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1.
水稻几丁质酶基因克隆RCH8的DNA结构分析 总被引:1,自引:0,他引:1
用DNA外切核酸酶Ⅲ和S1核酸酶生成连续缺失突变体,用Sanger双脱氧链终止法对该克隆进行双向DNA顺序测定,测序全长2049个碱基,初步确定了1057bp的5'端上游顺序,966bp不含内含子的完整编码区和可能的TATAbox等。所编码的322个氨基酸包括N-端20个氨基酸的信号肽,其后40个氨基酸长度的含8个半胱氨酸的hevein结构域和一个催化结构域。 相似文献
2.
以人睾丸组织总RNA为材料,用RT-PCR方法合成了人腺苷酸环化酶激活多肽(ACAP)编码区(530bp)和全长cDNA(1930bp)片段.并分别将这些cDNA片段克隆入pUC18载体的SmaⅠ限制性内切酶位点.对重组质粒分别采用直接DNA双链末端终止法和在核酸外切酶Ⅲ和核酸酶S1作用下连续缺失DNA后,相继克隆,构成一系列连续缺失的缺失体的方法,测定了全部核苷酸顺序.结果表明:ACAP编码区的cDNA顺序与已报道的有12处碱基的改变,其中11处碱基顺序的改变不引起编码的氨基酸变化,只有第385位的T→A后,才引起其编码的氨基酸由Ser→Thr,但由于Ser和Thr的理化性质极其相似,这一变化可能并不导致蛋白质的生物活性的变化.这些改变可能是由于种族、群体或个体的差异. 相似文献
3.
在以前工作中我们从人精子中分离纯化出一种与生育有关的糖蛋白,命名为BS-17。本文用其多克隆抗血清从人睾丸λgt11cDNA表达库中克隆了编码BS-17的cDNA片段。序列分析表明BS-17cDNA片段长791bp,开放阅读框架558bp,可编码186个氨基酸。经数据库检索,该cDNA片段与人Calpastatin(Ca ̄(2+)依赖的半胱氨酸蛋白酶calpain抑制剂)基因3’端顺序具有99.7%的同源,与Calpastatin蛋白质羧基末端同源性为99.5%。用cRNA进行组织原位杂交结果表明,BS-17基因表达于人精子减数分裂后期单倍精细胞阶段。 相似文献
4.
稻胚凝集素基因的克隆,序列分析及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
以水稻基因组DNA为模板,以特异引物经聚合酶链式反应方法扩增出稻胚凝集素基因并克隆到E.coli质粒pBluescriptSK(+)的SmaⅠ位点。序列分析表明,克隆到的基因片段大小为781bp,没有内含子,编码1条长227个氨基酸、分子量约23kD的肽链,其中N-端28个氨基酸是信号肽。与报道的稻胚凝集素cDNA序列进行顺序同源性比较,发现它们之间有很高的同源性(99.74%),其编码区第167 相似文献
5.
根据美洲商陆种子中一种抗真菌蛋白PAFP的N端部分氨基酸顺序,设计,合成一条5‘端寡核苷酸引物,通过3’-RACE技术从种子总RNA扩增出一约350bp的cDNA片段,成功地克隆到pGEM-T载体系统中。序列分析该,cDNA含有114bp的编码区,由此推导的38个氨基酸序列有36个与PAFP的序列相同,仅在第35,36位氨基酸分别由Cys,Lys代了后者的Gln和Ile。 相似文献
6.
测定了棉铃虫核型多角体病毒基因组DNA的Hind Ⅲ-K片段苷酸序列。该片段全长3255bp,含可编码大于40个氨基酸残基的多肽的开放阅读框15个,包括多体蛋白基因编码区3’端489bp和蛋白激酶HavPK基因编码区801bp。 相似文献
7.
利用多聚酶链反应技术,从人膀胱癌细胞系5637细胞中快速扩增并克隆了人粒细胞集落刺激因子cDNA,序列分析证明,该cDNA包含人粒细胞集落刺激因子的全部编码基因,全长612bp,编码30个氨基酸的信号肽和174个氨基酸的成熟蛋白。其中第43位codon出现一个碱基的突变(CAC→TAC)导至第43位氨基酸的改变(组氨酸→酪氨酸)。经逆转录病毒导入SP2/0细胞并初步表达。结果表明:该基因产物具有G 相似文献
8.
树Qu载脂蛋白CI cDNA序列及其组织表达 总被引:1,自引:0,他引:1
分离提取树Qu肝组织mRNA,经皮为模板,反转录构建了TS肝组织cDNA文库。利用制备的兔抗TS载脂蛋白CI多抗血清为探针筛选该文库,获得两个阳性克隆。测序及序列分析表明:两个克隆均为TSapoiCIcDNA基因。大的克隆由380个核苷酸要成,包括21bp,95bp组成的5’和3‘非编码区,264bp组成的一个完整开放阅读框架,编码88个氨基酸的apoCI前体,含26个氨基酸构成的信号肽和62肽的 相似文献
9.
从水稻矮缩病毒(Ricedwarfvirus,RDV)中国福建分离物中克隆分离了最外层外壳蛋白基因(S2)全长cDNA,并对其进行了序列分析,结果表明RDVS2cDNA全长3512bp,仅含一个3348bp的阅读框架,编码一个含有1116个氨基酸的蛋白(P2)。与基因库中已知基因序列比较,发现它与日本RDVH株系相应片段的核苷酸和氨基酸同源率分别为946%和954%,与轮状病毒VP2氨基酸序列有一定的同源性。S2核苷酸序列二级结构预测结果表明,5’端50个核苷酸的二级结构为一个发夹结构和一个茎环结构。P2有4个富含亮氨酸的区域,位于N端亲水区域的10个氨基酸(AA69~78)残基形成一个α螺旋,这些特点均与轮状病毒VP2的结构特征相似。SDSPAGE和Western印迹分析表明在大肠杆菌中分段高效表达了S2编码蛋白的N端和C端。 相似文献
10.
在以前工作中我们从人精子中分离纯化出一种与生育有关的糖蛋白,命名为BS-17。本文用其多克隆抗血清从人睾λgt11cDNA表达库中克隆了编码BS-17的cDNA片段。序列分析表明BS-17cDNA片段长791bp,开放阅读框架558bp,可编编码186个氨基酸。经数据库检索,该cDNA片段与人Calpastatin蛋白质羧基末端同源性为99.5%。用cRNA进行组织原位杂交结果表明,BS-17基因 相似文献
11.
水稻脂质转移蛋白基因的分离和分析 总被引:3,自引:0,他引:3
用水稻脂质转移蛋白(lipidtransferprotein,LTP)的cDNA(pFDRSC110)为探针,从水稻(OryzasativaL.sp.indica)“广陆矮4号”基因文库中筛选出LTP基因,完成了1.8kb长片段的序列测定。该基因编码一个121个氨基酸组成的肽,编码区中间有一个90bp的内含子,基因的调控区除有2个TATAbox和polyA加工信号外,还存在多个回文序列和逆向重复序列。该基因编码的蛋白质N端是由28个氨基酸组成的信号肽,同源性比较表明它具有典型的植物LTP特征。 相似文献
12.
根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因5’端序列和J区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的OKT3杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录生成cDNA,以cDNA为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行PCR,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入pUC19质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行DNA序列测定。所测重链可变区基因全长357bp,编码119个氨基酸,轻链可变区基因全长321bp,编码107个氨基酸。 相似文献
13.
大蒜花叶病毒外壳蛋白基因cDNA的克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
我们从自然发病的大蒜中分离得到了大蒜花叶病毒。以其基因组RNA为模板合成了3'末端部分cDNA。从中选出一批插入片段在2.0kb以上的重组克隆,经Northern点杂交分析证实了所选克隆与基因组RNA同源。通过对若干个克隆的插入片段两端部分序列的测定,选出一个克隆pGM495,其插入片段的长度约为2.4kb,3′末端存有一个Poly(A)结构,它应包含了编码该病毒外壳蛋白全部序列。序列测定的结果表明,这个cDNA片段全长为2379bp,其中含有与酶切图谱分析结果相符的EeoRI、PstI及BamHI酶切位点。第一个终止密码子TAA与3′g末端相距264bp,我们根据碱基序列推定的氨基酸序列与其它已发表的Potyvirus的外壳蛋白氨基酸序列以及外壳蛋白翻译后加工的蛋白酶专一切点相比较后推测,编码该病毒外壳蛋白序列可能起始于3′末端上游的1170bp处,共编码302个氨基酸,其分子量为36kD,略大于SDS-PAGE所测定的33kD,非编码区域长264bp,富含AT,并有多个终止密码子的存在。趾3′末端32~27bp处有一个AATAA序列。 相似文献
14.
以AcNPV凋亡抑制基因p35为探针,与LsNPVDNA的限制性片段和LsNPVDNAEcoRV片段杂交,发现EcoRV5.5kb片段有强烈的杂交信号。将此片段亚克隆后,测定了1244bp序列,发现一个完整的ORF,推导的302个氨基酸与AcNPVp35蛋白有70.4%的氨基酸同源性,证明所测ORF为LsNPV的p35基因。结构分析发现其5′端有早期基因启动子元件GC、ACGT和TATAbox。有22bp的顺向重复序列,包括由两个重叠的TATAbox和上下游两个ACGTmotif组成的两套启动子元件,这些结构特征与AcNPV的凋亡抑制基因十分相似。 相似文献
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测定了棉铃虫(Helicoverpaarmigera)核型多角体病毒(HaSNPV)基因组DNA的HindIIK片段核苷酸序列。该片段全长3255bp,含可编码大于40个氨基酸残基的多肽的开放阅读框(ORF)15个,包括多角体蛋白(ph)基因编码区3′端489bp和蛋白激酶HavPK基因编码区801bp。在ph和HavPK两基因之间鉴定出一个可编码412个氨基酸残基的ORF1236,转录方向与ph和HavPK基因相反。同源分析表明,ORF1236与谷实夜蛾(Helicoverpazea)核型多角体病毒(HzSNPV)的ORF8推导的蛋白氨基酸序列有95.9%同源性,与苜蓿丫纹夜蛾(Autographacalifornia)核型多角体病毒(AcMNPV)ORF1629只有24.8%同源性,但三者均含有二组由多个脯氨酸残基串联而成的特征基序。 相似文献
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水稻矮缩病毒最外层外壳蛋白基因(S2)cDNA克隆,序列分析及其在大?… 总被引:2,自引:0,他引:2
从水稻矮缩病毒(Ricedwarfvirus,RDV)中国福建分离物中克隆分离了最外层外壳蛋白基因(S2)全长cDNA并对其进行序列分析,结果表明RDVS2cDNA全长3512bp,仅含一个3348bp的阅读框架,编码一人含有1116个氨基酸的蛋白(P2)。与基因库中已知基因序列比较,发现它与日本RDVH株系相应片段的核苷酸和氨基酸同源率分别为94.6%和95.4%与轮状病毒VP2氨基酸序列有一定 相似文献
17.
使用RT-PCR方法克隆了Wistar大鼠脑α_1型甲状腺激素受体的cDNA,得到包含起始及终止密码子共1233bp、编码409个氨基酸的受体全长编码序列.酶切分析后,将此特异DNA片段重组入质粒pUC系统,得重组质粒pTRA.双脱氧末端终止法测定了全部核苷酸顺序,结果与文献报导的SD大鼠的结果一致,同时对长片段DNA的RT-PCR扩增进行了方法学的探讨。 相似文献
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大鼠脑α1型甲状腺激素受体基因cDNA克隆及序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
使用RT-PCR方法克隆了Wistar大鼠脑α1型甲状腺激素受体的cDNA,得到包含起始及终止密码子共1233bp、编码409个氨基酸的受体全长编码离列,酶切分析后,将此特异DNA片段重组入质粒pUC系统,得重组质料pTRA。双脱氧末端终止法测定了全部核苷酸顺序。 相似文献
19.
体外研究汉滩病毒(HTNV)S基因及其5'端表达的意义,为核蛋 白T细胞表位的研究奠定基础。设计2套引物,用PCR方法从PBV220-S22原核质粒中扩增出S 基因全读码框(37-1326bp)及S基因5'端(37-501bp),用TA克隆将其克隆入pcDNA3.1/V5-His-TOPO载体中,成功构建pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N真核表达载体,并通过脂质体转 染至Vero细胞中,进行了瞬时表达。间接免疫荧光成功检测到pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N在Vero细胞中的表达。pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N真核表达载体有较高的转染效率,目 的基因能在宿主细胞中表达,有利于研究HTNV-S基因在T细胞表位研究中的意义。 相似文献
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应用RT-PCR技术从分泌抗人黑色素瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞HB8760中克隆了抗体轻、重链可变区基因,然后用(Gly4Ser)3连接肽基因将VH、VL连接成ScFv基因,并进行了序列测定.计算机分析表明VH,VL均符合小鼠抗体可变区的特征,为功能性重排的抗体可变区基因.VH、VL、linker拼接正确.ScFv基因全长729bp,其中VH基因长360bp,编码120个氨基酸,VL基因长324bp,编码108个氨基酸.在噬菌粒表达载体pCANTAB5E中表达了可溶性的ScFv蛋白,表达产物经流式细胞仪检测可特异地与黑色素瘤细胞结合,不与肝癌、胃癌及良性黑痣细胞结合 相似文献