免疫白粉病的小麦种内易位系的创制

以普通小麦Ａ５５２为父本、ＩＲＳ／ＩＢＬ黑麦和小麦易位系早抗为母本的杂种Ｓ３０６３,经Ｃ－分带和原位杂交鉴定,发现丢失了母本的黑麦成分,同时又发生了小麦种内易位,变成了５ＢＳ／７ＢＳ、５ＢＬ／７ＢＬ臂间双易位系。与此同时,白粉病抗性和一些农艺性状也发生了变化,此已己连续３年对白粉病免疫,且免疫条锈、叶锈和高抗黄矮病,每公顷５５２３千克,接近北京推广品种京冬６号     

巨穗小麦种质C—分带特征分析

对５个不同类型巨穗小麦种质材料进行Ｃ－分带分析,发现均有一对特征染色体存在,初步确定这对染色体为小麦－黑麦１ＢＬ／１ＲＳ易位染色体。     

组织培养与普通小麦异源易位系选育

以中国春小麦品种中８６０１、澳大利亚栽培小麦品种Ｓｕｎｓｔａｒ、Ｍｉｌｌｅｗａ作母本,与抗大麦黄矮病毒病（ＢａｒｌｅｙＹｅｌｌｏｗＤｗａｒｆＶｉｒｕｓ,简称ＢＹＤＶ）的小麦－中间偃麦草异附加系Ｌ１杂交,取杂种的幼胚和幼穗作离体培养,获得大量再生植株。经酶联免疫吸附分析（ＥＬＩＳＡ）、限制性内切酶长度多态性分析（ＲＦＬＰ）、染色体数目的检查和田间抗性鉴定,在再生植株回交后代中获得了抗ＢＹＤＶ的杂合易位株,经自交和花药培养纯合,选育出Ｄ１０９１、Ｄ１０９４、Ｄ１６５８、ＴＣ５、ＴＣ６、ＴＣ７等一批抗性稳定或基本稳定的普通小麦选系。以白黑麦６Ｒ二体附加系为抗源,与严重感染白粉病的陕７８５９杂交,经幼胚培养在再生植株回交后代中筛选到白粉病免疫的普通小麦杂合易位系。研究结果表明：在小麦远缘杂交中,组织培养可以作为导入外源基因产生易位的手段之一加以利用。     

应用荧光原位杂交和RFLP标记检测多小穗小麦新种质10-A中的黑麦染色质

利用ＡＰＡＧＥ、荧光原位杂交技术和ＲＦＬＰ标记,对导入黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅＬ．）多小穗等性状创制的小麦新种质１０＿Ａ进行了分子标记检测。ＡＰＡＧＥ分析发现,１０＿Ａ与其他１ＲＳ／１ＢＬ易位系一样,含有１ＲＳ的醇溶蛋白标记位点Ｇｌｄ１Ｂ３。以黑麦基因组总ＤＮＡ作探针,用中国春（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍｃｖ．ＣｈｉｎｅｓｅＳｐｒｉｎｇ）基因组ＤＮＡ作封阻,与１０＿Ａ根尖细胞有丝分裂染色体进行荧光原位杂交。结果表明,黑麦的１ＲＳ易位到１０＿Ａ中。用２５个ＲＦＬＰ探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析,进一步发现１０＿Ａ的１ＢＳ特异限制性片段发生丢失,代之以黑麦１ＲＳ的特异限制性片段,而位于其他染色体上的特异限制性片段未发生缺失。据此认为,多小穗小麦新种质１０＿Ａ属于１ＲＳ／１ＢＬ易位系。同时还讨论了１０＿Ａ在小麦遗传改良中的利用情况。     

三个小黑麦花粉株系的染色体组成分析与抗白粉病鉴定

对来自小黑麦与小麦杂种的３个花粉株系,ＤＨ２２０－４,ＤＨ２２０－５和ＤＨ２２０－１４进行了形态性状观察,染色体组成分析和抗白粉病鉴定。经过染色体形态和数目观察、原位杂交、Ｃ－分带、同工酶等电聚焦和贮藏蛋白的ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,证明其中两个株系,ＤＨ２２０－４和ＤＨ２２０－５是６Ｒ／６Ｄ代换系,另一个株系ＤＨ２２０－１４是１Ｒ／１Ｄ代换系。经人工接种鉴定,两个６Ｒ／６Ｄ代换系高抗白粉病。从而进一步证明黑麦的６Ｒ染色体上存在抗白粉病的基因。同时还对小麦遗传背景下异源染色体的识别及６Ｒ染色体的利用价值等问题进行了讨论。     

四倍体小麦—粗山羊草双二倍体抗病新种质的创制

通过四倍体小麦与粗山羊草杂交,利用幼胚拯救技术获得了ＰＳ５－Ｙ２８７双二倍体（ＡＡＢＢＤＤ）。该双二倍体ＰＭＣ ＭⅠ染色体构型基本稳定,对小麦白粉病表现免疫,对条锈、叶锈和秆锈病表现良好的田间抗性。并且该种质籽粒外观品质好,是一份有利用价值的小麦种质材料。     

抑制Pm8抗性表达的遗传学研究及Pm8抗性抑制基因的染色体定位

对不同１ＢＬ·１ＲＳ易位系品种中Ｐｍ８抗性表达的差异进行了遗传学及生化研究。结果表明,小麦抗白粉病基因Ｐｍ８位于１ＲＳ染色体上,但在一些１ＢＬ·１ＲＳ易位系品种中,Ｐｍ８的抗性表达受一对位于小麦染色体组中的显性抑制基因所控制。生化研究结果显示,在种子蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱上的低分子量区域,有一条醇溶蛋白带（称为ＳＢ带）与Ｐｍ８的抗性表达紧密相关。所有ＩＢＬ·ＩＲＳ感白粉病基因型都含有ＳＢ带。利用ＳＢ蛋白带做生化标记,可以准确预测１ＢＬ·１ＲＳ易位系品种对白粉病的抗感性。通过时１ＢＬ·１ＲＳ易位系品种格蓝森８１单体１Ａ种质的综合分析,进一步将Ｐｍ８抗性抑制基因定位于其相应的部分同源染色体１Ａｓ上。这一结果可能预示着小麦部分同源染色体之间的某些内在联系。     

一些小麦白粉病抗源抗性基因鉴定分析

研究鉴定了我国３７份小麦白粉病抗源的抗性基因,１９份材料不具有任何抗性基因;６份材料具有来自１ＢＬ／１ＲＳ易位系的抗性基因Ｐｍ８;５份材料具有抗性基因Ｐｍ５ａ;３份分别具有对目前欧洲所有生理小种均抗的抗性基因Ｐｍ２１、Ｐｍ１６和Ｐｍ１２;４份材料具有新的抗性基因。     

哑特猕猴桃微繁工艺流程的研究

选用哑特猕猴桃腋芽为外植体。在不同发育阶段适宜培养基组成：芽增殖生长培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ（或者ＩＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ;ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ）,其在苗基部呈辐射状萌发多个嫩枝与主茎伸长生长同步进行的繁殖特点,有利提高繁殖率。４０ｄ繁殖系数为５－７。诱导生根培养基为ＭＳ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ,生根率达９７．１％,培养３０ｄ,平均苗高３．５ｃｍ,     

普通小麦4A染色体重排的原位杂交研究

以普通小麦第四部分同源染色体组的１３个ＲＦＬＰ（限制性片段长度多态性）标记为探针,通过原位杂交进行了物理定位和４Ａ染色体重排的物理特征研究。ＲＦＬＰ分析确定的标记所在的染色体臂和原位杂交结果相一致。位于４ＡＬ上的９个ＲＦＬＰ探针有６个的杂交点集中分布在距着丝点约６０％～７０％的区域内。本结果支持了４Ａ染色体来自于双重易位的假说,第一次易位产生的４ＡＬ／５ＡＬ染色体又和７ＢＳ发生易位,现在的４Ａ染色体结构为４ＡＬ／５ＡＬ／７ＢＳ,保留在４Ａ的５ＡＬ、７ＢＳ染色体片段约分别为０５μｍ、２２μｍ。所用ＲＦＬＰ标记杂交点聚集的区段分布于染色体臂的近端部,可能和易位断点及染色体的交换重组有关。４ＡＬ上Ｃ－带距着丝点的相对距离和各标记杂交点集中区段距着丝点的相对距离接近。     

海甘蓝愈伤组织再生植株的研究

海甘蓝种子在附加有２～５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０１ｍｇ／ＬＮＡＡ的ＭＳ培养基上,幼苗生长健壮。幼苗的下胚轴和子叶柄在ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋０５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的培养基上可以获得较好的愈伤组织。将来源于下胚轴的愈伤组织培养于含有０５ｍｇ／ＬＮＡＡ,２ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的ＭＳ培养基上分化出的丛生芽状态最好。最佳生根培养基为１／２ＭＳ＋０５ｍｇ／ＬＢＡ。     

应用荧光原位杂交和RFLP标记检测多小穗小麦新种质10—A中的黑麦染 …

利用ＡＰＡＧＥ,荧光原位杂交技术和ＲＦＬＰ标记,对导入黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅＬ．）多小穗等性状创制的小麦新种质１０－Ａ进行了分子标记检测,ＡＰＡＧＥ分析发现,１０－Ａ与其他１ＲＳ／１ＢＬ易位系一样,含有１ＲＳ的醇溶蛋白标记位点Ｇｌｄ１Ｂ３。以黑麦基因组总ＤＮＡ作探针,用中国春（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｕｍｃｖ．ＣｈｉｎｅｓｅＳｐｒｉｎｇ）基因组ＤＮＡ作封阻,与１０－Ａ根尖细胞有丝分裂染     

玉米赤霉烯酮单克隆抗体酶联免疫测定方法的建立及初步应用

用ＺＥＮ－ＢＳＡ人工抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠,经融合,筛选和克隆化得到可稳定可泌抗ＺＥＮ单克隆抗体的杂交瘤细胞株ＺＥＮ－１Ｃ６。ＺＥＮ－１Ｃ６属ＩｇＧ１,纯化腹水抗体效价为１０＾－５,与５种衍生物的交叉反应系数为０．１６～１．２０％,用ＺＥＮ－１Ｃ６建立了检测食品（玉米,小麦,大米）中玉米赤霉烯酮的ＣＩＥＩＡ法。该法检测纯毒素的线性范围为５～１０００ｎｇ／ｍｌ,最低检出浓度为０．１ｎｇ／ｍｌ。平均回     

胡杨离体器官发生及试管无性系的建立

研究了离体条件下胡杨（Ｐｏｐｕｌｕｓ　ｅｕｐｈｒａｔｉｃａ　Ｏｌｉｖｅｒ）茎段、叶片及愈伤组织的器官发生和植株再生技术。离体培养以ＭＳ为基本培养基并附加４０ｍｇ／Ｌ腺嘌呤和５００ｍｇ／Ｌ水解乳蛋白。离体叶片和茎段在ＢＡ为０．５ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ为０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上诱导产生愈伤组织,并在含０．２５ｍｇ／ＬＢＡ和０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ的培养基上继代增殖。ＢＡ为０．５ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ为０．１ｍｇ／Ｌ可诱导叶片和愈伤组织发生不定芽,诱导频率分别为１００％和８２．９％,对于茎段,ＢＡ和ＮＡＡ分别为０．１ｍｇ／Ｌ和０．０１ｍｇ／Ｌ时诱导不定芽频率可达８３％。试管苗在大量元素减半并附加０．０１５ｍｇ／ＬＮＡＡ的ＭＳ培养基上诱导生根,生根率达８６．２％。     

组织培养诱导的普通小麦─黑麦代换系和附加系分子细胞遗传学检测

通过组织培养从普通小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）与八倍体小黑麦（×ＴｒｉｔｉｃｏｓｅｃａｌｅＷｉｔｍａｃｋ）杂种Ｆ０幼胚再生植株后代中获得２个代换系９３０４９８、９３０４８３和１个附加系９３００２９。以黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅＬ．）基因组ＤＮＡ为探针,采用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）证实了黑麦染色体的存在。在有丝分裂中期,经ＦＩＳＨ处理的黑麦染色体为黄绿色,明显区别于红色的小麦染色体。染色体配对、Ｃ分带、麦谷蛋白电泳分析,证明两个代换系为１Ｄ／１Ｒ代换,附加的也是黑麦１Ｒ染色体     

抗白粉病小麦染色体组型的分子标记与生化标记分析

应用与小麦第六同源群有关的分子和生化标记,包括ＤＮＡ探针ｐＳｃ５·３Ｈ３和ｐＳＲ１６７以及同工酶Ｅｓｔ－５和ａ－Ａｍｙ－１,对来自六倍体小黑麦Ｂｅａｇｌｅ与普通小麦科冬５８杂交后代Ｆ１花粉植株的抗白粉病株系Ｍ２４．Ｍ０９及Ｍ１７进行了分析。结果表明,Ｍ２４、Ｍ０９及Ｍ１７不同程度地含有黑麦染色体成分,而且电泳谱带差别较大,据此推断,Ｍ０９为６ＲＬ的易位系。因此,生化和分子标记不仅可以用于确定外源片段的存在,而且可以帮助确定染色体组型和外源片段的位置     

唐菖蒲球茎芽的离体培养及快速繁殖

将带１－２个芽眼的唐菖蒲球茎切块接种到附加１．０ｍｇ／Ｌ ＢＡ的ＭＳ基本培养基上可诱导休眠芽萌动。无菌芽转移至附加３．０ｍｇ／Ｌ ＢＡ的培养基上可分化产生丛生芽。丛生芽的幼代增殖宜采用附加１．５ｍｇ／Ｌ ＢＡ的培养基生根培养,以ＭＳ＋ＮＡＡ０．１－０．５ｍｇ／Ｌ或ＭＳ＋ＩＢＡ１．ｍｇ／Ｌ效果最佳。     

大叶紫花苜蓿愈伤组织原生质体再生植株

大叶紫花苜蓿下胚轴诱导的愈伤组织在继代培养基上生长快速,易于分散。继代第１２ｄ的愈伤组织原生质体的得率为６．５×１０７／ｇ鲜重。原生质体培养基为ＳＨ基本培养基,含有１．０ｍｇ／Ｌ２,４－０、０．５ｍｇ／ＬＢＡ、２．０ｇ／ＬＣＨ、２％蔗糖、６％葡萄糖、５ｍｍｏｌ／ＬＭＥＳ,培养密度为１．０×１０５／ｍＬ。培养至第１２ｄ时的原生质体再生细胞植板率为３．７％。由原生质体形成的小愈伤组织在含２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ的ＭＳ固体培养基上大量增殖。增殖的愈伤组织转移至２．０ｍｇ／Ｌ２－ｉｐ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ的Ｂ５培养基上,形成体细胞胚并发育成完整植株。     

丙型肝炎病毒C33_c单克隆抗体的研制和鉴定

用丙型肝炎病毒重组蛋白Ｃ３３_ｃ抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,运用杂交瘤技术成功地建立了７株能稳定分泌抗Ｃ３３_ｃ单克隆抗体的杂交瘤细胞１Ｈ６Ｄ２、２Ｇ１Ａ６、３Ａ４Ａ８、３Ｅ３Ｅ７、４Ｇ１２Ｃ１０、４Ａ１０Ｃ２、５Ｆ４Ｂ６．试验结果表明,７株ＭｃＡｂｓ具有良好的ＨＣＶ特异性,间接ＥＬＩＳＡ法测得小鼠腹水ＭｃＡｂ效价为１：１０￣４－１：４×１０￣４;竞争抑制实验和相加指数测定证实７株ＭｃＡｂｓ识别相关的抗原表位;７株ＭｃＡｂｓ中１株为ＩｇＭ（５Ｆ４Ｂ６）,其它６株为ＩｇＧ（２ａ）。     

杜仲愈伤组织超低温保存的研究

采用单因子比较、正交设计和均匀设计法,分别考察影响杜仲愈伤组织诱导、生长及其超低温保存的因素。试验表明：Ｂ５＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋６—ＢＡ１ｍｇ／Ｌ有利于意伤组织诱导。ＭＳ＋２．４—Ｄ３ｍｇ／Ｌ＋６—ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ则有利于愈伤组织快速生长。超低温保存的最佳材料是２周龄的愈伤组织。愈伤组织超低温保存的较好冷冻保护剂是１２．５％Ｇｌｙ＋７．５％ＰＥＧ＋２．５ｇ／ＬＬＨ。