表皮生长因子对游离细胞核特异基因体外转录的影响

ＥＧＦ作用于ＮＣ３Ｈ１０和ＴＣ３Ｈ１０细胞核,对ＲＮＡ聚合酶Ⅱ有促进作用,但对ＲＮＡ聚合酶Ⅰ和酶Ⅲ没有影响,此外还发现转化细胞核内的ＲＮＡ聚合酶Ⅰ和酶Ⅱ的活性比正常细胞高１倍多。但两种细胞的ＲＮＡ聚合酶Ⅱ差别不大。同时,以非放射性标记的ｃ－ｆｏｓ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ３探针进行点杂交,结果发现,ＥＧＦ直接作用于细胞核可使ｃ－ｆｏｓ、ＣＬＮ１基因的转录水平提高;但是,对ＣＬＮ３无影响。     

表皮生长因子对游离细胞核特异基因体外转录的影响

ＥＧＦ作用于ＮＣ３Ｈ１０和ＴＣ３Ｈ１０细胞核,对ＲＮＡ聚合酶Ⅱ有促进作用,但对ＲＮＡ聚合酶Ｉ和酶Ⅲ没有影响,此外还发现转化细胞核内的ＲＮＡ聚合酶Ｉ和酶Ⅲ的活性比正常细胞高１倍多,但两种细胞的ＲＮＡ聚合酶Ⅱ差别不大,同时,以非放射性标记的ｃ－ｆｏｓ,ＣＬＮ１,ＣＬＮ３探针进行点杂交,结果发现,ＥＧＦ直接作用于细胞核可使ｃ－ｆｏｓ,ＣＬＮ１基因的转录水平提高,但是,对ＣＬＮ３无影响。     

酿酒酵母两种不同嗜杀菌的比较研究

以酿酒酵母两种不同类型的嗜杀菌株ＳＫ４（Ｋ１型）和ＥＲＲ１（Ｋ２型）为材料,分析了不同嗜杀酵母的嗜杀特性,两株嗜杀酵母具有相互杀死作用,其嗜杀活性与菌体生长有关。ＳＫ４和ＥＲＲ１的嗜杀质粒的比较表明：Ｍ１－ｄｓＲＮＡ质粒和Ｍ２－ｄｓＲＮＡ质粒分子量分别为１．７ｋｂ和１．５ｋｂ,两株菌的Ｌ－ｄｓＲＮＡ质粒均为４．０ｋｂ。用高温和紫外线处理嗜杀酵母,嗜杀活性随之消失,消除菌中的Ｍ－ｄｓＲＮＡ质粒也相应     

组蛋白与转录因子在hAMFR基因启动子序列上的结合及相互作用

采用从鸡红细胞中分离纯化的组蛋白Ｈ１,核心组蛋白Ｈ２Ａ＋Ｈ２Ｂ和Ｈ３＋Ｈ４,以及从ＨｅＬａ细胞中萃取的含有ＲＮＡ聚合酶Ⅱ和多种Ⅱ类基因转录因子的可溶性ＨｅＬａ细胞核抽提物,通过凝胶迟滞电泳,对组蛋白和ＨｅＬａ细胞核抽提物中的转录因子在人自泌移动因子受体（Ｈｕｍａｎａｕｔｏｃｒｉｎｅｍｏｔｉｌｉｔｙｆａｃｔｏｒ,简称ｈＡＭＦＲ）基因上游启动子序列的相互作用关系进行了初步研究,得到以下结论,组蛋白Ｈ１     

真核生物mRNA的帽结构与帽结合蛋白

帽结构是所有ＲＮＡ 聚合酶Ⅱ转录产物的特征性结构,它在ｍ ＲＮＡ 的功能和代谢的很多方面起作用． 在这些过程中还离不开相关蛋白质对它的识别和粘附,作为它行使功能的媒介,这些蛋白质就称为帽结合蛋白（Ｃａｐ－Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ,ＣＢＰ）． 该文主要讨论了帽结构与胞质中的ＣＢＰ－ｅＩＦ４Ｅ（ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ４Ｅ,真核起始因子４Ｅ）的相互作用在ｍ ＲＮＡ 指导的翻译起始中的作用机制,以及帽结构与核内发现的另一种ＣＢＰ复合体相互作用在ｍ ＲＮＡ 加工中的作用．     

人GRY-RBP基因的表达及其RNA结合活性的初步鉴定

ＲＲＭ ＲＮＡ 结合蛋白在基因的转录后调控中起着重要作用．人ＧＲＹ－ＲＢＰ 是我们实验室最近克隆的一个新的全长ｃＤＮＡ,编码一个ＲＲＭ ＲＮＡ 结合蛋白．ＧＲＹ－ＲＢＰ 的全编码区用ＰＣＲ扩增后,克隆到ｐＥＴ３０ａ＋ 表达载体中,在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得了高效表达,表达的ＧＲＹ－ＲＢＰ重组蛋白占细菌总蛋白的２１％ ．利用融合在ＧＲＹ－ＲＢＰＮ 端的Ｈｉｓ．Ｔａｇ,采取亲和层析的方法纯化了表达的重组蛋白．为了检测ＧＲＹ－ＲＢＰ的ＲＮＡ 结合活性及其所结合的ＲＮＡ 性质,将表达的蛋白与ｐｏｌｙ（Ａ）－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ结合,发现ＧＲＹ－ＲＢＰ能与ｐｏｌｙＡ （Ａ）结合,结合活性能被可溶性的ｐｏｌｙ（Ａ）、ｐｏｌｙ（Ｃ）减弱．改变ＮａＣｌ浓度和加入不同浓度的酵母ｔＲＮＡ竞争物后,ｐｏｌｙ（Ａ）结合活性不变．     

RT－PCR联合一步法扩增G蛋白α亚基基因的开放阅读框

报道逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）联合一步程序,扩增大于１ｋｂ的拟南芥菜Ｇ蛋白α亚基基因的开放阅读框。该程序中,当ＲＮＡ模板和引物变性,并在同一管中加入ＰＣＲ缓冲液、４种ｄＮＴＰ底物、逆转录酶和ＴａｑＤＮＡ聚合酶之后,就不需其它手工操作步骤,因而可同时进行大批量样品的操作。实验结果证明ＡＭＶ（鸟类骨髓性白血病病毒）逆转录酶对ＴａｑＤＮＡ聚合酶的活性没有抑制作用。这种ＲＴ－ＰＣＲ联合一步法可从０．５μｇ的总ＲＮＡ中快速地扩增长于１．０ｋｂ的ｃＤＮＡ片段。     

牛生长激素基因在马铃薯中的表达

将牛生长激素基因ｃＤＮＡ 与Ｐａｔａｔｉｎ ＣｌａｓｓＩ启动子及ＮＯＳ３终止子连接,构建了表达载体ｐＰＢＧＴ． 用直接法将表达载体转入农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ） ＬＢＡ４４０４（ｐＲＡＬ４４０４）菌株, 用此菌株转化马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ ）得到再生植株． 经ＮＰＴⅡ活性检测,总ＤＮＡ ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ证明目的基因已整合到马铃薯基因组中．ＲＮＡ 点杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ表明牛生长激素基因已在转基因马铃薯块茎中转录和表达     

CTD及其磷酸化状态在基因表达调控中的作用

真核ＲＮＡ聚合酶Ⅱ的最大亚基羧基末端结构域（ＣＴＤ）在基因表达调控中扮演着重要角色。本文对ＣＴＤ的基本特性及其磷酸化／非磷酸化状态转变在转录起始复合物形成、转录延长转录后加工和特定基因转录调控等过程中发挥的作用进行了综述。     

中介体复合物——RNA聚合酶Ⅱ转录装置的信息传递者

在真核通用转录装置与基因特异性调控蛋白之间起到桥梁作用是一种保守的多蛋白中介体复合物（mediator complex).中介体复合物是由约20种蛋白组成的复合物,以单独或与RNA聚合酶Ⅱ形成复合物的形式存在,后者被定义为全酶（holoenzyme)。中介体复合物把从增强子等调控区获得的正调控与负调控信息,经过整合和转换再传递到启动子,它直接通过RNA聚合酶Ⅱ行使功能,并在依赖于启动子的转录过程中调节RNA聚合酶Ⅱ的活性,最后在哺乳动物转录系统中发现了一些与酵母中介体复合物极为相似的类似物也能够与转录激活蛋白相互作用,并在转录调节过程中起到重要的作用。     

真核生物mRNA的帽结构与由结合蛋白

帽结构是所有ＲＮＡ聚合酶Ⅱ转录产物的特征性结构,它在ｍＲＮＡ的功能和代谢的很多方面起作用。在这些过程中还离不开相关蛋白质对它的识别和粘附,作为它行使功能的媒介,这些蛋白南就称为帽结合蛋白（Ｃａｐ－Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ,ＣＢＰ）。该文主要讨论了帽结构与胞质中的ＣＢＰ－ｅＩＦ４Ｅ（ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ４Ｅ,真核核起始因子４Ｅ）的相互作用在ｍＲＢＮＡ指导的     

T7启动子具有真核生物聚合酶Ⅱ顺式作用因子的功能

根据ａ－鹅膏蕈碱（ａ－ａｍａｎｉｔｉｎ）对真核生物ＲＮＡ聚合酶的选择性抑制,以氯霉素乙酰转 移酶基因（ＣＡＴ）作为报道基因进行体内表达实验,证明Ｔ７噬菌体启动子可为真核生物ＲＮＡ 聚合酶Ⅱ所启动。应用建立的竞争性ＤＮＡ－蛋白质凝胶泳动技术,分别以ＴＡＴＡ框、ＣＡＡＴ 框、ＧＣ框和八核苷酸序列（ｏｃｔａｍｅｒ）为竞争性寡核苷酸分子,发现人工合成的Ｔ７启动子可能 与 ＴＦⅡＤ起始转录因子结合,形成 ＤＮＡ－核蛋白质结合物。将 ＴＡＴＡ框和八核苷酸序列分别 接入Ｔ７启动子上游,ＣＡＴ实验显示八核苷酸序列可以增强ＲＮＡ聚合酶Ⅱ对Ｔ７启动子的转录 起始作用。实验结果表明Ｔ７启动子可作为ＲＮＡ聚合酶Ⅱ的顺式作用因子。     

蓖麻蚕rDNA基因核骨架结合区在酵母中的自主复制功能

蓖麻蚕核糖体ＲＮＡ基因（ｒＤＮＡ）５′－非转录间隔区有长约１ｋｂ的核骨架结合区ＳＡＲ（ｓｃａｆｏｌｄ－ａｓｓｏｃｉａｔ－ｅｄｒｅｇｉｏｎ）［１］。本文对该ＳＡＲ元件的酵母自主复制功能进一步研究,证明该ＳＡＲ５′端６８８ｂｐ含有１２个ＡＣＳ（ＡＲＳ的核心序列）同源序列,但无ＡＲＳ活性,而其３′端仅３个ＡＣＳ同源序列,但对酵母的转化率比全片段还高４０～５０倍。体外结合实验证明,蓖麻蚕ｒＲＮＡ基因的ＳＡＲ能专一地同酵母核骨架结合,提示ＡＲＳ的功能体现与核骨架结合紧密相关。ｒＲＮＡ基因ＳＡＲ与ＡＲＳ的功能在进化上可能是很保守的。在此基础上可进一步分析ＳＡＲ中与ＤＮＡ复制相关的正调及负调元件。     

不同氮源对小麦幼苗谷氨酰胺合成酶的影响

利用ＤＥＡＥ－纤维素柱层析、酶活性测定、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 分子杂交等技术,研究了小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．）幼苗的根、叶和离体叶在不同氮源培养条件下谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）活性和同工酶变化, 以及不同氮源对ＧＳ基因转录－ＧＳ－ｍ ＲＮＡ 的影响． 同时与硝酸还原酶（ＮＲ）活性进行比较, 结果表明∶当以ＮＨ＋４ 作唯一氮源时,小麦幼苗根谷氨酰胺合成酶（ＧＳｒ）和叶细胞质谷氨酰胺合成酶（ＧＳ１）活性要比以ＮＯ－３ 作唯一氮源的高．当以ＮＯ－３ 为唯一氮源时, ＮＯ－３ 则促进完整叶片和离体叶片叶绿体谷氨酰胺合成酶（ＧＳ２）活性． 从转录水平上看,ＮＨ＋４ 促进根ＧＳ－ｍ ＲＮＡ 的合成,而ＮＯ－３ 促进叶ＧＳ－ｍ ＲＮＡ 的合成     

利用脊髓灰质炎病毒5‘NCR和RNA聚合酶基因可提高外源基因表达

将含脊髓灰质炎病毒（ＰＶ）ＲＮＡ聚合酶的不同长度基因片段克隆到载体ｐＳＧ５质粒上,分别构建了４个表达ＲＮＡ聚合酶的质粒。体外转录实验证明,ｐＳＧ５－ＰＯＬ１．９９和ｐＳＧ５－ＰＯＬ２．０３质粒转染细胞的提取物促进了特异的ＲＮＡ转录,表明两质闰可表达ＲＮＡ聚合酶。将ＰＶ的５’ＮＣＲ序列插在载体ｐＧＲＥＥＮ ＬＡＮＴＥＲＮ－１的ＣＭＶ启动子下游,构建了ｐＧＲＥＥＮ ＬＡＮＴＥＲＮ－１－５’ＮＣＲ质粒;     

新书介绍

《转录因子》(ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒｓ)Ｊ .Ｌｏｃｋｅｒ编著 ,2 0 0 1年ＢＩＯＳＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓＬｉｍｉｔｅｄ出版 ,336页。本书着重于基本机制和在真核细胞中调控转录的因子。检查了调节基因表达的调控系统 ,以及整个哺乳动物生物体局部调节基因表达的更多的特殊系统。内容有 :ＲＮＡ聚合酶ＩＩ转录机制 ;转录的染色质结构和调节 ;转录因子的ＤＮＡ结合 ;细胞周期转录调节 ;胞外信号转录调节 ;早期淋巴细胞发育的转录调节 ;核受体激素和代谢的转录整合 ;神经转录因子等等。《钙信号》(Ｃａ…     

河西走廊不同生态型芦苇核酸代谢季节动态研究

分布在甘肃河西走廊的４ 种生态型芦苇（Ｐｈｒａｇｍ ｉｔｅｓｃｏｍ ｍ ｕｎｉｓＴｒｉｎ．）的核酸代谢季节变化有差异。盐化草甸芦苇ＲＮＡ 含量持续增加,ＤＮＡ 含量相对稳定,其它３ 种生态型芦苇的ＲＮＡ 和ＤＮＡ 含量以５月份为最高。过渡带芦苇的ＲＮＡ 含量、沼泽芦苇及沙丘芦苇的ＤＮＡ含量９ 月份略有增高。盐化草甸芦苇与过渡带芦苇的ＤＮａｓｅ和ＲＮａｓｅ的活性７ 月份最高,沼泽芦苇与沙丘芦苇的ＤＮａｓｅ和ＲＮａｓｅ活性５—９ 月份呈增高趋势。盐化草甸芦苇的ＤＮＡ 和ＲＮＡ 合成活性不断升高,过渡带芦苇和沼泽芦苇的ＤＮＡ 和ＲＮＡ 合成活性及沙丘芦苇的ＲＮＡ 合成活性５—９月份均降低,仅沙丘芦苇的ＤＮＡ合成活性增强。ＲＮＡ 聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分析结果表明,４ 种生态型芦苇均含有２５Ｓ、２３Ｓ、１８Ｓ、１６Ｓ大分子量ｒＲＮＡ 和小分子量５．８Ｓ、５Ｓ、４．５ＳｒＲＮＡ 及４ＳｔＲＮＡ。大分子量ＲＮＡ 的含量高于小分子量ＲＮＡ 含量。不同生态型及同一生态型芦苇的不同发育时期,相同的ＲＮＡ 组分含量各不相同。且发育过程中２３Ｓ、１８Ｓ、１６ＳｒＲＮＡ 在不同月份发生不同程度的降解。由此,我们认为,核酸代谢的差异性是４ 种生态型由生长转入衰     

大肠杆菌中的小分子RNA

迄今为止,已知由大肠杆菌基因组编码的小分子ＲＮＡ（ｓＲＮＡ）除了５ＳｒＲＮＡ和ｔＲ－ＮＡ外,共有１０种,其中大多数是调控ＲＮＡ,可调控细菌的某些代谢过程。１．ｓＲＮＡ的发现用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析３２Ｐ标记的大肠杆菌总ＲＮＡ,发现除５ＳｒＲＮＡ和ｔＲ...     

CAAT结合蛋白CBF在转录中的作用

ＣＡＡＴ结构是一种在真核生物启动子中普遍存在的顺式作用元件。ＣＢＦ,又称为ＮＦ -Ｙ、ＣＰ１,是一个ＣＡＡＴ特异性转录因子。在转录过程中 ,ＣＢＦ与ＣＡＡＴ特异性结合 ,共同调控启动子的转录 ,本文综述了ＣＢＦ的结构及其在转录中的作用。１ＣＡＡＴ结构ＣＡＡＴ结构存在于由ＲＮＡ聚合酶Ⅱ所转录的大多数真核生物基因的近端启动子中〔１〕,它与其他的启动子元件相互协调 ,一起控制启动子的转录活性。在高等的真核细胞启动子中 ,ＣＡＡＴ一般位于 -８０区〔２〕。对不同物种的某些基因进行比较 ,发现ＣＡＡＴ结构在启动子上的位置以…     

研究基因转录的RT-PCR技术

ＤＮＡ模板序列的转录调控是基因表达多级调节过程的关键 ,细胞周期中基因转录水平的改变应激细胞发育、分化及正常生理功能的多种信号转导。疾病或其它因素也应激转录水平变化 ,从而改变各种ｍＲＮＡｓ的稳定性。因此基因的ｍＲ ＮＡ水平分析 ,在基因调控研究领域是必不可少的。ｍＲＮＡ的常规分析方法是Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｓ、ＲＮＡｄｏｔ/ｓｌｏｔｂｌｏｔ、核酸酶保护法(ｎｕｃｌｅａｓｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ)和原位杂交 (ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ)。而ＰＣＲ技术的应用开创了ｍＲＮＡ分析新方法[1 -3] :ＲＮ…