恶生肿瘤组织中结核杆菌DNA的检测

目的 探讨结核杆菌感染与恶性肿瘤的关系。方法 采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测两种恶性肿瘤组织中结核杆菌ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ）。结果４１例恶性肿瘤组织中检出ＴＢ－ＤＮＡ阳性患者８例,占１９．５％,且ＴＢ－ＤＮＡ阳性患者肿瘤发病部位基本与结核病的好发部位一致。结论 结核杆菌感染可能与一些恶性肿瘤存在在特殊相关性。     

恶性肿瘤组织中结核杆菌DNA的检测

目的　探讨结核杆菌感染与恶性肿瘤的关系。方法　采用多聚酶链反应（ＰＣＲ） 技术检测两种恶性肿瘤组织中结核杆菌ＤＮＡ（ＴＢ－ ＤＮＡ） 。结果４１ 例恶性肿瘤组织中检出ＴＢ－ ＤＮＡ 阳性患者８ 例,占１９．５ ％ ,且ＴＢ－ＤＮＡ 阳性患者肿瘤发病部位基本与结核病的好发部位一致。结论 结核杆菌感染可能与一些恶性肿瘤存在特殊相关性。     

PCR法快速检测临床标本中结核杆菌DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）快速检测临床标本（脑脊液、胸水、腹水、血、痰液）中的结核杆菌ＤＮＡ,特异性扩增片段１２３ｂｐ,为结核杆菌的特异性重复序列ＩＳ６１１０部分基因。ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性达１０ｆｇＤＮＡ。临床标本的ＰＣＲ检测阳性率（２３．３％）明显高于抗酸染色涂片（２．９％）和细菌培养（５．７％）的阳性率（Ｐ〈０．０５）。通过设立对照系统及对扩增产物酶切分析,表明该法无假阴性结果（特异     

常用实验用近交系小鼠粒体ＤＮＡ遗传变异的分析

应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术,研究了分析了国内常用的实验用近交系小鼠线粒体ＤＮＡ（mtＤＮＡ）的品种间遗传变异。ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析发现,小鼠mtＤＮＡ的Ｄ－loop、tRNA^Met Glu Ile及ＮＤ３基因核酸序列,在４６个限制性内切酶酶切位点上均无差异;用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析方法对这些小鼠mtＤＮＡ的高变异区Ｄ－Loop的５′及3′端作进一步分析,亦未发现品种间遗传变异。结合mtＤＮＡ具有的母系遗传方式的特点,这一结果提示：常用的实验用近交系小鼠形成中可能只有１种雌性血统起了作用。     

应用套式PCR对恶性卡他热病毒在不同动物体内变异的研究

应用本实验建立的三组套式ＰＣＲ（ＰＣＲ１、２、３）和一组以前报道的套式ＰＣＲ（ＰＣＲ４）,对５９份外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）ＤＮＡ样品进行了恶性卡他热病毒（Ｍａｌｉｇｎａｎｔｃａｔａｒｒｈａｌｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ,ＭＣＦＶ）核酸序列的检测。这些样品来自５１只羊,以及与羊接触而发病的６头牛和２只鹿。除ＰＣＲ４外,其它三组ＰＣＲ都能扩增现有４个角马型ＭＣＦＶ分离株。有６只羊在４组ＰＣＲ中都呈阴性,其余５３份样品经ＰＣＲ４检测均呈阳性。ＰＣＲ１只能从４５只羊体检出ＭＣＦＶＤＮＡ,未能从牛和鹿体检出病毒ＤＮＡ。ＰＣＲ２检测的所有样品均呈阴性。在ＰＣＲ３扩增中,除２头牛外,其它５１份样品均呈阳性。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和限制性酶切分析,对ＰＣＲ１－４产物的特异性进行了鉴定。此外,敏感性实验表明,四组ＰＣＲ的差异也不明显。因此,本实验结果说明ＭＣＦＶ基因组在不同种动物之间发生了变异,羊体内的变异株可能是导致其它反刍动物发病的病原     

中华鲟（Acipenser sinensis）mtDNA个体间的长度变异与个体内的长？…

用ＰＣＲ技术扩增中华鲟线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）控制区时,发现中华鲟天然群体现人存在个体间和个体内的ｍｔＤＮＡ长度变异现象。ＤＮＡ测序表明,长度变异发生在ｍｔＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏｐ靠近ｔＲＡＮ＾ｐｒｏ的位置,由长约８２碱基对（ｂｐ）的重复序列串联形成的。     

利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究

设计一对ＰＣＲ引物,其中上游引物的５’端除目的基因外,还加Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列,以质粒（ｐＳＶＬＤ３）为模板,通过ＰＣＲ扩增出带有Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列的１３９ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该ｃＤＮＡ有２个碱基变异,以此ＰＣＲ产物为模板,通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其     

扩增大段靶DNA的PCR方法

扩增大段靶ＤＮＡ的ＰＣＲ方法陈尚武,王章（中山大学生命科学学院,广州）ＰＣＲ和分子克隆是扩增遗传物质的常用技术。热稳定Ｔａｑ（Ｔｈｅｒｍｕｓａｑｕａｔｉｃｕｓ）ＤＮＡ聚合酶的应用以及ＰＣＲ技术所固有的迅速、简便、廉价等优点,使ＤＮＡ片段的ＰＣＲ扩增成...     

免疫—PCR技术进展

免疫－ＰＣＲ结合了抗原抗体反应的特异性和ＰＣＲ的高敏感性,是一种极为敏感的抗原检测技术,并适合于各种微量抗原的检测。免疫－ＰＣＲ的关键在于形成抗体－标记ＤＮＡ偶联物,作为桥梁连接免疫反应的特异和ＰＣＲ的高扩增能力。本文简述了－ＰＣＲ的基流程以及与标ＤＮＡ相偶联,ＰＣＲ产物检测方法的进展。     

RAPD分析氮离子注入甜菊种子后的幼苗基因组DNA变异

应用ＲＡＰＤ 技术检测经低能氮离子注入甜菊纯系种子引起的幼苗基因组ＤＮＡ 变异。筛选出ＯＰＪ系列中的１５ 种引物对实验及对照基因组ＤＮＡ 进行了ＰＣＲ 扩增,共获扩增片段１０３ 条,分子量在０．３ － ３ｋｂ 之间,其中５ 种引物ＯＰＪ－ １ ,７ ,９,１１ ,１２ 扩增出差异片段１２ 条。结果表明,低能氮离子注入甜菊种子可引起体内基因组ＤＮＡ 发生突变;ＲＡＰＤ 技术是检测基因组ＤＮＡ 发生诱变的一种简便、有效方法。本文同时探讨了离子强度和Ｔａｇ ＤＮＡ 聚合酶用量对甜菊ＲＡＰＤ 分析结果的影响,以及氮离子注入诱变效应的可能机制。     

超高忠实性PCR用DNA聚合酶

ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）法已在生物工程领域得到了广泛的应用,而ＰＣＲ法的推广完全得益于Ｔａｑ耐热性ＤＮＡ聚合酶。近年来,ＰＣＲ法的应用除生物工程领域外,已应用至工业、农业、医学、制药等与人们生活息息相关的各个领域。随着ＰＣＲ法的不断推广,人们对ＤＮＡ聚合酶的忠实性（Ｆｉｄｅｌｉｔｙ）要求越来越高,一般来说,ＴａｑＤＮＡ聚合酶在进行ＰＣＲ延伸反应过程中的错配率为０．５％左右。ＴａＫａＲａ公司独自研制成功的ＰｙｒｏｂｅｓｔＤＮＡ聚合酶是一种来源于Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓｓ…     

利用RAPD技术快速鉴定番茄体细胞无性系变异

从以镰刀菌酸为选择剂筛选的番茄再生植株和未经筛选的植株叶片中提取ＤＮＡ,建立了适合番茄ＲＡＰＤ分析的ＰＣＲ条件,进一步在６０个随机引物中找到了４个可用于鉴定四个番茄品种体细胞无性系变异的引物。利用该法鉴定体细胞无性系变异不仅简单、迅速、可靠,而且因ＤＮＡ的用量少,不影响被检植株的后期生长,可尽早淘汰那些生理适应性而非分子水平发生变异的再生植株。     

斜茎黄芪根瘤菌的16S rDNA和23S rDNA PCR-RFLP比较分析

在表型性状数值分析和ＡＦＬＰ指纹图谱分析的基础上,选取５４株斜茎黄芪根瘤菌的代表菌株及已知根瘤菌参比菌株,进行１６ＳｒＤＮＡ和２３ＳｒＤＮＡ的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ比较分析。结果表明斜茎黄芪根瘤菌具有极大的系统发育多样性,分别具有２４个１６ＳｒＤＮＡ遗传图谱类型和２２个２３ＳｒＤＮＡ遗传图谱类型,１６ＳｒＤＮＡ与２３ＳｒＤＮＡＰＣＲ－ＲＦＬＰ聚类分析树状图谱有较好的一致性,但也存在一些差异。在对较大类群的划分上,它们的结果与表型性状数值分析结果有较好的一致性。将１６ＳｒＤＮＡ和２３ＳｒＤＮＡＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析     

RT—PCR测定mRNA的荧光定量分析

利用反转录毛细管ＰＣＲ技术,可合成代表特异ｍＲＮＡ的双链ＤＮＡ。在一定循环数内,ＰＣＲ产物的量与其模板ｃＤＮＡ即反转录中相应ｍＲＮＡ的浓度有关。溴乙锭嵌入ＤＮＡ双螺旋后,其荧光量子产率大为增加,因此可通过利用处在适当ＰＣＲ循环数中的ｃＤＮＡ浓度与在优选的激发光谱发现射波长下其荧光强度的线性关系,计算出所检测的ｍＲＮＡ表达量。     

大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因的cDNA克隆及序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ方法快速克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑神经元特异性烯醇化酶的ｃＤＮＡ,将此包括编码全长ＮＳＥ４３３个氨基酸的ＤＮＡ片段重组入ｐＵＣ质粒,并用ＰＣＲ方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Ｗｉｓｔａｒ大鼠与Ｆｏｒｓｓ－Ｐｅｔｔｅｒ报导的ＳＤ大鼠ＮＳＥ基因顺序,有两处单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变,同时还对ＲＮＡ的提取及长片段ＤＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ扩增进行了方法学的探讨。     

离子注入烟草种子引起的M1代变异分析

利用随机引物扩增ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术及ＳＤＳ－聚丙烯酰胺蛋白电泳技术,对３０ｋｅｖＮ＋离子注入后的烟草Ｍ１代ＤＮＡ及叶片水溶性蛋白进行分析,通过ＲＡＰＤ反应,检测到ＰＣＲ条带的缺失和增加,而对照植株未发现条带明显变化,并且条带变异率随剂量的增加而上升。６０次的剂量对烟草（红花大金元）诱变效果较好,有相对较高的成活率和变异率。还发现Ｎ＋离子注入后,Ｍ１代叶片水溶性蛋白与对照相比有明显变异;Ｍ１代植株株高普遍高于对照,并出现少数表型变异。     

人基因组YAC克隆DNA的Alu—PCR反应条件的系统研究

在人基因组ＹＡＣ克隆的Ａｌｕ－ＰＣＲ指纹分析中要求ＤＮＡ扩增带具有ＹＡＣ特征性;在Ａｌｕ－ＰＣＲ方法对ＹＡＣ克隆中的人类基因组ＤＮＡ片段进行特异的同位素标记时则要求被增标记的ＤＮＡ序列在插入片段中具有一定弥散性,我们建立了两种不同的Ａｌｕ－ＰＣＲ反应体系以满足这一不同要求,并已得到较为满意的结果,根据不同条件下的Ａｌｕ－ＰＣＲ结果,分析了多引发位点ＰＣＲ中的一些现象,并作了解释。     

用毛细管电泳技术检测DNA点突变

毛细管电泳(ＣＥ)是90年代初发展起来的新技术,具有分辨率高、重现性好、灵敏度高、快速和易于实现自动化的特点。后来又发展了激光诱导荧光检测器(ＬＩＦ),大大提高了分析灵敏度,对微量样品如单细胞分析等,具有很大的优势。通常,利用ＣＥ技术可以在20ｍｉｎ内分析完成几千个碱基的ＤＮＡ片段。ＣＥ可以应用于ＤＮＡ点突变的检测,目前在ＰＣＲ基础上利用ＣＥ技术对ＤＮＡ已知点突变及未知点突变的检测发展十分迅速。1.已知点突变的检测1.1　扩增抗拒突变系统ＰＣＲ(ＡＲＭＳＰＣＲ)和短串联重复ＰＣＲ(ＳＴＲＰＣＲ)　　ＡＲＭＳＰＣＲ和Ｓ…     

人基因组YAC克隆DNA的Alu－PCR反应条件的系统研究

在人基因组ＹＡＣ克隆的Ａｌｕ－ＰＣＲ指纹分析中要求ＤＮＡ且扩增带具有ＹＡＣ特征性;在用ＡｌＵ－ＰＣＲ方法对ＹＡＣ克隆中的人类基因组ＤＮＡ片段进行特异的同位素标记时则要求被扩增标记的ＤＮＡ序列在插入片段中具有一定的弥散性。我们建立了两种不同的Ａｌｕ－ＰＣＲ反应体系以满足这一不同要求,并已得到较为满意的结果。根据不同条件下的Ａｌｕ－ＰＣＲ结果,分析了多引发位点ＰＣＲ中的一些现象,并作出了解释。     

用于扩增较大片段DNA的PCR方法

用于扩增较大片段ＤＮＡ的ＰＣＲ方法方向东,陈淳（中科院上海生物化学研究所国家分子生物学实验室,上海２０００３１）诸江（上海第二医科大学上海血液学研究所,上海２０００２５）关键词ＤＮＡ扩增,ＰＣＲ自从Ｔａｑ（Ｔｈｅｒｍｕｓａｑｕａｔｉｃｕｓ）ＤＮＡ聚合...