MTT法检测石刁柏悬浮细胞技术的研究

本研究确定了MTT法测定悬浮培养的石刁柏细胞活力所需的最适条件为:比色波长560nm,最适缓冲液为柠檬酸钠-Vc缓冲液,渗透促进剂为二甲基亚砜,洗脱剂为酸化异丙醇,0.133%浓度的MTT溶液适于对未知培养时期的细胞计数,0.267‰浓度的MTT溶液适于鉴定细胞活力;同时,本研究通过MTT对培养细胞的生长过程进行了测定,确定细胞活性最强时期为指数期;并研究了细胞数量与吸光值之间的关系以及培养时间对MTT染色的影响.     

两种生态型芦苇胚性悬浮培养物对渗透胁迫的响应Ⅰ、生长及渗透调节物质的变化

在浓度为20％的PEG-8000介导的渗透胁迫下,沙丘芦苇的胚性悬浮培养物的生长受抑程度小于沼泽芦苇,相对细胞活力也较高,表现出比沼泽芦苇较高的耐渗透胁迫能力。对渗调物质含量的分析显示：两种生态型芦苇细胞中脯氨酸含量均随处理时间逐渐增高。沙丘芦苇的可溶性蛋白含量、蔗糖含量等表现出比沼泽芦苇更为显著的积累。两种生态型芦苇的渗透适应性细胞中均大量积累脯氨酸和糖类。说明有机渗透调节物质的积累对提高芦苇细胞抗渗透胁迫能力有显著贡献。     

鱼腥藻PCC7120细胞液泡的初步研究

从保存３个月以上的老化培养物中直接检查到游离液泡。液泡为标准圆球状,完全透明,大小相差极为悬殊,多数大型液泡吞噬了数个衰老藻细胞。采用低渗酶解,渗透冲击,低渗酶解和渗透冲击相结合从培养３个月以上,２个月,１个月,１８ｄ,１０ｄ及２ｄ的藻丝细胞都分离到液泡。液泡略大于细胞,泡内无吞噬物。培养３ｄ的藻丝有１５％的细胞分离到液泡。其他多种蓝藻也分离到同样的液泡。     

渗透作用实验的拓展

渗透作用实验的拓展范成明（四川省邻水中学,６３５３００）在实验教学过程中,我通过对“渗透作用实验＂的适当扩展,加深了学生对水分渗透作用原理的理解与应用,培养了学生创造性思维能力。一、判定植物细胞的死活首先,演示渗透作用实验,引导学生分析漏斗管内液面上...     

从一节实验课的教学谈学生自学能力的培养

在实际教学中,一些教师往往着重知识的介绍,或照本宣科,或满堂灌,一味强调知识的记忆,忽视有关能力的培养。笔者将高中生物《植物细胞质壁分离和复原实验》加以改进,采用探索教学法,在能力培养方面进行了大胆尝试。现就这节实验课的教学,谈谈对学生自学能力的培养。先看这堂课的教学设计: 一、目的:观察植物细胞质壁分离和复原的过程,了解具有液泡的植物细胞发生渗透作用的情况,并进一步理解细胞渗透吸水与失水的原理。二、材料:紫色洋葱(培养几天至有根尖出),1%-60%的蔗糖溶液,5%的硝酸钾溶液。其余同课本。     

碳源对迷迭香悬浮培养细胞的生长、迷迭香酸积累及抗氧化酶活性的影响

以迷迭香悬浮培养细胞为材料,详细研究了基本培养基中添加蔗糖、麦芽糖和葡萄糖对细胞生长及次生代谢产物积累的影响,同时对不同蔗糖浓度处理的悬浮培养细胞抗氧化酶活性进行了研究。研究结果表明：在不同的糖处理中,30 g·L^-1的蔗糖、70 g·L^-1的麦芽糖及40 g·L^-1的葡萄糖最有利于迷迭香悬浮培养细胞生长。30 g·L^-1蔗糖和70 g·L^-1麦芽糖处理中悬浮培养细胞的生长率分别为74.08%和72.33%,高出40 g·L^-1葡萄糖处理接近3倍之多。30 g·L^-1蔗糖处理的悬浮培养细胞迷迭香酸含量高出70 g·L^-1麦芽糖处理228倍,略低于40 g·L^-1葡萄糖处理。在不同蔗糖的处理中,随着蔗糖浓度的增加,迷迭香酸含量均呈现增加趋势,表明高浓度的蔗糖有利于悬浮培养细胞迷迭香酸的积累。在高浓度的蔗糖处理中,悬浮培养细胞H₂O₂和MDA含量明显增加,同时抗氧化酶SOD、POD及CAT的活性也明显增强,表明高浓度的蔗糖产生了渗透胁迫,这种渗透胁迫虽不利于迷迭香悬浮培养细胞的生长,但有利于次生代谢产物的积累。综合迷迭香悬浮细胞的生长率和迷迭香酸的含量,我们最终得出30 g·L^-1的蔗糖最有利于迷迭香悬浮细胞的培养。     

甘草腺体结构及对渗透胁迫的调节作用

甘草叶片上的腺体是其特殊的耐旱形态学结构,通过腺体分泌多糖调节叶肉细胞渗透势是其耐旱的重要生理特征。甘草叶片处于两面对称叶尚未展开期,部分腺体头部已分泌积累呈球状的多糖液,约占总腺体数的13.0%;部分腺体开始分泌多糖液,约占总腺体数的11.6%;75.3%的腺体尚未开始分泌多糖液,表明该期的腺体已有部分开始参与渗透调节。甘草发育成熟的功能叶上的所有腺体头部都分泌有呈球状的多糖液,表明该期所有的腺体都通过向外分泌多糖参与渗透调节。15%PEG+Hoagland培养的渗透胁迫比Hoagland培养的非渗透胁迫,叶内多糖增加了59.8%(P<0.01)。甘草通过腺体向腺体外分泌多糖液的作用,维持叶肉细胞适合的渗透势是甘草一种主动调节过程和方式。     

微流控线性加载低温保护剂减少猪MⅡ期卵母细胞的渗透损伤

在卵母细胞低温保存中,通常需要加载冷冻保护剂来抑制冰晶对细胞的损伤,但高浓度冷冻保护剂的加载会对细胞造成渗透损伤.为了减小细胞的渗透损伤,本文设计并制作了适合卵母细胞冷冻保护剂加载的微流体装置,研究了微流控线性加载30%(v/v)二甲基亚砜(Me2SO)低温保护剂时细胞内保护剂浓度变化、细胞体积变化,以及对细胞存活率与发育率的影响,并与传统的加载方法(一步法、分步法)做了比较.结果表明:微流控法能够实现卵母细胞冷冻保护剂的连续线性加载,避免了卵母细胞体积的骤变,显著减小了细胞的渗透损伤,提高了细胞的存活率.其中细胞的最小渗透体积减小为0.86V0,细胞的存活率达到92.8%,比一步法高33%,比两步法高16.3%,但与四步法之间无显著性差异.经孤雌激活后体外培养,细胞的卵裂率和囊胚率分别达到75.8%和27.4%,都显著高于一步法和分步法(P0.05).因此,微流控线性加载低温保护剂能够显著减小细胞的渗透损伤,为卵母细胞低温保存技术提供新思路.     

渗透现象的演示

植物细胞是一个渗透系统,细胞可以通过渗透作用从外界环境中吸水。在中学教学中这是一个难点,为了帮助学生很好地理解什么是渗透作用以及细胞的吸水原     

许智宏教授等研究植物胚胎发育获得重大突破

国际植物学权威杂志《植物细胞》今年6月发表了我国学者刘春明和许智宏教授在植物胚胎发育研究中取得的重大进展。他们在将近一年的时间里,进行了3000多次显微解剖实验,摸索出一套新的培养系统。利用渗透平衡原理及高营养的培养基,在世界上首次将8     

α-晶状体蛋白在高糖培养人RPE细胞中的表达机制研究

目的：研究高糖体外培养环境下人RPE细胞的α晶状体蛋白的表达变化,并排除渗透影响因素下与正常糖浓度组进行比较。方法：对人RPE细胞（ARPE-19）在D-葡萄糖为5.5mM条件下培养和传代3周,然后按培养条件分为3组,即5.5mM葡萄糖,33mM葡萄糖,5.5mM葡萄糖＋27.5mM甘露醇,再分别培养12h,24h,48h后进行总蛋白和RNA提取。进而通过Western blotting对αA晶状体蛋白,αB晶状体蛋白以及凋亡相关蛋白bax,bcl-2进行检测,并通过RT-PCR检测αA-,αB-两种晶状体蛋白的mRNA水平。结果：相对于正常糖浓度组,高糖环境下αA晶状体蛋白,αB晶状体蛋白均表达明显上调,渗透变化对蛋白表达没有明显影响。高糖培养环境下,随着时间延长,bcl-2表达量明显下降,而bax表达量呈上升趋势,αA-,αB-两种晶体蛋白的mRNA变化趋势与蛋白水平一致。结论：高糖培养环境下人视网膜色素上皮细胞的αA-,αB-两种晶状体蛋白均明显表达上调。     

组织工程用真皮成纤维细胞渗透特性的初步研究

在优化组织工程化真皮低温保存程序时,需要了解体外培养的真皮成纤维细胞的渗透特性。利用细胞计数与尺寸分析仪初步研究了组织工程用真皮成纤维细胞对水的渗透特性,其中包括细胞的等渗体积、细胞在低渗或高渗溶液(渗透压范围：130～1250mOsm)中细胞的平衡体积及细胞的不可渗体积。结果表明,在等渗条件下(280．67mOsm),真皮成纤维细胞的平均体积为5105．51μm^3(直径d=21．40μm);细胞体积随溶液渗透压的变化规律符合Boyle van't Hoff关系式,据此得到真皮成纤维细胞的不可渗体积Vb=0．3631Vi,为1853．81μm^3。     

花烛胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存条件研究

为建立适宜的花烛(Anthurium andraeanum Lind. )胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存技术,采用单因素实验方法对影响玻璃化超低温保存后细胞相对存活率的主要因素进行了研究.结果表明,经玻璃化超低温保存后花烛悬浮细胞的相对存活率与悬浮细胞的继代培养时间、渗透调节剂的种类和浓度及预培养时间、装载液种类和预处理时间、PVS2脱水时间以及超低温保存后的化冻温度均有一定的关系.继代培养3和5 d,细胞的相对存活率较高(约20%);分别以0.3、0.5、0.7 mol·L-1山梨醇和60、80、100、120 g·L-1蔗糖为渗透调节剂预培养0～4 d,以0.5 mol·L-1山梨醇预培养2 d的效果最好,细胞的相对存活率为26.2%;用体积分数25%PVS2预处理15 min,细胞的相对存活率最高(29.0%);分别用体积分数100%PVS2脱水0、5、10、15、20、25和30 min,其中脱水10 min的悬浮细胞相对存活率最高(32.1%);分别在10 ℃、20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃和60 ℃水浴条件下进行化冻处理,其中用40 ℃水浴化冻的悬浮细胞相对存活率最高(32.1%).花烛胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存和化冻的适宜流程为:将继代培养3～5 d的胚性悬浮细胞团(直径2 mm)在含0.5 mol·L-1山梨醇的1/2MS液体培养基中预培养2 d后,于4 ℃条件下处理24 h,然后先用体积分数25%PVS2室温预处理15 min,再用体积分数100%PVS2 在0 ℃条件下脱水10 min,最后迅速投入液氮中冷冻保存;将经过冷冻保存的细胞置于40 ℃水浴中化冻3 min,用含1.2 mol·L-1蔗糖的1/2MS液体培养基洗涤3次(每次10 min),之后即可进行恢复培养.     

基于微流控芯片的体外血脑屏障模型构建

目的:利用微流控芯片技术构建易调控、接近在体微环境的体外血脑屏障模型。方法:微流控芯片体外模型采用上下双培养池结构,由多聚碳酸酯膜分隔,两套流路系统控制流体。细胞采用原代分离纯化的大鼠脑血管内皮细胞和星形胶质细胞,免疫荧光技术进行鉴定,分别按次序注入微流控芯片上下培养池,按1μl/min的流速进行灌注培养,构建体外血脑屏障模型,并对此模型进行鉴定和评价。结果:原代分离纯化得到两种细胞,免疫荧光法鉴定细胞纯度达95%以上。共培养3天紧密连接开始形成,5天达到峰值,超微结构观察显示内皮细胞之间形成紧密连接,且荧光素钠渗透实验和TEER值测量表明屏障形成良好。结论:成功构建微流控芯片体外血脑屏障模型,可成为一个新的平台应用于药物筛选、神经系统基础等多项研究中。     

细胞工程

用生长在 cytodex-3型微载体上的叙利亚仓鼠肾细胞系(ATCC CCI15)为材料测定动态细胞培养系统的生物学性能。这种系统是专为太空生物学实验而设计的。用自身供能的渗透泵来进行培养基的交换循环。本系统无任何机械振荡装置及探测器。肾细胞的生长特性由细胞密度、糖耗、乳酸分泌量、pH 值等反映出来,本培养系统与     

渗透吸水原理难点的突破

水分代谢中渗透吸水的原理,是细胞吸收水分、植物细胞的质壁分离和复原、矿质代谢等教学内容的理论基础,也是教学中的重点和难点。我用卵壳膜作为半透膜进行渗透吸水原理的实验获得成功,从而突破这一难点。     

多效唑浸种对渗透胁迫下玉米根边缘细胞发生的影响

以‘农大108’玉米种子为材料,采用不同浓度(50、100、150、200、250、300、350 mg·L-1)的多效唑溶液进行浸种处理,研究其对渗透胁迫(20％ PEG-6000)下玉米种子萌发、根系生长和根系边缘细胞数目、活性及黏胶层厚度的影响.结果表明:与对照相比,渗透处理抑制了玉米种子露白与根系生长,增加了边缘细胞数目与黏胶层厚度.预先用多效唑浸种后再进行渗透胁迫处理进一步降低了主根的长度,但增加侧根的生长而使根系鲜重增加,进一步增加了根边缘细胞黏胶层厚度,在一定程度上减少了由于渗透胁迫造成的边缘细胞数目的增加程度.无论是渗透处理还是预先用多效唑浸种处理对边缘细胞活性的影响均不大.可见,多效唑浸种能够增加玉米根系的抗旱能力与边缘细胞黏胶层厚度的增加有关,而与边缘细胞数目、活性的关系不大;多效唑浸种溶液的适宜浓度范围为200～250 mg·L-1.     

天津市中学生物学德育纲要(试行稿)(三)

初中三年级《生理卫生》绪论爱国主义教育 1.介绍我国古代医药卫生事业的伟大成就、名人名著,激发民族自豪感。 2.介绍我国解放以后在党的领导下医药卫生事业所取得的突出成就,教育学生热爱社会主义的祖国。第一章人体概述一、辩证唯物主义教育 1.讲解人体内细胞的发展变化过程:发生、发展、衰老、死亡;细胞本身每时每刻都在进行自我更新,渗透生物体不断运动的观点。 2.讲解人体结构和功能、人体是一个统一的整体、人体对周围环境的适应,渗透结构和功能统一、有机体与生活环境相统一的观点。二、道德品质教育结合观察人的口腔上皮细胞实验,培养学生认真操     

植物细胞-水分关系中的吸水势

前言植物细胞的吸水,归纳起来有两种方式。一是被动吸水,这是水分顺热力学梯度的移动,包括渗透作用和吸涨作用。二是主动吸水,这是水分逆热力学梯度的传输,依赖细胞中的产能代谢过程。渗透作用是植物细胞吸水的基本机理。尽管对细胞渗透吸水研究较多,但是长期以来对这个问题存在着争     

利用渗透交联固定化细胞促进生物转化

固定化技术已在生物工程中得到广泛的实际应用,特别是应用于生物转化以提高酶或细胞的稳定性,实现连续操作等。对于含胞内酶的细胞的生物转化．一般先破碎细胞,使酶释放出来,再进行酶固定化。由于酶的稳定性通常与细胞膜的结台有关^[1],细胞破碎中常导致酶的失活。如果不破碎细胞,对完整细胞固定化,又会有传质困难抑制酶活力的发挥。我们研究出渗透交联固定化细胞技术以解决这个矛盾。先采用某种试剂(多为表面活性剂)处理细胞,提高细胞的通透性,再进行交联固定化．可以保证酶的活力破坏较小,又减小了传质阻力。既提高了固定化细胞的稳定性,又提高了固定化细胞的表观酶活。称这种固定化技术为渗透交联固定化细胞技术。Prabhuaney等采用CTAB-戊二醛处理聚丙烯酰胺凝胶包理的含青霉素酰化酶E. coli细胞^[2]。Nmhida采用1,6-己二胺-戊二醛处理含天冬氨酸酶的E．Coli细胞^[3]。渗透交联固定化处理会损伤细胞和酶是这种技术的一个矛盾。本文采用多乙烯多胺-戊二处理方法．因多乙烯多胺既起到表面活性剂的作用．又是交联剂。而且渗透能力比CTAB和1,6-已二 胺为低,故对细胞和酶损伤较小。