分经高效液相色谱法(HPLC)检测纯度,并经MS和NMR鉴定化合物的结构。该方法简便、快速,所得产物纯度高,适合于黄酮类化合物的制备分离。     

高速逆流色谱法从白芍中分离纯化五没食子酰基葡萄糖

本文建立高速逆流色谱(HSCCC)方法,从白芍粗提物中分离纯化五没食子酰基葡萄糖.分别采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体积比0.5∶5∶1∶5及0.5∶5∶0.5∶5混合溶剂作为两相溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,转速为800 rpm,流速为2.0 mL/min,用HPLC检测及ESI-MS进行验证.经过两次HSCCC分离纯化,得到五没食子酰基葡萄糖纯度为95.7％.     

离子液体优化高速逆流色谱法分离槐花中的黄酮类化合物

应用高速逆流色谱法首次从槐花中一步分离出2种黄酮类化合物,并利用离子液体提高分离效果。以正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水-冰醋酸(1∶1∶1∶1∶0.05,v/v)为两相溶剂体系,从50 mg槐花粗提物中一步分离得到芦丁18.2 mg,槲皮素9.6 mg,其纯度均在97%以上。加入离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟化硼酸([BMIM][PF6]),使出峰时间由原来的85 min提前到55 min,分离度由0.9提高到1.8,达到完全分离,分离效果得到明显提高,为离子液体在高速逆流色谱中的进一步应用提供依据。     

应用高速逆流色谱分离桑枝酚类成分

建立了高速逆流色谱(HsCCC)分离制备高纯度的桑枝酚类成分的新方法.分离条件如下:溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇冰(1∶1∶1∶2,v/v),上相为固定相,下相为流动相;流速2.0 mL/min;转速900rpm;进样量75 mg.收集得到三个高纯度化合物,经HPLC、MS、1H和13C NMR等分别鉴定为反式氧化白藜芦醇(25.2mg),反式白藜芦醇(7.4 mg)和桑辛素M(29.1 mg).高速逆流色谱可以高效分离桑枝成分,方法简便,技术可行,优于传统的柱色谱法.     

高速逆流色谱法分离纯化茶黄素

首次应用高速逆流色谱法分离纯化茶黄素单体成分,溶剂系统为乙酸乙酯－正己烷－甲醇－水（３：１：１：６）,优化了分离茶黄素的条件。同时与ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０柱色谱法梯度洗脱对比,结果表明,高速逆流色谱法分离时间相对较短,可进行较大量的分离制备。高速逆流色谱法较之ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０柱色谱法还有一个突出的优点,即无不可逆吸附污染及不会导致样品化学变性。     

高速逆流色谱结合半制备液相色谱制备甘青青兰中3种活性成分

采用高速逆流色谱（HSCCC）结合液相色谱法制备甘青青兰（Dracocephalum tanguticum Maxim.）中绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯、迷迭香酸,建立快速分离制备甘青青兰中活性成分的方法。采用半制备型高效液相色谱（SP-HPLC）富集甘青青兰乙酸乙酯萃取物中绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯、迷迭香酸,再用制备液相（Pre-HPLC）和HSCCC对富集物进行分离纯化,获得54 mg化合物Ⅰ、130 mg化合物Ⅱ和200 mg化合物Ⅲ,纯度分别为96.9%、97.9%和95.1%,经核磁共振碳谱（¹³CNMR）和氢谱（¹HNMR）分别鉴定为绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯和迷迭香酸。本实验方法适用于甘青青兰乙酸乙酯萃取物中绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯和迷迭香酸的分离制备,并避免了传统分离方法操作繁多、试剂消耗量大、不可回收等弊端,为分离甘青青兰活性成分、制备对照品等研究提供了参考依据。     

高速逆流色谱法分离凤尾草中的芹菜素和木犀草素

建立了高速逆流色谱分离纯化芹菜素和木犀草素的方法。两相溶剂系统为氯仿-甲醇-水（4：3：2）,上相为固定相,下相为流动相进行洗脱。从100mg粗提物中一步分离得到17．0mg芹菜素和22．5mg木犀草素,经高效液相色谱分析,纯度分别为92％和96％。其化学结构由1H和13CNMR鉴定。     

蜡蚧轮枝菌VL17中杀虫成分分离及鉴定北大核心CSCD

蜡蚧轮枝菌（Verticilliumlecanii）VL17菌株是从罹病的蚜虫中分离得到的一种具有高效杀虫活性的内生真菌。根据生物活性跟踪测试,采用不同溶媒萃取法、硅胶柱分离法、高速逆流色谱法、半制备高效液相分离纯化法,从该菌株的代谢产物中筛选出具有杀蚜虫的有效成分。实验结果表明：经察氏液体培养基培养采用乙酸乙酯提取获得粗毒素对萝卜蚜若蚜的毒杀活性最好;该提取物经HSCCC、HPLC分离纯化后收集到4个馏分,其中馏分Ⅲ对萝卜蚜的防治效果最佳,LC50值为0．4748mg／mL;馏分Ⅲ通过IR、MS初步鉴定推测结果为羧酸酯类化合物,分子量约为437。     

高速逆流色谱仪分离纯化芦荟多糖的研究

采用紫外-可见分光光度计法进行了高速逆流色谱技术分离芦荟多糖的溶剂系统研究,得出了高速逆流色谱分离芦荟多糖的溶剂系统为w(PEG600)∶w(KH2PO4)∶w(K2HPO4)∶w(H2O)=5∶15∶15∶65,加入NaCl的质量分数为2%。在水浴温度30℃,转速600 r/min,下相流速为2 mL/min的条件下,采用高速逆流色谱技术成功分离出芦荟多糖粗品,得到APS-1和APS-2两个组分,经Sephadex G-100凝胶柱层析技术和高效凝胶渗透色谱技术初步分析:APS-1和APS-2均为单一组分。     

高速逆流色谱制备玫瑰红景天中的三种酚性化合物

采用高速逆流色谱方法(HSCCC,High-speed Counter-current Chromatography)同时分离三种玫瑰红景天酚性化合物。玫瑰红景天提取物经聚酰胺吸附多酚后经硅胶柱分级得预分离样品,采用正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(4∶5∶4∶5,v/v/v/v)组成的两相溶剂系统对预分离样品进行分离纯化,一次进样150 mg,一次色谱分离得到化合物1:68.5 mg、化合物2:8.5 mg、化合物3:45.5 mg,纯度都超过98%。通过ESI-MS、1H NMR对其结构进行鉴定化合物1为没食子酸(Gallic acid),化合物2为没食子酸甲酯(Methyl gallate),化合物3为山奈酚(Kaempferol)。结果表明利用HSCCC可以成功分离三种酚性化合物,分离效果好,产品纯度高。     

高速逆流色谱法分离制备丹酚酸B

采用高速逆流色谱法分离纯化丹参水溶性成分丹酚酸类物质,制备丹酚酸B化学对照品。分离采用的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-水-甲醇(1.5:5:5:1.5),上相做固定相,下相做流动相,流速为1.7 mL/min,仪器转速850 rpm,进样量80 mg,纯度用HPLC方法测定。结果表明:一次分离可制备63.4 mg丹酚酸B,其纯度为98.6%。该方法操作简单,可作为高纯度丹酚酸B化学对照品的制备分离方法。     

高速逆流色谱法分离灵芝中的灵芝烯酸B

本实验建立一种快速从灵芝子实体中制备灵芝烯酸B的方法。以沪农灵芝1号子实体乙醇提取物为原料,经过D101大孔树脂粗分,用60%乙醇洗脱后,采用高速逆流色谱对获得的灵芝酸性三萜进行分离制备。确定最佳溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（V/V/V/V,5:5:2:9）,上相作为固定相,下相作为流动相,单因素法和正交实验设计确定高速逆流色谱法分离灵芝烯酸B的最佳工艺为：流速2.0mL/min,转速900r/min,一次上样量为500mg时,制备得到灵芝烯酸B化合物得率为(9.07±0.16)%,纯度为(85.04±3.45)%。用质谱、核磁对得到的灵芝烯酸B进行了结构鉴定。此法操作简单高效,为大量制备灵芝烯酸B提供了参考。