芬戈莫德通过鞘氨醇-1-磷酸信号通路抑制肝癌细胞迁移的实验研究

目的 探讨鞘氨醇-1-磷酸(SIP)信号通路及其抑制剂芬戈莫德(FTY720)在体外实验中对不同侵袭潜能人肝细胞癌(HCC)细胞迁移能力的作用。方法通过Real-time PCR和免疫印迹的方法比较低侵袭潜能HCC细胞MHCC-97L和高侵袭潜能HCC细胞MHCC-97H中S1P信号通路关键分子及下游促迁移信号通路的表达与活性水平。使用外源性S1P刺激MHCC-97L细胞,并使用siRNA干扰MHCC-97H细胞中S1P受体1(S1PR1)的表达,通过划痕愈合实验和Transwell实验检测HCC细胞迁移能力的变化。最后使用FTY720处理MHCC-97H细胞,观察S1P及其下游信号通路表达及活性的变化,并研究FTY720对MHCC-97H细胞迁移能力的影响。两组间数据比较采用t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析。结果高侵袭潜能MHCC-97H细胞中,S1PR1、鞘氨醇激酶1(SphK1)及鞘氨醇激酶2(SphK2)的相对表达量分别为5.94±0.78、1.64±0.30及1.48±0.28,高于低侵袭潜能MHCC-97L细胞的1.00±0.06、1.00±0.06及1.00±0.09,差异具有统计学意义(t=10.96,3.575,2.841;P均0.05)。MHCC-97H细胞中S1PR1、SphK1及SphK2的蛋白表达水平及活性以及S1PR1下游与细胞迁移能力密切相关的Src、粘着斑激酶(FAK)和Janus激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路活性明显高于MHCC-97L细胞。外源性S1P可促进MHCC-97L细胞的划痕愈合能力。MHCC-97L的Transwell细胞迁移实验显示:S1P刺激组迁移过膜细胞数为(178.33±10.01)个/视野,显著多于空白对照组的(88.00±8.54)个/视野,差异具有统计学意义(F=116.60,P0.01)。相反的,使用siRNA干扰MHCC-97H细胞中S1PR1表达后,细胞的划痕愈合能力受到明显抑制,Transwell实验显示:阴性对照组迁移过膜细胞数为(209.33±4.51)个/视野,而S1PR1特异性siRNA转染组迁移过膜细胞数为(98.67±9.02)个/视野,显著少于阴性对照组,差异具有统计学意义(t=19.01,P0.01)。FTY720作为S1P通路抑制剂,同样抑制了MHCC-97H细胞的划痕愈合能力,Transwell实验同样显示:FTY720处理组迁移过膜细胞数为(58.67±6.03)个/视野,显著少于对照组的(203.33±10.41)个/视野,差异具有统计学意义(t=20.833,P0.01)。FTY720的作用机制可能在于通过下调SphK1和S1PR1,抑制下游促迁移信号通路的活性,并进一步抑制HCC细胞的迁移。结论 S1P信号通路参与了HCC细胞的迁移,而FTY720作为一种具有抗HCC活性的免疫抑制剂,可能通过下调S1P及其下游信号转导,抑制HCC细胞的迁移能力。     

RNA干扰技术下调营养缺乏自噬因子1表达对肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的采用RNA干扰手段抑制营养缺乏自噬因子1(NAF1)在肝细胞癌MHCC-97H细胞中的表达,观察其对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。方法采用NAF1-si RNA和空白对照NC-si RNA转染肝细胞癌MHCC-97H细胞,设为NAF组和NC组,同时设立未转染空白对照组(Blank组)。荧光实时定量PCR法检测MHCC-97H细胞NAF1m RNA表达。Western blotting法检测MHCC-97H细胞NAF蛋白和基质金属蛋白酶9(MMP9)蛋白表达。细胞划痕实验检测MHCC-97H细胞迁移能力。Transwell实验检测MHCC-97H细胞侵袭能力。荧光素酶报告基因实验检测MHCC-97H细胞核因子κB(NF-κB)信号通路的相对活性。多组间数据的比较用单因素方差分析,两组之间数据的比较采用t检验。结果 NAF组MHCC-97H细胞NAF1-m RNA的相对表达量为(6.50±0.23)﹪,低于Blank组的(100.80±0.60)﹪,且差异具有统计学意义(t=14.17,P=0.02)。NAF组MHCC-97H细胞NAF1蛋白和MMP9蛋白的相对表达量分别为0.12±0.01、0.07±0.01,均低于Blank组的0.79±0.05、0.81±0.02,且差异均有统计学意义(t=5.21、7.45,P=0.00、0.02)。NAF组MHCC-97H细胞的迁移距离明显小于Blank组。NAF组穿膜细胞的数量为(11.28±1.56)个/视野,少于Blank组的(197.87±3.18)个/视野,且差异有统计学意义(t=7.97,P=0.00),NAF组NF-κB信号通路的相对活性值3.25±0.53明显低于Blank组的26.69±7.41,差异具有统计学意义(t=13.33,P=0.01)。结论采用RNA干扰手段抑制NAF1的表达可能成为抑制肝细胞癌侵袭转移的有效手段。     

丹参酮ⅡA联合CASC2对甲状腺癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响固有淋巴细胞在脂质代谢中的研究进展

为了研究丹参酮ⅡA联合长链非编码RNA(lnc RNA)癌易感性候选基因2(CASC2)对甲状腺癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响,该研究采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测CASC2在甲状腺癌组织中的表达。将甲状腺癌SW579细胞分为pc DNA3.1组(转染pc DNA3.1质粒), pc DNA3.1-CASC2组(转染pc DNA3.1-CASC2质粒), con组(用与丹参酮ⅡA等量的二甲基亚砜处理),药物-1、2、3、4组(分别用1、2、4、8μg/m L丹参酮ⅡA处理),药物-4+pc DNA3.1组(转染pc DNA3.1质粒且用8μg/m L丹参酮ⅡA处理),药物-4+pc DNA3.1-CASC2组(转染pc DNA3.1-CASC2质粒且用8μg/m L丹参酮ⅡA处理)。分别用细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆检测细胞存活与克隆形成;流式细胞术检测细胞凋亡; Transwell检测细胞迁移、侵袭;蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白P21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达。结果显示,与癌旁组织相比,甲状腺癌组织中的CASC2表达量显著降低(P0.05)。过表达CASC2明显降低SW579细胞的存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数和MMP-2蛋白表达量,显著提高细胞凋亡率、P21、Caspase-3、E-cadherin蛋白表达量(P0.05)。丹参酮ⅡA明显降低SW579细胞的存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白水平,显著提高细胞凋亡率、P21、Caspase-3、E-cadherin蛋白表达水平,且均呈浓度依赖性(P0.05)。丹参酮ⅡA联合CASC2明显降低SW579细胞的存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白表达量,显著提高细胞凋亡率、P21、Caspase-3和E-cadherin蛋白水平(P0.05)。因此,丹参酮ⅡA联合CASC2可以抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,以及诱导细胞凋亡。     

瓜蒂醇提物通过调控Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞Hep3B恶性生物学行为的影响

该文探讨了瓜蒂醇提物对肝癌细胞Hep3B增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。肝癌细胞Hep3B被分为NC组、不同浓度瓜蒂醇提物(1.0、5.0、10.0、20.0μg/mL)组、LiCl组、20.0μg/mL瓜蒂醇提物+LiCl组。采用CCK-8法检测细胞活性;克隆形成实验检测Hep3B细胞克隆形成数量;流式细胞术检测Hep3B细胞的凋亡情况;蛋白质印迹法检测蛋白表达情况; Transwell检测Hep3B细胞的迁移和侵袭数。不同浓度瓜蒂醇提物处理Hep3B细胞后, Hep3B细胞的活性降低,克隆数量以及迁移侵袭数减少, Hep3B细胞的凋亡率升高, Cleaved-caspase-3表达水平升高, procaspase-3、MMP2、MMP9表达水平降低, Wnt3a、cyclinD1、c-myc、核β-catenin蛋白表达水平降低,APC和质β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl可以逆转瓜蒂醇提物对Hep3B细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。瓜蒂醇提物通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制Hep3B...     

水苏碱调节CXCL12/CXCR4轴对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

该研究主要探讨水苏碱(STA)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响以及对CXCL12/CXCR4轴的调节机制。将EC细胞分为对照组(Control组)、CXCL12/CXCR4抑制剂组(AMD 3100组)、STA-L组(STA-L)、STA-H组(STA-H)、STA-H+CXCL12组。采用CCK-8检测细胞增殖情况;克隆形成实验检测细胞克隆能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况; Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力; Western blot检测细胞中上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、CXCL12、CXCR4蛋白的表达情况;建立小鼠EC移植瘤模型并观察各组小鼠的肿瘤生长情况。结果发现与Control组相比, AMD 3100组和STA处理组细胞增殖活性、克隆数量、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达水平降低,细胞凋亡率和E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05);与STA-H组相比, STA-H+CXCL12组细胞的增殖活性、克隆数量、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、C...     

miR-374b-5p靶向调控UHMK1对前列腺癌PC-3细胞的影响

[目的]探讨miR-374b-5p调控UHMK1表达对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移及凋亡的作用。[方法]萤光霉素报告检测miR-374b-5p对UHMK1的调控作用,将miR-NC、miR-374b-5p inhibitor和miR-374b-5p mimic转染到前列腺癌PC-3细胞。采用CCK-8法检测细胞存活率,改良的Matrigel Boyden室测定对细胞的侵袭性实施检测,划痕实验对细胞的具体迁移力实施检测,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-qPCR检测miR-374b-5p和UHMK1 mRNA表达,Western Bloting检测UHMK1蛋白表达。[结果]与对照组比较,miR-374b-5p inhibitor组细胞存活率、迁移率、侵袭数、miR-374b-5p表达水平、UHMK1 mRNA表达和蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05);miR-374b-5p mimic组细胞存活率、迁移率、侵袭数、miR-374b-5p表达水平、UHMK1 mRNA表达和蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与miR-374b-5p ...     

沉默lncRNA PCAT1调控miR-128表达增强肺癌H1299细胞放射敏感性

[目的]探讨LncRNA PCAT1调控miR-128对肺癌H1299细胞放射敏感性的影响。[方法]用LncRNA PCAT1阻断剂处理或不处理肺癌H1299细胞,根据放射剂量的不同将细胞分为空白对照组(0Gy)、低剂量组(2Gy)、中剂量组(4Gy)和高剂量组(8Gy)。采用RT-qPCR检测各组细胞LncRNA PCAT1、miR-128表达水平,CCK-8法检测细胞存活率,transwell实验检测细胞侵袭力,划痕实验检测细胞迁移力,流式细胞术检测细胞凋亡率。[结果]空白对照组及各放射剂量组肺癌H1299细胞使用阻断剂后LncRNA PCAT1表达显著降低,miR-128显著升高(P<0.05)。与空白对照组比较,低、中、高剂量组肺癌H1299细胞存活率、迁移率和侵袭力显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。使用阻断剂后各剂量组细胞存活率、迁移率和侵袭力均显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。[结论]沉默lncRNA PCAT1可上调miR-128表达来增强肺癌H1299细胞的放射敏感性。     

舒芬太尼通过调控LncRNA PSMA3-AS1对结肠癌SW1116细胞增殖、迁移及侵袭的影响

该文旨在探讨舒芬太尼对结肠癌SW1116细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。体外培养人结肠癌细胞SW1116,并将其随机分组:对照组、低舒芬太尼组、中舒芬太尼组、高舒芬太尼组、si-NC组、si-LncRNA PSMA3-AS1组、高舒芬太尼+pcDNA组、高舒芬太尼+pcDNA-LncRNA PSMA3-AS1组。CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖; Transwell检测细胞迁移及侵袭; qRT-PCR法检测LncRNA PSMA3-AS1表达水平; Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达。低、中、高舒芬太尼处理或下调LncRNA PSMA3-AS1表达后,结肠癌SW1116细胞存活率、LncRNA PSMA3-AS1表达量和N-cadherin水平降低(P<0.05),细胞克隆形成数、迁移、侵袭细胞数减少(P<0.05), E-cadherin水平升高(P<0.05);上调LncRNA PSMA3-AS1表达可导致高舒芬太尼对结肠癌SW1116细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭的影响降低。舒芬太尼可通过下调LncR...     

铁死亡相关基因ACSL4、TFRC及Hippo通路关键分子YAP在间皮瘤组织中的表达及意义

摘要 目的：分析铁死亡相关基因长链酯酰辅酶A合成酶4（acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4）、转铁蛋白受体（transferrin receptor, TFRC）及Hippo通路关键分子Yes相关蛋白（Yes-associated protein,YAP）在间皮瘤组织中的表达水平、相关性及意义,观察YAP活化对间皮瘤细胞系211H侵袭转移能力及铁死亡敏感性的影响。方法：应用组织芯片技术和免疫组化法观察ACSL4、TFRC及YAP在30例间皮瘤组织和10例正常组织中的表达,分析蛋白水平及分布的相关性。GEPIA数据库分析基因ACSL4、TFRC和YAP在间皮瘤组织中的mRNA水平相关性。应用逆转录病毒载体于211H细胞中过表达活化型YAP S127A (serine-127突变为alanine),利用实时荧光定量PCR检测ACSL4及TFRC表达;利用划痕实验和transwell侵袭实验检测211H细胞迁移及侵袭能力;利用erastin刺激及SYTOX Green染色检测铁死亡敏感性。结果：间皮瘤组织中YAP细胞核表达、ACSL4及TFRC阳性表达率显著高于正常组织,差异均有统计学意义（P<0.001,P<0.001,P<0.0001）。经Spearman秩相关检验,ACSL4及TFRC蛋白在间皮瘤中的表达呈正相关(Spearman r=0.61,P=0.0003);YAP在细胞核中的表达与ACSL4表达呈正相关(Spearman r=0.4872,P=0.0063)。GEPIA 数据库分析发现,YAP与ACSL4、ACSL4与TFRC在间皮瘤中的mRNA表达水平均呈正相关（Spearman r=0.33, P=0.0019;Spearman r=0.52,P=0.0000）。表达活化型YAP的211H细胞,ACSL4与TFRC mRNA水平与对照细胞相比均上调;迁移侵袭能力增强;铁死亡敏感性增强。结论：YAP、ACSL4及TFRC在间皮瘤组织中表达具有正相关性;YAP活化促进间皮瘤细胞侵袭转移能力,同时通过ACSL4及TFRC提高细胞对铁死亡诱导的敏感性。YAP、ACSL4及TFRC有望成为预测间皮瘤铁死亡敏感性的潜在生物学标志物。     

EGFR/AKT信号转导通路在调控结肠癌LoVo细胞生物学行为中的作用研究

目的:探讨EGFR/AKT(表皮生长因子受体/蛋白激酶B)信号转导通路在调控人结肠癌细胞株LoVo生物学行为中的作用机制.方法:用EGFR抑制剂AG1478处理人结肠癌细胞LoVo;用免疫细胞化学法检测p-EGFR及p-AKT蛋白表达;用MTT法检测细胞的增殖;用流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;用Transwell小室观察体外细胞迁移能力;用Transwell小室结合Matrigel胶检测肿瘤细胞侵袭能力.结果:AG1478(20μmol/L)处理后p-EGFR及p-AKT的表达水平明显降低(P<0.05),细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05),细胞凋亡水平明显提高(P<0.05),结论:EGFR与人结肠癌细胞LoVo的增殖、凋亡、迁移和侵袭性密切相关,并可能通过AKT信号转导通路调控人结肠癌的发展.     

余甘子提取物调控LINC01772/miR-153对肺癌细胞A549生物学行为的影响

摘要 目的：探讨余甘子提取物对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法：体外培养A549细胞,分为对照组、不同剂量（低、中、高剂量）余甘子提取物组、si-NC组、si-LINC01772组、高剂量余甘子提取物+pcDNA组和高剂量余甘子提取物+pcDNA-LINC01772组,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,嵌入式细胞共培养法（Transwell）检测细胞侵袭,免疫印迹法（Western Blot）检测细胞中上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）和神经型钙黏蛋白（N-cadherin）蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测LINC01772和miR-153表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01772和miR-153调控关系。结果：与对照组相比,不同剂量余甘子提取物组A549细胞中LINC01772表达降低,且光密度值（OD值）、克隆形成数、迁移以及侵袭细胞数减少（P<0.05）,而miR-153含量与E-cadherin蛋白表达升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性（P<0.05）。LINC01772在A549细胞中负调控miR-153表达。与si-NC组相比,si-LINC01772组A549细胞增殖,侵袭及迁移能力受到抑制（P<0.05）。与高剂量余甘子提取物+pcDNA组相比,高剂量余甘子提取物+pcDNA-LINC01772组A549细胞增殖,侵袭及迁移能力增强（P<0.05）。结论：余甘子提取物可能通过调控LINC01772/miR-153轴抑制肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭,其可能通过下调LINC01772进而上调miR-153表达发挥作用,具有开发为治疗肺癌药物的潜在价值。     

miR-155对人肝癌细胞系SK-HEP-1及MHCC-97H增殖与浸润能力的影响

目的:在肝癌细胞系SK-HEP-1及MHCC-97H中过表达mi R-155,研究其对肝癌细胞增殖能力的影响。方法:将pc DNA3.0-mi R-155表达载体瞬时转染SK-HEP-1及MHCC-97H肝癌细胞系,通过实时定量PCR技术检测mi R-155在转录水平的表达;采用CCK8法及克隆形成实验检测mi R-155过表达后对SK-HEP-1及MHCC-97H肝癌细胞系增殖的影响;采用Transwell实验探讨mi R-155过表达后对肿瘤细胞浸润能力的影响。结果:实时定量PCR检测结果显示,转染SK-HEP-1及MHCC-97H细胞后72 h,成熟mi R-155表达分别上调约424±48.5倍及63.69±7.8倍,表明mi R-155在肿瘤细胞内得到高表达;CCK8法及克隆形成实验结果显示,mi R-155能够明显促进肝癌细胞增殖(P0.01);Transwell实验证明mi R-155明显促进MHCC-97H肿瘤细胞的浸润能力。结论:mi R-155在肝癌细胞中的高表达能够明显促进肝癌细胞增殖与浸润,提示其有可能在肝癌的发生发展中发挥重要作用。     

靶向Wnt信号的溶瘤腺病毒抑制肝癌干细胞研究

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球第五大癌症并成为癌症死亡的主要原因,传统治疗早期肝癌取得了一定的进展,但是癌症的复发、转移和耐药仍未得到根本解决,这些现象可通过癌症干细胞理论(cancer stem cell,CSC)进行解释.本研究通过悬浮富集培养的方法,获得了MHCC-97H细胞的三维立体球细胞(sphere cell),并检测其干细胞特性,通过删除5型腺病毒的E1A CR2区域24 bp碱基,并用Wnt活性转录元件TCF/TEF调控E1A基因表达,同时插入抗癌基因TSLC1,得到了双靶向溶瘤腺病毒Ad.wnt-E1A(△24 bp)-TSLC1,通过MTT、结晶紫染色实验、Hoechst、细胞划痕、蛋白质印迹技术、Transwell及免疫荧光技术检测重组病毒对肝癌类干细胞的EMT(epithelial-mesenchymal transition)转化、杀伤、凋亡以及迁移的作用.结果表明,悬浮富集培养的MHCC-97H sphere细胞具有自我更新、分化能力、静息性以及耐药性,高表达肝癌干细胞表面标志物(如CD133等),重组病毒处理后表现出明显的杀伤效果及抑制细胞迁移与侵袭的特性,靶向抑制MHCC-97H sphere细胞能力更强(P0.001),且重组病毒能有效诱导肝癌类干细胞通过caspase途径发生凋亡.因此,重组病毒Ad.wnt-E1A(△24 bp)-TSLC1有可能成为靶向肝癌干细胞的治疗药物,具有一定的临床应用前景.     

骆驼蓬碱通过LOXL1-AS1影响卵巢癌细胞CAOV3增殖、凋亡、迁移侵袭

该研究探讨了骆驼蓬碱对卵巢癌细胞CAOV3增殖、凋亡、迁移侵袭的影响及分子机制.卵巢癌细胞CAOV3分为对照组,骆驼蓬碱低、中、高剂量组,si-NC组,si-LOXL1-AS1组,骆驼蓬碱高剂量+pcDNA组,骆驼蓬碱高剂量+pcDNA-LOXL 1-AS 1组.用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率;平板克...     

2’-羟基二氢黄酮诱导白血病HL-60细胞凋亡过程中抗氧化酶活性的变化

目的：观察2’-羟基二氢黄酮诱导白血病细胞HL-60凋亡过程中胞内抗氧化酶活性的变化,并探讨其抗肿瘤作用机制。方法：采用CASY-TT亚流式细胞术测定2’-羟基二氢黄酮对HL-60细胞存活率的影响;Annexin V／PI双染流式细胞仪检测分析细胞凋亡变化;化学比色法测定2’-羟基二氢黄酮作用后,HL-60细胞胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH—Px的活性变化。结果：2’-羟基二氢黄酮显著降低HL-60细胞存活率,其作用呈剂量和时间依赖性;凋亡分析结果显示,20μM的2’一羟基二氢黄酮作用HL-60细胞后,细胞凋亡率逐渐升高,并在12h后显著高于作用前水平;酶活性检测表明,20μM2’一羟基二氢黄酮作用后,HL-60细胞胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH．Px活性均显著降低,脂质过氧化产物MDA含量显著升高。结论：2’-羟基二氢黄酮显著降低白血病HL广60细胞存活率并诱导细胞凋亡,其中伴随着胞内抗氧化酶活性的显著降低。     

紫草素逆转埃克替尼对肺癌EGFR-TKI 耐药及其机制的研究

目的:观察紫草素联合埃克替尼对肺腺癌耐药细胞H1975增殖的影响,探讨克服耐药可能的作用机制。方法:应用MTT法检测紫草素(1.25~20μmo/L)、埃克替尼(5~100μmol/L)及两药联合干预对H1975细胞生长的抑制作用;流式细胞术观察紫草素(1.25μmol/L)、埃克替尼(10μmol/L)及联合使用对H1975凋亡作用;Western blot检测不同干预对H1975细胞EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT、ERK、p-ERK和凋亡相关蛋白PARP表达水平的影响。结果:MTT检测结果显示,与单药组相比,联合用药组细胞H1975增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P0.05);流式细胞术结果显示,联合用药组细胞的凋亡率达到(52.45±3.04)%,较紫草素组细胞凋亡率(22±1.17)%和埃克替尼处理组细胞凋亡率(15.35±5.85)%明显提高,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,单药组下调了p-EGFR、p-Akt蛋白水平的表达,而联合用药组显著抑制了p-ERK、PARP蛋白水平的表达,差异有统计学意义(P0.05),EGFR、AKT、ERK蛋白表达无差异(P0.05)。结论:紫草素联合埃克替尼能明显抑制H1975细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡;抗肿瘤机制可能与调节EGFR信号通路相关蛋白表达有关。     

重楼皂苷Ⅶ抑制肺癌H460细胞增殖和迁移能力研究

为研究重楼皂苷Ⅶ(polyphyllin Ⅶ)抑制人肺癌H460细胞增殖、迁移能力和诱导凋亡的作用和机制.本实验采用MTT法检测重楼皂苷Ⅶ处理后H460细胞生长抑制率,Hoechst 33258染色观察细胞形态,细胞集落形成实验考察细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell小室实验研究H460细胞迁移和侵袭能力的改变...     

过氧化氢预处理对H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：活性氧介导的氧化损伤是缺血再灌注损伤的重要机制,本研究通过观察H2O2预处理对氧化损伤的H9c2心肌细胞存活率和细胞凋亡的影响,探讨其保护H9c2心肌细胞的作用机制。方法：体外培养H9c2心肌细胞,取对数生长期细胞用于实验研究。建立H2O2预处理抵抗高浓度H：O：诱导的细胞氧化损伤模型,实验分组如下：（1）正常对照组（CTL）;（2）损伤组（INJURY）;（3）预处理组十损伤组（PC）。应用CCK8法检测细胞存活率;试剂盒检测胞内MDA水平和T．sOD活性;Hoechst33258染色观察凋亡形态;Annexin-V／PI双染与流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：25vLmol／L的H202预处理90rain能明显地保护H9c2心肌细胞抵抗400μmol／LH2O2诱导的氧化损伤,提高细胞存活率,下调MDA水平,上调SOD活性,抑制细胞凋亡,降低细胞凋亡率。结论：低浓度H2O2预处理能减轻H9c2心肌细胞的氧化损伤,抑制氧化损伤诱导的心肌细胞凋亡,具有很好的抗氧化损伤和抗心肌细胞凋亡的保护作用,其作用机制可能与细胞SOD活性上调有关。H2O2预处理为临床治疗心肌缺血／再灌注损伤提供了一项新策略。     

下咽癌放疗抵抗细胞放疗抗性与上皮–间质转化的关系

该文探讨了下咽鳞癌放疗抵抗细胞FaduRR发生放疗抵抗与上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系及可能的机制。课题组前期成功构建了放疗抵抗细胞株FaduRR。平板克隆形成实验、CCK8实验检测放疗抵抗性,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞划痕和Transwell侵袭迁移实验检测迁移侵袭能力,Western blot和qRT-PCR实验检测蛋白和mRNA的表达。与亲本细胞Fadu相比,FaduRR细胞的放疗敏感性明显降低,X线照射后第4天的存活率明显增高、细胞凋亡率降低、细胞形态呈现上皮间质化的改变、细胞迁移侵袭能力增强、E-cadherin的蛋白和mRNA表达水平显著下调,而N-cadherin、Vimentin、p-Akt、p-GSK-3β、Snail的蛋白和mRNA表达水平显著上调,但Akt和GSK-3β的表达无明显变化。以上结果提示,下咽鳞癌放疗抵抗细胞株FaduRR发生了EMT改变,其机制可能与Akt/GSK-3β/Snail信号通路的激活有关。     

铁死亡抑制剂对心肌细胞缺氧/复氧损伤的干预作用及其机制

目的:验证心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤中是否有铁死亡的发生,以及探讨铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)对心肌细胞H/R损伤的作用及其机制。方法:新生1～3 d SD乳鼠,提取原代心肌细胞,随机分为正常对照组(Control)、H/R组和H/R+Fer-1组。H/R组细胞培养52 h后,加入4 mmol/L Na₂S₂O₄溶液,缺氧1 h后,用含10%小牛血清的DMEM培养液复氧培养3 h。H/R+Fer-1组经Fer-1 (2μmol/L)预处理24 h后再进行缺氧复氧处理。各组细胞应用紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率,CCK-8法检测细胞存活率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD),化学比色法检测丙二醛(MDA),免疫荧光观测线粒体膜电位、活性氧(ROS)改变,Western blot检测铁死亡关键蛋白ACSL4、GPX4的表达。结果:与control组比较,H/R组细胞活性、SOD释放量和MMP水平均显著降低(P<0.05),LDH、MDA、ROS释放量均显著增加(P&l...