拮抗菌株Kc-t99的鉴定及其抑菌活性研究

通过传统分类与分子生物学技术相结合的方法对从京郊菜园土壤中分离筛选的拮抗菌株Kc-t99进行鉴定,并采用生物测定的方法评价其抑菌活性.结果表明,菌株Kc-t99的形态学特征和生理生化特性与枯草芽孢杆菌基本一致,其16S rDNA序列与GenBank中已鉴定的枯草芽孢杆菌的16S rDNA序列同源性高达98.06%,据此初步确定其为枯草芽孢杆菌.抑菌试验表明该菌株对供试的5种病原真菌和4种细菌均具抑菌活性,其中对甘蓝枯萎病菌、黄瓜角斑病菌和桃褐腐病菌抑制作用显著.     

水稻稻瘟病拮抗菌株的筛选

从水稻病健叶、茎和根组织以及稻田土分离得到的 90个菌株中 ,筛选出对稻瘟病菌分生孢子萌发和菌丝生长均有较强抑制能力的 2个菌株 ,并对这 2个菌株进行室外盆栽试验。结果表明 ,它们均可显著地降低稻瘟病的发生。经初步鉴定 ,这 2个拮抗菌株分别为Enterobactersp.(X2 3 )和Streptomycessp .(Y42 )。     

新生儿颊粘膜定植菌株的拮抗性研究

本文分离在新生儿颊粘膜上皮细胞表面形成微菌落、且初代培养时菌落较纯的１５株ａ溶血细菌,进行对Ｂ链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌４种共７株菌的体外拮抗实验。１５株菌中包括８株ａＳｔｒｅｐ．,其中Ｓｔｒｅｐ．ｍｉｔｉｓ４株,Ｓｔｒｅｐ．ｏｒａｌｉｓ２株、Ｓｔｒｅｐ．Ｓａｌｉｖ．Ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ１株、Ｓｔｒｅｐ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ１株;ＬＣ．ｌａｃｔｉｓ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ５株、Ｇｅｍｅｌａｍｏｒｂｉｌｏｒｕｍ１株、Ｇｅｍｅｌａｈａｅｍｏｌｙｓａｎｓ１株。结果约６０％（９／１５）的颊粘膜定植株对两株及两株以上的病原菌株或阴性杆菌株有拮抗作用,只对１株菌有损坏抗作用的ａ溶血菌４株,完全无拮抗作用的菌株２株;ａＳｔｒｅｐ．、ＬＣ．ｌａｃｔｉｓ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ的拮抗作用较强;拮抗作用的有无、强弱有很强的菌株特异性     

致病疫霉拮抗菌株YR-7 的分离鉴定及其活性物质

【目的】从黄河边的农田土壤中分离筛选拮抗致病疫霉的粘细菌,鉴定目标菌株,分析其发酵上清液的稳定性及对马铃薯晚疫病菌的抑制效果,为活性物质分离鉴定及抗马铃薯晚疫病菌生物农药的研发奠定基础。【方法】采用兔粪诱导法分离菌株,通过平板对峙法筛选对马铃薯晚疫病菌有拮抗作用的粘细菌,通过形态特征、生理生化特征以及16S r RNA基因序列分析对菌株进行鉴定。采用称重法测定菌株生长曲线,通过平皿法测定菌株不同生长时期发酵上清液对致病疫霉的菌丝生长抑制率和浓缩发酵上清液的稳定性。通过马铃薯离体叶片涂布浓缩发酵上清液和接种病原菌孢子悬浮液法,测定该菌株对马铃薯晚疫病的防病作用。【结果】从土壤样品中共分离获得7株粘细菌,其中4株拮抗致病疫霉,拮抗效果最强的为YR-7菌株,菌丝的生长抑制率为96%,该菌株被鉴定为Myxococcus xanthus。培养7 d后,菌株发酵上清液对致病疫霉的抑制活性趋于稳定。浓缩发酵上清液经30-50°C处理后,对致病疫霉菌丝的生长抑制率可达50.90%,高于50°C时抑菌活性逐渐下降,90°C处理后菌丝的生长抑制率仍可达25.45%。浓缩发酵上清液在p H 4.0-9.0条件下比较稳定,保持40.21%以上菌丝的生长抑制率,当p H4.0或p H9.0时,抗菌活性显著降低。活性物质不能被蛋白酶降解,其抗菌活性不受紫外线、自然光照射的影响。对马铃薯离体叶片的生防效果检测表明,YR-7的浓缩发酵上清液处理组叶片相对病斑面积仅为0.35%,对照组的相对病斑面积高达68.19%。【结论】粘细菌菌株YR-7可以产生抗马铃薯晚疫病菌的次生代谢产物,抗菌活性物质具有较好的稳定性,可以有效抑制致病疫霉侵染马铃薯叶片,具有开发成抗马铃薯晚疫病生物农药的潜在价值。     

S-159-06菌株活性产物对植物病原菌的抑菌谱及拮抗机理初探

对S-159-06菌株活性产物的抑菌谱及其拮抗机理作了初步研究,结果表明：S-159-06活性产物具有较广的抑菌谱,对多种病原真菌和细菌具有较好的抑制作用;S-159-06活性产物能强烈抑制病原菌菌丝的生长和孢子的萌发,可引起病原菌菌丝扭曲,菌丝膨大成串珠状,分枝增多,分枝顶端膨胀后细胞壁破裂,原生质外溢,产生溶菌作用;使分生孢子数减少,孢子萌发畸形,萌发率降低;在温室条件下,S-159-06活性产物不仅能阻止番茄灰霉病菌菌丝的入侵,而且在植物体内有内吸作用,对已侵入的菌丝有较好的治疗作用。     

医学真菌菌株保藏方法概述

近年来,随着真菌感染的患者急剧增加,真菌病已经成为一个重要的公共卫生问题。对医学真菌流行病学、致病机理、耐药机理以及防治策略的研究尤为重要,而所有研究的基础都建立在对医学真菌的进行有效的保藏。医学真菌的保藏方法很多,包括传代法、蒸馏水法、冷冻干燥保藏法等,保藏方法的选择因实验室条件、菌种和研究要求不同而不同。本文对目前常用的几种医学真菌菌种保藏方法的优缺点及其应用等做了综述。     

稻瘟病拮抗菌的筛选及抑菌活性的研究

利用对峙法和牛津杯法从大连近海海域分离得到1株对稻瘟病菌有拮抗作用的菌株BCHN-15,经生理生化实验和16S r DNA方法鉴定,该菌株为解淀粉芽胞杆菌。实验结果显示,BCHN-15能显著抑制稻瘟病菌的生长,与稻瘟病菌作用48 h后,稻瘟病菌的菌丝干重与对照组相比减少了74.36%。该菌产生的抑菌成分可破坏稻瘟病菌的细胞膜,且对热稳定,其活性成分能被盐酸沉淀。结果表明,BCHN-15可通过破坏稻瘟病菌的细胞膜,引起菌丝畸形和断裂来发挥其抑菌作用。     

生防工程菌株BS-17A稳定性与抑菌活性初步研究

目的:BS-17是内生细菌,对番茄灰霉病菌、叶霉病菌和枯萎病菌具有显著抑菌活性,为了跟踪研究野生型菌株BS-17在番茄根围和叶围的定殖情况,构建了1株带有黄绿荧光蛋白基因标记的生防菌株BS-17A.方法:采用NYD连续培养的方法和平皿抑菌试验的方法对工程菌株的遗传稳定性和抑菌活性进行了初步研究.结果:该工程菌在无选择压力培养基中连续培养50h,质粒遗传稳定性为94%,对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea、叶霉病菌Cladosporiumfulvum和枯萎病菌Fusarium oxysporum的抑制作用与野生菌无显著差异,平皿抑菌率分别为85.5%、86.5%和89.8%.结论:该工程菌具有较强的遗传稳定性和抑菌活性.     

内生拮抗放线菌FRo2的鉴定及抑菌活性物质的分离

【目的】鉴定从东乡野生稻根部分离得到的对多种农作物病原真菌具有拮抗活性的内生放线菌株FRo2,并对其抑菌活性物质进行分离。【方法】根据FRo2形态特征观察、生理生化特性、细胞壁组分和16S rRNA基因序列对其进行鉴定。采用管碟法和菌丝生长速率法测定了该菌株的抗菌活性,活性追踪法结合正相硅胶柱层析及凝胶(Sephadex LH-20)柱层析等技术对抑菌组分进行分离,并通过NMR对抑菌活性物质进行解析。【结果】菌株FRo2属于链霉菌属,与娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)极为相似。该菌株发酵液对小麦赤霉菌、立枯丝核菌等7种主要农作物致病菌具有较好的抑制活性;从菌株FRo2发酵液中分离得到抑菌活性化合物AW2,结构鉴定为邻苯二甲酸二丁酯。【结论】研究阐明了内生放线菌FRo2抑菌活性物质,也为该菌今后的农业生防应用提供物质基础。     

棉花黄萎病拮抗细菌产铁载体测定及其对抑菌活性的影响

【背景】棉花是新疆农业的支柱产业,棉花黄萎病严重影响棉花产量和纤维品质,有效的防治途径是目前解决的首要任务。【目的】探究BacillusvelezensisBHZ-29、Bacillusatrophaeus SHZ-24、Bacillus subtilis SHT-15、Bacillus vanillea SMT-24菌株产铁载体能力及其对抑菌活性的影响。【方法】MKB-CAS双层平板检测铁载体,Arnow法与高氯酸铁法鉴定铁载体类型,CAS染液定量铁载体,琼脂扩散法测定低铁条件下铁载体对抑菌物质的影响。【结果】MKB-CAS固体平板菌体周围出现橙紫色显色反应,Arnow实验4株拮抗菌反应液颜色为红色,高氯酸铁实验反应液颜色为黄色;BHZ-29、SHZ-24、SHT-15、SMT-24菌株铁载体定量活性单位最大值分别为8.27%±0.61%、31.80%±2.06%、16.06%±3.61%、15.53%±0.51%,吸光度值As/Ar比值最小分别为0.917±0.092、0.682±0.021、0.845±0.005、0.846±0.008。BHZ-29、SHZ-24、SMT-24菌株含铁离子浓度0、10、20μmol/L 3组处理发酵无菌滤液均未出现抑菌圈,SHT-15菌株3组处理出现抑菌圈,抑菌圈直径大小无差异性。【结论】4株拮抗菌株均产铁载体,铁载体类型为儿茶酚型,4株拮抗菌株整体产铁载体能力较低,最高达31.80%±2.06%,产铁能力As/Ar比值高于0.682时,BHZ-29、SHZ-24、SMT-24菌株含铁离子浓度0、10、20μmol/L 3组处理发酵无菌滤液对抑菌活性无影响,SHT-15菌株3组不同铁离子浓度处理对抑菌物质影响差异不显著。     

拮抗菌抗菌谱及发酵液拮抗能力测定的新方法

目的:确定测定拮抗细菌枯草芽孢杆菌A的抗菌谱及发酵液拮抗能力的方法。方法:平板对峙法测定抗菌谱,三明治法、管碟法、滤纸片法和双层打孔法测定发酵液的拮抗能力。结果:用点接拮抗细菌单菌落的平板对峙法测得菌株A对玉米小斑病菌等10种病原真菌均有拮抗作用;用双层打孔法测定菌株A发酵液拮抗能力,发现在培养条件为温度32℃,溶氧量为300mL三角瓶培养基装量为30mL,接种量5%,初始pH值7.5时发酵液拮抗能力最强。结论:点接拮抗细菌单菌落的平板对峙法适合用来测定菌株A的抗菌谱,双层打孔法适合用来测定菌株A发酵液的拮抗能力。     

拮抗细菌与其他生防因子复配防治植物病害研究进展

目前,利用单一微生物防治植物病害的研究比较多,但在实际应用中受到各种因素的影响,防治效果不理想.将多种拮抗细菌复配,通过各菌株间的优势互补能够增强对环境的适应能力,从而提高防治效果.本文综述了拮抗细菌与其他生防菌以及植物提取物复配防治植物病害的研究进展,并讨论了植物病害生物防治的研究方向.     

大黄鱼主要致病菌拮抗菌株的分离鉴定、抑菌谱及安全性分析

大黄鱼是我国重要的海水养殖鱼类,随着大黄鱼养殖规模的扩大,病害也日益增多,其中细菌性疾病是造成大黄鱼疾病暴发、死亡的重要病原。近年来,哈维弧菌(Vibrio harveyi)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、杀香鱼假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)、鰤鱼诺卡菌(Nocardia seriolea)等细菌造成了大黄鱼养殖重大经济损失。为寻找大黄鱼主要致病菌的拮抗菌,用于大黄鱼细菌病的生态控制,作者对大黄鱼及周边环境进行了拮抗菌的分离和鉴定。以哈维弧菌、杀香鱼假单胞菌作为拮抗活性筛选指示菌,用纸片法(KB)、菌落接种法从大黄鱼体内、养殖池周边土壤、藻类、芦苇等筛选出具抗菌活性物质菌株10株;分离菌株用16S rDNA通用引物序列分析鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.)、产碱杆菌(Alcaligenes sp.)、类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)、弧菌(Vibrio sp.)和异常球菌(Daenococcus sp.)等。对具较强抑菌活性的碱性杆菌NBPa-7(Alcaligenes faecalis)和芽孢杆菌NBlm-36(Bacillus amyloliquefaciens)进行了抑菌活性测定,结果表明NBPa-7对溶藻弧菌、杀香鱼假单胞菌有良好拮抗作用,抑菌直径分别为23.20 mm、12.00 mm;NBlm-36对创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、哈维弧菌、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、大肠杆菌(Escherichia coli)及葡萄球菌(Staphylococcus sp.)有拮抗作用,抑菌直径为6.00 mm-14.00 mm。胞外抑菌产物对热、酸、碱有较好耐受性。将拮抗菌以1×108CFU/ind腹腔注射成年鼠、口喂新生鼠,48 h内未出现毒性和死亡,将拮抗菌以3×108CFU/ind腹腔注射大黄鱼,2周内未出现发病死亡,大黄鱼内脏未发生病变,白细胞未出现明显升高现象,初步表明拮抗菌株不具有致病力。     

两株生防荧光假单胞杆菌的室内筛选试验

从番茄根际土壤中筛选出11株对水稻稻瘟病菌具拮抗活性的细菌原始菌株,其发酵滤液对稻瘟菌菌丝生长抑制率达50％以上的菌株有8个。依据拮抗活性测定结果,确定AbⅢ745和AbⅢ763的单胞分离后代AbⅢ745-6和AbⅢ763-1为最优菌株,其对稻瘟病菌的抑制率分别达96.88％和78.57％,对小麦全蚀病菌、小麦根腐病菌及番茄早疫病菌也有一定的抑制作用。经初步鉴定,AhⅢ745-6和AbⅢ763-1属于假单胞菌科荧光假单胞杆菌。     

丝瓜籽中一种具有翻译抑制活性和胰蛋白酶抑制剂活性的多肽——Luffin P1的纯化和性质

通过硫酸铵分级沉淀、CM 5 2阳离子交换层析、蓝胶亲和层析和FPLCMonoS阳离子交换层析 ,从丝瓜籽抽提液中分离到一种多肽luffinP1。经MALDI TOFMS测得其分子量为 5 2 2 6 .5。氨基酸序列测定及同源性分析发现 ,luffinP1的N端 11个氨基酸序列与丝瓜籽中的一种 6 .5K富含Arg Glu的多肽AGRP的部分序列相同 ,并与南瓜籽中一种胰蛋白酶抑制剂C2肽具有很高的同源性。体外分析表明 ,luffinP1同时具有两种生物活性 :(1)对兔网织红细胞裂解液系统蛋白质生物合成有较强的抑制作用 ,IC50 为 0 .6nmol L ;(2 )具有明显的胰蛋白酶抑制活性 ,IC50 为 2 2 μmol L。     

防烟叶霉变菌株对烟叶霉变的影响

为有效防止烟叶霉变,采用平板对峙培养的方法,就3个防烟叶霉变菌株对霉变菌的抑制作用进行了研究．结果表明,JMBl42、B112、B329对供试霉变菌皆表现出一定的抑制作用,对不同霉变菌的平均抑制率分别为51．6％、52．9％、53．7％．3个防烟叶霉变菌株分别以每mL 10^7、10^8、10^9 cfu(colony当当forming unit)13个浓度单独处理和每mL10。cfu浓度混合处理烟叶,结果表明,JMBl42菌株每mL10,cfu处理浓度效果最好,与对照差异极显著,其次为B112菌株每mL10^8cfu处理浓度,但它与对照差异不显著,B329菌株处理效果最差,混合施用结果与对照差异不显著．由此确定JMBl42菌株每mL10^9cfu处理浓度为仓储烟叶防霉变最佳处理参数、     

具抑菌活性海洋微生物的筛选

从上海郊区海域采集的海水、海泥样中分离出193株海洋细菌,对其进行抑菌活性菌株的筛选。对分离出的菌株分别利用琼脂块法和管碟法进行初筛和复筛,结果显示有29株海洋细菌具有抑菌活性,占总分离菌株的15%,其中抑菌能力较强的G4抑菌谱较广,同时能抑制革兰氏阳性和阴性指示菌。     

一株白芍内生放线菌的分离、活性及系统发育分析

目的:分离白芍中拮抗农作物致病菌和人类常见病原菌的内生放线菌,并进行系统发育分析。方法:采用3种分离培养基,从白芍根部分离内生放线菌;通过滤纸片法筛选具有拮抗活性的菌株,观察菌丝形态,并进行16S rDNA序列系统发育分析。结果:从白芍中分离得到16株内生放线菌,其中从FYSCA培养基中分离到9株;16株内生放线菌中有6株具有拮抗作用,菌株S-BS033004对5种病原菌有拮抗活性,尤其是对棉花黄萎病菌和小孢拟盘多毛孢菌和耐青霉素类金黄色葡萄球菌的拮抗作用显著,抑菌圈≥20mm。经16S rDNA系统发育分析表明该菌株与Streptomyces anulatus NBRC13369T等6株链霉菌模式菌株亲缘关系较近,相似性均为99.7%。结论:白芍内生放线菌S-BS033004是一株杀菌谱较广的链霉菌,具有很好的开发潜力。     

青枯病抗性不同的番茄品种根际拮抗菌拮抗能力差异研究

以植物基因型影响根际微生物的多样性为依据,通过平板拮抗试验,从番茄的感病品种和抗病品种、感病品种的严重发病植株和轻微发病植株根际筛选到36株抬抗菌,不同来源的抬抗菌群落具有不同的特征。严重发病的感病品种植株根际的拮抗菌群落多样性低,仅筛选到1个拮抗菌株,而轻微发病的感病品种和未发病的抗病品种植株根际筛选到的拮抗菌株数较多;抗病品种根际桔抗菌表现出强拮抗能力,而感病品种根际拮抗菌的拮抗能力较弱。测定植株根面和根颈处导管内青枯菌的种群数量、3株拮抗菌的防病效果,发现导管内青枯茵数量与防病效果基本一致,探讨了导管内青枯菌数量作为拮抗菌防病效果指标的可能性。     

Antagonistic activity of probiotic lactobacilli and bifidobacteria against entero- and uropathogens

AIM: To develop in vitro assays for comparing the antagonistic properties and anti-oxidative activity of probiotic Lactobacillus and Bifidobacterium strains against various entero- and urinary pathogens. METHODS AND RESULTS: The antagonistic activity of five probiotic lactobacilli (Lactobacillus rhamnosus GG, Lactobacillus fermentum ME-3, Lactobacillus acidophilus La5, Lactobacillus plantarum 299v and Lactobacillus paracasei 8700:2) and two bifidobacteria (Bifidobacterium lactis Bb12, Bifidobacterium longum 46) against six target pathogens was estimated using different assays (solid and liquid media, anaerobic and microaerobic cultivation) and ranked (low, intermediate and high). Bacterial fermentation products were determined by gas chromatography, and the total anti-oxidative activity of probiotics was measured using linolenic acid test. Pyelonephritic Escherichia coli was highly suppressed by GG and both bifidobacteria strains. Lactobacilli strains 8700:2, 299v and ME-3 were the most effective against Salmonella enterica ssp. enterica in microaerobic while ME-3 and both bifidobacteria expressed high activity against Shigella sonnei in anaerobic milieu. Lact. paracasei, Lact. rhamnosus and Lact. plantarum strains showed intermediate antagonistic activity against Helicobacter pylori under microaerobic conditions on solid media. The highest anti-oxidative activity was characteristic for Lact. fermentum ME-3 (P < 0.05). No efficient antagonist against Clostridium difficile was found. The positive correlations between the pH, lactic acid production and anti-microbial activity for all tested probiotics were assessed. CONCLUSIONS: Developed experimental assays enable to compare the anti-microbial and -oxidative activity of Lactobacillus and/or Bifidobacterium probiotics, which have been claimed to possess the ability of suppressing the growth of various enteric and urinary pathogens. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: Screening Lactobacillus and Bifidobacterium sp. strains according to their activity in various environmental conditions could precede the clinical efficacy studies for adjunct treatment with probiotics in cure of different gastrointestinal and urinary tract infections.