Isolation and reversion of protoplasts ofPleurotus sajor-caju

Summary The conditions for protoplast isolation and reversion inPleuro tus sajor-caju were determined. Spherical, osmotically sensitive protoplasts were released from the mycelia through the action of Novozym 234 and cellulase CP in a suitable osmotic solution. A maximum protoplast yield was obtained from young mycelia at an early exponential growth phase by the use of 0.6 mol/l MgSC₄ in a 0.01 mol/l phosphate buffer at pH 5.0. Mannitol appeared to be more suitable forPleurotus protoplast reversion. Two patterns of morphological development of the protoplasts were observed in the osmotic liquid medium. The reversion frequency was, however, low at 4–5%. There appeared to be no significant difference in the reversion frequencies of the protoplasts grown on the complete medium and on the minimal medium.

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Resumen Aislamiento y reversión de protoplastos en Pleurotus sajor-caju Se determinaron las condiciones para el aislamiento y reversión de protoplastos enPleurotus sajor-caju. Protoplastos esféricos y osmóticamente sensibles se obtuvieron a partir de micelio mediante la action de Novozym 234 y celulasa CP en un medio osmótico adecuado. El máximo numéro de protoplastos fueron obtenidos a partir de miclio joven en la primera parte de la fase exponencial de crecimiento utilizando 0.6 mol/l MgSO en un tampón fosfato (0.01 mol/l) a pH 5.0. Manitol parece ser adecuado para la reversion dePleurotus. Se observaron dos patrones de desarrollo morfológico de los protoplastos en el medio osmótico líquido. La frecuencia de reversion fue, sin embargo, baja (4–5%). No se observaron diferencias significativas entre los protoplastos obtenidos en el medio completo y los que lo fueron en un medio mínimo.

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Résumé Isolement et réversion des protoplastes de Pleurotus sajor-caju Les conditions pour l'isolement de protoplastes dePleurotus sajor-caju et pour leur réversion ont été déterminées. Des protoplastes sphériques et osmotiquement sensibles ont été préparés à partir du mycélium par action de Novozym 234 et de cellulase CP en milieu osmotiquement approprié. Le rendement maximum en protoplastes est obtenu à partir du mycélium jeune, en phase exponentielle précoce, dans un tampon phosphates 0,01 M à pH 5,0, contenant MgSO₄ 0,6 M. Pour la réversion des protoplastes, l'agent le plus favorable est le manitol. Deux modes de développement morphologique des protoplastes en milieu osmotique ont été constatés. Toutefois, la fréquence de réversion est faible (4 à 5%). Il ne semble pas que la fréquence de réversion soit significativement différente lorsque les protoplastes sont cultivés en milieu complet ou en milieu minimal.

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This work is part of the first author's PhD thesis submitted to the Department of Biology of the Chinese University of Hong Kong.     

Isolation of protoplasts from edible fungi

Summary Mycelium from the periphery of actively growing colonies on cellophane and from shake flask cultures was used for the isolation of protoplasts from strains ofAgaricus bisporus,Auricularia auricula, Lentinus edodes, Pleurotus sajor-caju, Volvariella bombycina andV. volvacea. The mycelial cells were treated with two mycolytic enzymes, Novozym 234 or lywallzyme. Protoplasts were produced from all the edible fungi tested.Pleurotus sajor-caju gave the highest yield (3.84×10⁷/ml), followed byAu. auricula (7.46×10⁶/ml),Ag. bisporus (2.16×10⁶/ml) andV. volvacea (1.92×10⁶/ml), when treated with lywallzyme.Agaricus bisporus gave the smallest yield of protoplasts when Novozym 234 was used. The effects of different molarities of osmotic stabilizers were also studied. The cellophane method is simple and quick and can be used as a screening procedure. The yields of protoplasts obtained from liquid cultures were usually higher than those from cellophane cultures.

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Aislamiento de protoplastos a partir de setas comestibles

Resumen Para el aislamiento de protoplastos de cepas deAgaricus bisporus, Auricularia auricula,Lentinus edodes, Pleurotus sajor-caju, Volvariella bombycina, y V. volvacea se utilizo micelio periferico de colonias que estaban en crecimiento activo en celofan y en frascos de agitación. Las celulas del micelio se tratarón con dos enzymas mycoliticos: Novozym 234 y lywallzyme. Todas las setas comestibles ensayadas produjerón protoplastos. Mediante tratamiento con lywallzyme la mejor cosecha de protoplastos la proporcionoP. sajor-caju (3.84×10⁷/ml) seguido porAu. auricula (7.46×10⁶/ml),Ag. bisporus (2.16×10⁶/ml) yV. volvacea (1.92×10⁶/ml). Con Novozym 234Ag. bisporus fué la de menor rendimiento. También se estudiarón los efectos de distintos estabilizadores osmoticos a diferentes molaridades.

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Isolement de protoplastes à partir de champignons comestibles

Résumé Du mycélium prélevé à la périphérie de colonies dévoloppées sur cellophane ou à partir de cultures liquides agitées a été utilizé pour la préparation de protoplastes d'Agaricusbisporus,Auricularia auricula, Lentinus edodes, Pleurotus sajor-caju, Volvariella bombycina etV. volvacea. Les cellules mycéliales ont été traitées par deux enzymes mycolytiques, Novozym 234 et lywallzyme. Par traitement avec le lywallzyme, des protoplastes ont été obtenus avec tous les champignons comestibles étudiés,P. sajor-caju donnant le rendement le plus élevé (3.84×10⁷/ml), suivi parAu. auricula (7.46×10⁶/ml,Ag. bisporus (2.16×10⁶/ml etV. volvacea 1.92×10⁶/ml). Avec le Novozym 234,Ag. bisporus a donné le rendement en protoplastes le moins élevé. Les effets de différentes molarités de stabilisateurs osmotiques ont également été étudiés. La méthode de la cellophane est simple et rapide et peut être employée comme procédé de degrossissage. Les rendements en protoplastes obtenus à partir des cultures liquides sont habituellement plus élevés que ceux à partir des cultures sur cellophane.

     

Rapid method for isolation and purification of protoplasts from epidermal tissue ofVicia faba L. leaves

Summary A method has been developed for isolating and purifying epidermal and guard cell protoplasts (ECPs and GCPs) from leaves ofVicia faba L. This method has three essential characteristics: 1) requires only small quantities of initial plant tissue; 2) is rapid, being based on a two-step enzymatic digestion and purification by discontinuous density gradient centrifugation using Percoll, and 3) gives a high viability of purified protoplasts. The procedure yielded about 6% ECPs and 10% GCPs on the basis of their occurrence on epidermal foliar tissue, the final suspension of protoplasts being 100% pure. Cell viability was assessed by the ability of each protoplast type to accumulate neutral red in their vacuoles. Values of 90% and 95% were obtained for ECPs and GCPs respectively. The complete lack of cell wall after enzymatic treatment was checked at the light microscope level by the absence of Calcofluor fluorescent staining of cellulosic material. Representative counts for purified ECPs and GCPs obtained at the interfaces of 20/30% and 40/80% Percoll gradients were 1.32×10⁵ and 3.7×10⁵ elements/ml, which represents a yield of 930 and 2,200 protoplasts/cm² of epidermal tissue respectively. The integrity of the plasma membrane and organelles after the isolation procedures was confirmed by transmission electron microscopy and by the ability of protoplasts to exclude Evans blue.

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Resumen Se ha desarrollado un método para el aislamiento y purifición de protoplastos de células epidérmicas y células guardianas (PCEs PCGs) de hojas deVicia faba L. Este método posee tres características esenciales: 1) solamente requiere pequeñas cantidades de tejido vegetal inicial; 2) rapidez, en base a una digestión enzimática de sólo dos etapas y centrifugación en gradiente discontinuo de Percoll, y 3) la elevada viabilidad de los protoplastos purificados. Este método permitió obtener ca. 6% de PCEs y 10% de PCGs sobre la base de su ocurrencia en el tejido epidérmico foliar, con una pureza del 100% para las suspensiones finales de protoplastos. Se determinó la viabilidad de cada tipo celular por su habilidad de acumular rojo neutro en sus vacuolas, obteniéndose valores de 90% y 95% para PCEs y PCGs respectivamente. Se determinó la ausencia total de pared celular después del tratamiento enzimático mediante microscopía de fluorescencia con Calcofluor, específico para sustancias celulósicas. El recuento de PCEs y PCGs purificados — obtenidos en las interfases 20/30% y 40/80% del gradiente de Percoll — fue de 1,32×10⁵ y 3,7×10⁵ elementos/ml, lo cual representó un rendimiento de 930 y 2200 protoplastosi cm² de tejido epidérmico respectivamente. La integridad de la membrana plasmática y de las organelas fue confirmada por microscopía electrónica de transmisión y por la habilidad de los protoplastos de excluir azul de Evans.

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Résumé Une méthode a été développée pour l'isolement et la purification de proto-plastes épidermiques (ECPs) et de cellules de garde (GCPs) de feuilles deVicia faba L. Cette méthode présente trois caractéristiques essentielles: 1) Elle ne requiert que de petites quantités du tissu végétal originel; 2) elle est rapide, car elle se base sur une digestion enzymatique en deux étapes et une purification dans un gradient discontinu de densité utilisant le Percoll, et 3) elle fournit une forte proportion de protoplastes prufiés bien vivants. La procédure fournit environ 6% d'ECPs et 10% de GCPs sur la base de leur présence dans le tissue foliaire épidermique et d'une suspension pure à 100% de protoplastes. La viabilité des cellules a été testée par la capacité de chaque type de protoplaste d'accumuler de rouge neutre dans ses vacuoles. On a obtenu des valeurs de 90% et de 95% respectivement pour les ECPs et les GCPs. L'absence totale de paroi cellulaire après le traitement enzymatique a été vérifiée au microscope optique par l'absence de fluorescence après coloration du matériel cellulosique par le calcofluor. Des comptages typiques pour les ECPs et les GCPs purifiés obtenus aux interfaces 20/30% et 40/80% des gradients de Percoll ont donné 1.32×10⁵ et 3.7×10⁵ éléments/ml, ce qui représente des rendements respectifs de 930 et de 2200 protoplastes par cm² de tissue épidermique. L'intégrité de la membrane plasmique et des organites après les procédures d'isolement a été confirmée par microscopie électronique à transmission et par la papacité de protoplastes d'exclure le bleu d'Evans.

     

Glucoamylase production byAspergillus awamori on rice flour medium and partial characterization of the enzyme

Summary Aspergillus awamori ATCC 22342 was selected from 12 strainsof Aspergillus spp.and Rhizopus spp. as the best producer of amylase. Optimal growth conditions for the enzyme production in shake flasks were provided by: a medium containing 60 g/1 rice flour, 0.075% (w/v) NaNO₂ and 0.075% (v/v) corn-steep liquor, a temperature of 30° C and initial pH value of 6.5. The enzyme was characterized as a glucoamylase with a molecular weight of 49,000. Maximum enzyme activity occurred at 45 C and pH 5.8. The enzyme was stable at 40° C and lost 70 and 90% of activity when heated for 30 min at 50 and 60°C, respectively. Thermal inactivation was slowed in the presence of starch. Michaelis-Menten constants for soluble starch and dextrin were estimated as 12.5 and 33.3 mg/ml, respectively. This enzyme may be used for the production of glucose-rich syrups from rice starch.

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Producción de glucoamilasa por Aspergillus awamori en harina de arroz y caracterización parcial del enzima

Resumen Aspergillus awamori ATCC 22342 se seleccionó entre 12 cepas deAspergillus spp. y deRhizopus spp. como el mejor productor de amilasa. La condiciones óptimas de crecimiento para la producción del enzima en frascos de agitación fueron las siguientes: un medio con la composicion siguiente: 60 g/1 de harina de arroz, 0.075% (m/v) NaNO₂ y 0.075% (v/v) de extracto de maíz (corn steep liquor); una temperatura de 30°C y un pH inicial de 6.5. El enzima fue caracterizado como una glucoamilasa de peso molecular 49,000. La máxima actividad enzimática se obtuvo a 45°C con un pH de 5.8. El enzima era estable a 40 C pero perdió un 70 y un 90% de su actividad cuando se calentó durante 30 min a 50 y 60° C respectivamente. La inactivación térmica fue más lenta en presencia de almidón. Las constantes de Michaelis-Menten para almidón soluble y para dextrina se estimaron como 12.5 y 33.3 mg/ml respectivamente. Este enzima puede utilizarse para la producción de jarabes ricos en glucosa a partir de almidón de arroz.

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Production de glucoamylase par Aspergillus awamori cultivé sur milieu à la farine de riz et caractérisation partielle de l'enzyme

Résumé Aspergillus awamori ATCC 22342 a été sélectionné parmi 12 souches d'Aspergillus spp. et deRhizopus spp. comme étant le meilleur producteur d'amylase. Les conditions optimales de croissance pour la production d'enzyme en fioles agitées sont: un milieu contenant 60 g/1 de farine de riz, 0.075% (w/v) de NaNO₂ et 0.075% (v/v) de liqueur de corn steep, une température de 30° C et un pH initial de 6.5. L'enzyme a été caractérisé comme étant une glucoamylase de poids moléculaire 49,000. L'activité maximum de l'enzyme se situe à 45°C et pH 5.8. L'enzyme est stable à 40°C et perd 70 et 90% de son activité par chauffage pendant 30 min à 50 et à 60°C, respectivement. L'inactivation thermique est ralentie en présence d'amidon. Les constantes de Michaelis-Menten pour l'amidon soluble et pour la dextrine ont été éstimées, respectivement, à 12.5 et 33.3 mg/ml. Cet enzyme peut être utilisé pour la production de sirops riches en glucose à partir d'amidon de riz.

     

Etude de la symbiose Rhizobium-legumineuse: Préparation de cellules isolées pour l'étudein vitro

Résumé En vue d'une étude, au laboratoire, de la nodulation et de la symbiose plante-bactérie des préparations de protoplastes de mésophylle et de nodule racinaire ont été effectuées chez le haricot (Phaseolus vulgaris variété Constant). Pour chaque préparation, les conditions opératoires et les concentrations optimales de cellulase et de pectinase en solution, dans du mannitol 0,6M ont été définies.Áprès 15 jours, 10 à 15% des protoplastes de mésophylle mis en culture dans le milieu B5 de Gamborg se divisent 2 à 3 fois. Des essais de fusion réalisés avec des faibles densités cellulaires entre protoplastes de mésophylle et protoplastes de nodule ont, donné des taux de fusion de l'ordre de 2,43%.

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Study of the symbiosis Rhizobium-legume: Preparation of isolated cells forin vitro study

Summary With a view to studyin vitro the processes of nodulation and plant-bacteria symbiosis, preparation of mesophyll protoplasts and root nodule protoplasts have been realized fromPhaseolus vulgaris (Constant var.).For every preparation the process of experimentation and optimum concentrations of cellulase and pectinase diluted in mannitol 0,6M have been defined.After a 15 days' period, 10 to 15% of mesophyll protoplasts divided twice or even three times in B5 Gamborg's medium. Although we used low rate cell concentrations, root nodule protoplasts and mesophyll protoplasts have been able to fuse in the proportion of 2,43%.

     

Nitrogen fixation in bambara groundnut,Voandzeia subterranea (L.) Thouars

Summary To improve biological nitrogen fixation in bambara groundut (Voandzeia subterranea (L.) Thouars), the relative effectiveness of 24 cultivars was studied in the field at two experimental stations selected for their different ecological conditions. Thirty oneRhizobium strains were isolated and 12 cultivars were screened during this study. Both indigenous and introduced NiftalRhizobium strains were used during a second study on host cultivars xRhizobium strains interactions. Nodulation index and shoot dry weight were used to assess the efficiency. The widest effectiveness spectrum was observed with the indigenous strain MAO 113 and the introduced strain TAL 22.

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Resumen Afín de mejorar la fijación biológica de nitrógeno en el cacahuete de Bambara (Voandzeia subterranea (L.) Thouars), se realizó un estudio de su efectividad relativa en campo en dos estaciones experimentales seleccionadas por sus distintas condiciones ecológicas. Durante este estudio se aislaron treintaiuna cepas deRhizobium y se probaron doce cultivares del huésped. En un segundo ensayo se estudiaron las interacciones huésped xcepa deRhizobium para lo cual se utilizaron cepas deRhizobium Niftal tanto indígenas como introducidas. La eficiencia se valoró determinado el índice de nodulación y el peso seco de la parte aerea. El espectro más amplio de eficacia se observó con la cepa indígena MAO 113 y la introducida TAL 22.

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Résumé Dans le but d'améliorer la fixation biologique d'azote dans la noix de Bambara (Voandzeia subterranea (L.) Thouars), l'efficacité relative de 24 cultivars a été étudiée sur le terrain dans deux stations expérimentales choisies pour leurs conditions écologiques différentes. Trente-etune souches deRhizobium ont été isolées et 12 cultivars ont été testés au cours de cette étude. Tant les souches indigènes deRhizobium que celles Niftal introduites ont été utilisées au cours d'une deuxième étude sur les interractions entre les souches deRhizobium et les cultivarshôtes. L'indice de nodulation et le poids sec de la pousse ont été utilisés pour l'établissement de l'efficience. Le spectre d'efficience le plus large a été observé avec la souche indigène MAO 113 et la souche introduite TAL 22.

     

Preparation of decolorized peptides from slaughter-house blood

Summary The haemoglobin from slaughter house blood is a waste produce due to the colour and off-flavour. Many methods for the decolorization of haemoglobin have been described; they are often unsatisfactory for operation on an industrial scale. This study demonstrates the use of aluminium oxide in order to decolorize a peptic hydrolysate of bovine blood. Peptides were obtained by this method both on the laboratory and pilot plant scale.

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Resumen La hemoglobina obtenida a partir de sangre de matadero es un producto no aprovechable debido a su color y mal olor. Se han descrito muchos métodos para decolarar la hemoglobina, pero estos no son generalmente adecuados para su utilización industrial. En este estudio se demuestra el uso del óxido de aluminio para la decoloración de un hidrolizado peptídico de sangre bovina. Los péptidos se obtuvieron tanto a escala de laboratorio como a escala semiindustrial en una planta piloto.

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Résumé L'hémoglobine provenant du sang d'abattoir est actuellement considérée comme un déchet, ceci à cause de sa couleur et de son odeur désagréable. Plusieurs méthodes de décoloration de l'hémoglobine ont été décrites; elles ne sont souvent applicables à l'échelle industrielle. Ce travail montre l'utilisation de l'alumine pour décolorer un hydrolysat pepsique de sang bovin. Des peptides ont été obtenus par cette méthode à la fois au laboratoire et au stade pilote.

     

Production of ethanol by a flocculentSaccharomyces sp. in a continuous upflow reactor using sucrose,sugar-cane juice,and molasses as the carbon source

Summary A flocculentSaccharomyces sp., isolated from spontaneously fermenting sugar-cane juice, was used to produce ethanol in a continuous upflow reactor. Media of different composition were tested using the same fermentation conditions. The best results were obtained fermenting either sugar-cane juice or molasses. The differences observed could be due to the influence of the medium composition on the growth rate and on the expression of the flocculent capacity of the yeast, both factors which modified the cell biomass concentration within the reactor.

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Resumen Una cepa floculante deSaccharomyces, aislada de jugo de caña de azúcar, se utilizó para producir etanol fermentando medios de distinta composición en un reactor continuo de flujo ascendente. Los mejores resultados se obtuvieron con jugo de caña de azúcar y con melaza. Las diferencias observadas según el mosto utilizado pueden deberse a la influencia de la composición del medio sobre la velocidad de multiplicación y capacidad foculante de la levadura, modificando de esta manera la concentración de biomasa dentro del reactor.

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Résumé Une souche floculante deSaccharomyces isolée du jus de canne à sucre a été utilisée pour produire l'éthanol, dans un réacteur continu à flux ascendant, par fermentation de milieux de culture de différentes compositions. Les meilleurs résultats ont été obtenus avec le jus de canne à sucre et les molasses. Les différences qu'on a vues selon le moût utilisé peuvent être dues à l'influence de la composition du milieu sur la vitesse de multiplication et la capacité floculante de la levure, donnant une modification de la concentration de biomasse dans le réacteur.

     

Production of ethanol by aZymomonas sp strain,free and immobilized in pectin

Summary AZymomonas sp strain, alcohol tolerant, isolated from spontaneously fermenting sugarcane juice, was tested for the production of ethanol in batch, free and immobilized in pectin. CaCl₂ was used during the preparation of the beads and also added to the fermentation medium to improve the stability of the beads. It was found that immmobilization, as well as CaCl₂ above 1 gl^–1 impaired fermentation to some extent. As theZymomonas-pectin beads maintained their fermentative capacity and mechanical stability during about 40 successive batch fermentations, this opens up the possibility of using them for the continuous production of ethanol. The role of free cells as well as the effect of the preincubation of the beads on fermentation are also discussed.

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Resumen Una cepa deZymomonas alcohol tolerante, aislada de jugo de caña de azúcar en fermentación espontánea, fue utilizada para ensayos de producción en lote de etanol, tanto libre como inmovilizada en pectina. En este último caso se utilizó CaCl₂ en la preparación de las perlas como así también como componente del medio de fermentación, con el objeto de aumentar la estabilidad de las perlas. Los resultados obtenidos indican que tanto la inmovilización como una concentración de Cl₂Ca en el medio superior a 1 g/l perjudicaron en cierto grado la fermentación. Las perlas deZymomonas-pectina mantuvieron la actividad fermentativa y estabílidad mecánica durante 40 fermentaciones en lote sucesivas, abriendo la posibilidad de su utilización en la producción continua de etanol. También se analiza la influencia sobre la fermentación de las células libres y de la preincubación de las perlas.

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Résumé Une souche deZymomonas sp., tolérante à l'éthanol, isolée d'un moût spontanné de canne à sucre, a été testée pour sa faculté de produire de l'éthanol en milieu non renouvelé, à l'état libre ou à l'état immobilisé dans la pectine. On s'est servi du CaCl₂ pour la préparation des billes. Le CaCl₂ a également été ajouté au milieu de fermentation pour améliorer la stabilité des billes. Tant l'immobilisation que la présence du CaCl₂ au delà de 1 g par litre inhibent la fermentation jusqu'à un certain point. Mais le fait que les billes deZymomonas dans le pectine conservaient leur capacité fermentative et leur stabilité mécanique pendant environ 40 fermentations successives en milieu non renouvelé, ouvre la possibilité de les utiliser néanmoins en production continue d'éthanol. On discute aussi le rôle dans la fermentation des cellules libres ainsi que l'effet de la préincubation des billes.

     

Ecology of microalgae in a high rate pond for piggery effluent purification in Singapore

Summary An integrated system for the collection, treatment and utilisation of piggery wastewater has been developed in Singapore which uses the cultivation of microalgae in high rate ponds to achieve reduction of BOD₅ and COD₅ of the effluent as well as producing single cell protein. A wide range of algal flora occurs in the ponds;Oocystis, Micratinium, Scenedesmus, Ankistrodesmus, Chlorella andOscillatoria spp were identified. Total algal counts, recorded from 1979 to 1981, ranged up to 10⁷ per ml of pond water. There were considerable variations in the algal population and in the predominating species. No discernible pattern was evident. Consequently pond operations were frequently disturbed by these fluctuations in population which in turn was attributed to the heterogeneous composition of the piggery waste, to variable weather conditions and to predation by larger organisms particularlyMoina. After passing through the ponds, the total suspended solids were removed by a novel dissolved air flotation method which gave a clear effluent showing an 87% reduction in BOD₅ value.

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Resumen En Singapur se ha desrrollado un sistema integrado para le recogida, tratamiento y utilización de aguas residuales de pocilgas. Este sistema usa el cultivo de microalgas en estanques, de caudal rápido afin de reducir las DBO₅ y DCO₅ del efluencte produciendo asimismo proteínas celulares. La flora de algas producida en estos estanques es amplia y variada, habiendose identificado:Oocystis, Micratinium, Scenesdemus, Ankistrodesmus, Chlorella y Oscillatoria. Los recuentos totales de algas tomados desde 1979 a 1981 llegaron a alcanzar 10;⁷ por ml de agua del estanque. Se observaron variaciones considerables tanto en la población total de algas como en las especies predominantes sin que se pudiese, determinar un patrón de variación característico. Estas fluctuaciones en la población, causantes de frecuentes alteraciones en el funcionamiento del estanque, se atribuyeron a la composición heterogenea de los resuduos, a las variaciones climáticas y la predación por otros organismos particularmenteMoina Después de su paso por los estanque los solidos suspendidos totales se eliminaron mediante un nuevo método de flotación con aire disuelto, obteniendose un efluente limpio con una reducción de la DBO₅ del 87%.

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Résumé Un système intégré pour la collecte, le traitement et l'utilisation d'eaux résiduaires de porcherie a été développé à Singapoure. Il utilise la culture de micro-algues tant pour la réduction accélérée en lagune de la DBO₅ et de la DCO de l'effluent que pour la production de protéines uni-cellulaires. On trouve une large gamme de flore algale dans les lagunes; des espèces d'-Oocystis, deMicratinium, deScenedesmus, Ankistrodesmus, deChlorella etd'Oscillatoria out été identifiées. Les comptages totaux d'algues, enregistrées de 1979 à 1981, ont donné jusqu' à 10⁷ cellules par ml d'eau de la lagune. On a observé des variations considérables de population algale tant quantitatives que qualitatives. On ne discernait pas de spectres évidents. En conséquence, les opérations lagunaires ont été fréquemment perturbées par ces fermentations en population, qui, à leur tour, ont été attribuées à la composition hétérogène de l'effluent de porcherie, aux conditions atmosphériques et climatiques variables et à la prédation par des organismes plus conséquents, plus particulièrement desMoina. Après passage par les lagunes, les solides totaux en suspension ont été enlevés par une méthode nouvelle de flottation à l'air dissous, qui a donné un effluent limpide, présentant une réduction de DBO₅ de 87%.

     

World culture collections ofRhizobium

Summary Reliable and efficientRhizobium germplasm banks are essential for the development of research and for practical application. The second edition of the World Catalogue ofRhizobium Collections lists 64 institutions in 38 countries holding some 3000 effective, tested strains. MIRCENs Culture Collections are playing an important role in this way and in the dissemination of valuable strains for legume inoculation. Constraints for development are: adequate facilities and equipment, trained personnel, co-ordination of effort. Recommendations are: preparation of an inventory on technical aspects, new directives for training and for next edition of the Catalogue, establishment of specialized germplasm banks.

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Resumen Los bancos de germoplasma deRhizobium son esenciales tanto para el desarrollo de la investigación como para el de las aplicaciones prácticas. La segunda edición del catálogo mundial de las colecciones deRhizobium cuenta con 64 instituciones repartidas en 38 países con un total de más de 3000 cepas de probada eficacia. Las colecciones de cultivos de los MIRCEN tienen un papel importante tanto en su valor intrínseco como en la distribución de cepas eficaces para la inoculación de leguminosas. Los principales problemas con los que se enfrenta su desarrollo son: facilidades adecuadas y equipamientos; personal cualificado y coordinación de esfuerzos. Las recomendaciones son: preparación de inventarios sobre aspectos técnicos; nuevas directrices para la formación de personal y para la edición de catálogos; establecimiento de bancos de germoplasma especializados.

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Résumé Des collections deRhizobium fiables et efficaces sont essentielles à la fois pour la recherche et pour les applications agricoles. La deuxième édition du catalogue mondial des collections deRhizobium comporte 64 institutions, situées dans 38 pays, et environ 3.000 souches testées. Les collections de cultures des MIRCEn jouent un rôle important sur le plan scientifique et en ce qui concerne la distribution de souches utilisées pour l'inoculation des légumineuses. Leur développement est soumis à des difficultés concernant les installations et l'équipement, le personnel qualifié, et la coordination des efforts. Il est recommandé de faire l'inventaire des aspects techniques et de formuler de nouvelles directives pour la formation technique, pour la prépartion d'une nouvelle édition du catalogue, et pour l'établissement d'une banque de gènes spécialisée.

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Invited paper presented at the VII International Conference on the Global Impacts of Applied Microbiology, Helsinki, 12–16.8.1985. Session 2     

Observations on the use ofSesbania rostrata as green manure in paddy fields

Summary Sesbania rostrata is a wild annual legume that grows in West Africa in waterlogged soils during the rainy season. This plant can bear N₂-fixing nodules on roots and stems at the same time. Stem nodules result from the infection of predetermined sites (dormant root primordia distributed on the stems) by a specific strain ofRhizobium. The mode of infection ofS. rostrata is unique among the legumes, as it involves both an intercellular invasion by rhizobia and the development of infection threads. Inoculation of the stems is achieved by spraying a liquid culture of the specificRhizobium on the shoots. Properly inoculatedS. rostrata can fix up to 200 kg N₂/ha in 50 days. A unique property ofS. rostrata is to nodulate and fix nitrogen even when the amount of combined nitrogen in the soil is high. Based on 1 m² microplot trials conducted in Senegal during the summer the use ofS. rostrata as green manure doubled rice yields. These results were later confirmed in trials conducted on 25 m² plots. In winter, when the day length is shorter,S. rostrata grows poorly but flowers readily.Sesbania rostrata trials should be conducted in two successive stages: (1) assessment ofS. rostrata behaviour in a given geographic region; (2) assessment of the effect ofS. rostrata green manure on rice yields.

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Observaciones sobre el uso de Sesbania rostrata como abono verde en arrozales

Resumen Sesbania rostrata es una planta leguminosa anual que crece espontaneamente en el Oeste de Africa en suelos inundados durante la temporada de lluvias. Esta planta puede formar nódulos fijadores de nitrógeno en raíces y tallos simultaneamente. Los nódulos en tallos resultan de la infección por una cepa específica deRhizobium de lugares predeterminados (primordios de raíces latentes, distribuidos en el tallo). El tipo de infección que ocurre enS. rostrata es único en leguminosas ya que aparte de una invasión intercelular deRhizobium conlleva el desarrollo de hebras de infección. La inoculación de los tallos se realiza pulverizando sobre estos una cultura líquida delRhizobium especifico mediante un spray.Sesbania rostrata adecuadamente inoculada puede fijar hasta 200 kg/ha de nitrógeno en cincuenta días. Una propiedad singular de esta planta es su capacidad para nodular y fijar nitrógeno aún cuando el nitrógeno combinado existente en el suelo sea elevado. En experiencias realizadas durante el verano en Senegal en pequeñas parcelas de un metro cuadrado el uso deS. rostrata como abono verde dobló la cosecha de arroz. Estos resultados se confirmarén más tarde en parcelas experimentales de 25 m². Durante el invierno cuando el dia se acorta nel crecimiento deS. rostrata se ve frenado y tiene lugar la floración. Los próximos ensayos conS. rostrata deberían de realizarse a dos nivels: (1) estudio del comportamiento deS. rostrata en una determinada área geográfica; (1) estudio del efecto de la utilización deS. rostrata como abono verde en arrozales.

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Observations sur l'utilisation de Sesbania rostrata comme engrais vert dans les rizières

Résumé Sesbania rostrata est une légumineuse annuelle poussant dans les sols inondés de l'Afrique de l'Ouest pendant la saison des pluies. Cette plante peut porter des nodules fixateurs d'azote à la fois sur les racines et sur les tiges. Les nodules de tige proviennent de l'infection de sites prédéterminés (primordia de racines répartis sur les tiges) par une souche spécifique deRhizobium. Le mode d'infection deS. rostrata est unique parmi les légumineuses; il comporte en effet deux étapes: invasion intercellulaire par lesRhizobiums et développement de cordons d'infection. On inocule les tiges en pulvérisant sur les parties aériennes une culture liquide duRhizobium spécifique. S'il est convenablement inoculé,S. rostrata peut fixer jusqu'à 200 kg N₂/ha en 50 jours. Une caractéristique remarquable deS. rostrata est de noduler et de fixer l'azote même en présence de doses élevées d'azote combiné dans le sol. Des expériences conduites pendant l'été sur des microparcelles de 1 m² au Sénégal ont montré que l'utilisation deS. rostrata comme engrais vert pourrait doubler les rendements du riz. Ces résultats ont été confirmés ultérieurement sur des parcelles de 25 m². En hivers, lorsque la durée du jour est plus courte,S. rostrata se développe mal et fleurit facilement. Les essais à conduire surS. rostrata doivent comporter deux étapes: (1) évaluation du comportement deS. rostrata dans une région géographique donnée; (2) évaluation de l'effet de l'emploi de l'engrais vertS. rostrata sur les rendements du riz.

     

Higher protective activity of Fab' fragment compared to F(ab')2 and IgG on experimental tetanus

Summary Horse sera containing anti-tetanus whole IgG molecules, bivalent F(ab')₂ fragments and monovalent Fab' fragments were injected in 24 groups of 10–20 mice to compare their protective activity. When tetanus was induced in the mice, either with toxin or with spore suspension ofClostridium tetani 24 or 32 h prior to the injection of the antitoxins, monovalent Fab' was significantly more efficient in conferring protection against tetanus than F(ab')₂ or IgG.

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Resumen Afín de comparar la actividad protectora frente al tétanos de moléculas de IgG enteras, fragmentos F(ab')₂ bivalentes y fragmentos Fab' monovalentes, se inyectaron, con suero de caballo que contenía las distintas moleculas, 24 grupos de 10 a 20 ratones. Se indujo el tétanos en los ratones 24 o 32 horas antes de la inoculación con antitoxinas, mediante la toxina o bien con una suspensión de esporas deClostridium tetani. El fragmento monovalente Fab' confirió una protección frente al tétanos significativamente mayor que F(ab')₂ y IgG.

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Résumé Des sera de cheval contenant soit des molécules d'IgG entier, des fragments bivalents F(ab')₂ ou des fragments monovalents Fab' ont été injectés dans 24 groupes de 10 à 20 souris afin de comparer leur activité protectrice. Lorsque le tétanos a été induit chez les souris, que ce fût avec la toxine ou avec une suspension de spores deClostridium tetani, 24 ou 32 heures avant l'injection des antitoxines, le fragment monovalent Fab' s'est révelé plus efficace de manière significative que le fragment F(ab')₂ ou l'IgG dans l'octroi de l'activité protectrice contre le tétanos.

     

Extracellular enzymes of some black aspergilli in Singapore

Summary Ten strains ofAspergillus niger and one strain ofA. awamori showed proteolytic activity and amylolytic and cellulolytic activities were observed in all the strains except inA. niger isolated from rice grains.Aspergillus awamori was shown to be the best producer of amylolytic enzymes but poorest for cellulases. All the strains were shown to be good producers of proteolytic enzymes while the strain from rubber wood seemed to be the best cellulase-producing strain. Both single conidium and hyphal tip inoculation techniques gave similar results. Differences in the levels of extracellular enzymes produced by similar strains were also observed using the two different techniques.

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Enzimas extracelulares de algunos aspergillus negros de Singapur

Resumen Se han aislado diez cepas deAspergillus niger y una deA. awamori que presentan buena actividad proteolítica. Todas las cepas, excepto una deA. niger, aislado de granos de arroz, mostraron, además actividades amilolíticas y celulolíticas. Los mejores productores de enzimas celulolíticas y amilolíticos parecen ser, respectivamente, la cepa deA. niger aislada de madera de caucho yA. awamori. Aspergillus awamori es, sin embargo, el peor productor de celulasas. Se han usado dos técnicas de inoculación, a partir de una solo conidio o bien a partir de un trozo de hifa, obteniéndose resultados comparables. Utilizando estas mismas técnicas se han observado variaciones en las cantidades de enzimas excretados por cepas semejantes.

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Enzymes exo-cellulaires de certains aspergilli noirs isolés à Singapour

Résumé Dix souches d'Aspergillusniger et une d'A.awamori ont été étudiées. Toutes ces souches ont une activité protéolytique et toutes, sauf une souche d'A.niger isolée à partir de grains de riz, ont des activités amylolytiques et cellulolytiques. Il a été constaté qu'Aawamori est le meilleur producteur d'enzymes amylolytiques, mais le moins bon producteur de cellulases. Toutes les sourches sont bonnes productrices d'enzymes protéolytiques, et celle provenant d'un arbre à caoutchouc est la meilleure productrice de cellulase. Les techniques d'inoculation avec une conidie unique ou avec une extrémité d'hyphe donnent des résultats similaires. Les différences de niveau des enzymes exo-cellulaires produits par des souches similaires ont également été observées avec ces deux techniques différentes.

     

Effect of organic compounds on the microbiological leaching of a complex sulphide ore material

Summary Microbiological leaching of metals from sulphide ore material was evaluated with a pure culture ofThiobacillus ferrooxidans and with three mixed cultures of acidophiles. Organic carbon amendment was found to be a prerequisite for the microbiological extraction of metals from this ore material, regardless of the culture tested. The concentration of the organic compounds necessary for the biological leaching was related to the pulp density of the ore material. Surfaceactive agents did not increase the recoveries of nickel, zinc, copper and cobalt but several complex organic materials had a positive effect on the bacterial leaching. The chemical leaching was not influenced by the test compounds.

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Resumen La extracción por disolución de metales de un mineral de azufre se evaluó utilizando un cultivo puro deThiobacillus ferrooxidans y tres cultivos mixtos acidófilos. Se observó que la adición de un corrector orgánico carbonadoera un prerrequisito para la extracción microbiológica de metales de este material, independientemente del cultivo utilizado. La concentración de compuestos orgánicos necesarios estaba relacionada con la densidad de la pasta del material. La recuperación de níquel, zinc, cobre y cobalto no se incrementó mediante la adición de agentes tensioactivos, aunque la incorporación de algunos productos orgánicos complejos tuvo un efecto positivo en esta extracción microbiológica. Ninguno de los compuestos ensayados influyó en la extacción por disolución química del material.

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Résumé La lixiviation microbiologique de métaux à partir de minerai de sulfure a été évaluée au moyen d'une culture pure deThiobacillus ferrooxidans et de 3 cultures mixtes d'acidophiles. Un ajout de carbone organique s'est révélé un préréquisite pour l'extraction microbiologique de métaux de ce minerai, quelle que soit la culture utilisée. La concentration en matière organique requise pour la lixiviation biologique dépend de la densité interne du minerai. Les agents tensio-actifs n'ont pas augmenté le recouvrement de nickel, de zinc, de cuivre ou de cobalt, mais plusieurs matériaux organiques complexes ont en un effet positif sur la lixiviation bactérienne. La Lixiviation chimique n'a pas été influencée par les composés testés.

     

Bacillus thuringiensis and microbial control of flies

Summary Some strains ofBacillus thuringiensis (B.t.) primarily the H serotype 1, produce in the surrounding medium a nucleotide, called thuringiensin, which is structurally related to ATP. Thuringiensin is a larvicide, affecting the moulting and pupation of certain species of the orders Lepidoptera, Diptera, Hymenoptera, Coleoptera and Orthoptera. The highest susceptibility is found in Diptera. Muscabac (Farmos Group Ltd.) is aB.t. preparation, registered in Finland for fly control in livestock buildings and compost toilets. It hasB.t. spores and thuringiensin as active components. Contrary to theB.t. products, based on the proteinaceous endotoxin and used for control of lepidopterous pests, Muscabac has a long-lasting effect due to the growth of the bacterium, and thus continued production of thuringiensin in the treated larval growth sites. Use of chemical insecticides has created a control problem because of the development of resistance. The possibility of fly resistance toB.t. has been tested, rearing 70 generations of the fruit flyDrosophila melanogaster in increasing concentrations of thuringiensin. No true resistance developed, neither was there cross resistance between chemicals and exotoxin. The efficacy of Muscabac for fly control has also been tested in compost and pit latrines in Dar es Salaam, Tanzania, with very promising results.

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Resumen Algunas cepas deBacillus thuringiensis, en especial la cepa H serotipo 1, excretan en el medio en el cual se desarrollan un nucleótido denominado thuringiensina, estructuralmente relacionado con el ATP. La thuringiensina tiene propiedades larvicidas que afectan a la muda y a la pupación de ciertas especies de los órdenes: Lepidoptera, Diptera, Hymenoptera, Coleoptera y Orthoptera; siendo los dípteros los que presentan mayor susceptibilidad. Muscabac (Farmos Group Ltd.) es un preparado a base deB.t., registrado en Finlandia, para el control de moscas en edificios utilizados por el ganado y en plantes de compostaje. Este preparado contiene esporas deB.t. y thuringiensina como ingredientes activos. Al contrario de los compuestos deB.t. a base de endotoxinas proteícas utilizados en la lucha contra plagas de lepidópteros, Muscabac tiene un efecto residual en los lugares de desarrollo larval tratados debido a la producción continuada de thuringiensina por las bacterias en crecimiento. La utilización de insecticidas químicos ha originado problemas de control debido al desarrollo de resistencias. La posibilidad de aparición de resistencia de las moscas aB.t. ha sido estudiada criando 70 generaciones sucesivas de la moscaDrosophila melanogaster en concentraciones crecientes de thuringiensina. No se observó el desarrollo de ninguna resistencia verdadera ni tampoco de resistencias cruzadas entre compuestos químicos y la exotoxina. La eficacia de Muscabac para el control de moscas se ha experimentado así mismo en fosas de compostaje y letrinas en Dar-es-Salam (Tanzania) con resultados prometedores.

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Résumé Certaines souches deBacillus thuringiensis (B.t.), notamment celles appartenant au sérotype H1, excrétent un nucléotide, appelé thuringiensine, qui est structurellement apparenté à l'ATP. La thuringiensine est un larvicide, agissant sur la mue et la pupaison de certaines éspèces de Lépidoptères, Hyménoptères, Coléoptères et Orthoptères. Les Diptères sont les insectes les plus sensibles. Le Muscabac (Farmos Group Ltd) est une préparation deB.t. brévetée en Finland pour la lutte contre les mouches dans les étables et les toilettes. Ses composantes actives sont constituées par un mélange de spores et de thuringiensine. Contrairement aux produits contenantB.t., lesquels ont pour base l'endotoxine protéique et sont utilisés pour la lutte contre les Lépidoptères nuisibles, Muscabac a une action persistante de longue durée, due à la croissance des bactéries et à leur production de thuringiensine dans les biotopes où se développent les larves. La lutte avec les insecticides expose à des problèmes de résistance acquise. La possibilité d'une résistance des mouches àB.t. a été étudiée en élevant 70 générations de mouches de fruits,Drosophila melanogaster, dans des concentrations croissantes de thuringiensine. On n'a pas constaté de résistance réelle, ni de résistance croisée aux produits chimiques et à l'endotoxine. L'efficacité du Muscabac pour la lutte contre les mouches dans des latrines et des fosses d'aisance a été testée à Dar-es-Salam et les résultats obtenus ont été prometteurs.

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Invited paper presented at the VII International Conference on the Global Impacts of Applied Microbiology, Helsinki, 12–16.8.1985. Session 8     

Population response of the twospotted spider mite,Tetranychus urticae, to host phenology in corn and peanut

In northeastern North Carolina, outbreaks ofTetranychus urticae Koch on commercial corn and peanut plantings were observed to coincide with flowering and fruiting of the crop host. In greenhouse studies, when equal mite numbers were started on plants in either vegetative or reproductive growth stages, populations increased significantly more after 3–4 weeks on reproductive plants of both corn and peanut. This direct response of mite populations to differences in plant phenology appears to be an important component in the population dynamics ofT. urticae. The importance of this effect in understanding mite outbreaks on corn and peanut is discussed, especially in reference to the corn-peanut agroecosystem in North Carolina.

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Réponse de populations deTetranychus urticae Koch., aux phénologies du maïs et de l'arachide

Résumé Les populations de tétraniques sont souvent associées à la floraison et à la fructification des plantes attaquées. Dans les agrosystèmes maïsarachide du N.E. de la Caroline du Nord, l'augmentation rapide de populations deT. urticae a été observée lors de la maturation des épis mâles du maïs et du maximum de floraison de l'arachide. Bien que ces observations suggèrent une relation causale avec la phénologie des plantes hôtes, il est difficile de déterminer dans les conditions de la nature si l'augmentation des populations d'acariens sur les stades reproducteurs des plantes est due à une réponse à la phénologie des cultures ou à une autre cause, comme le passé de la population ou une immigration. Des expériences ont été réalisées dans une serre pour mettre en évidence l'action de la phénologie du maïs et de l'arachide sur les populations d'acariens en maîtrisant ces autres hypothétiques facteurs. Des effectifs identiques d'acariens femelles ont été libérés sur des plantes à des stades tant végétatifs que reproductifs, et ensuite laissés sans interventions pendant plusieurs semaines, au bout desquelles les effectifs sur chaque plante ont été dénombrés. Sur les deux hôtes, les populations sur plante à un stade reproducteur avaient augmenté significativement plus que sur les plantes de même espèce à un stade végétatif. Ces résultats montrent queT. urticae répond directement à des différences entre plantes à un stade végétatif et à un stade reproductif. Cette réponse semble jouer un rôle important dans la dynamique des populations deT. urticae.

     

A single-step purification of an extracellular fungal laccase

Summary A single-step purification procedure forNeurospora crassa laccase is reported. It used Celite chromatography which permits the concentration of the extracellular enzyme from large culture volumes. This method is useful to isolate any fungal or plant laccase as well as other coppercontaining proteins. This work also takes advantage of the 100-fold induction of the enzyme by low concentrations of cycloheximide.

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Resumen Aquí se reporta un procedimiento de purificación en un solo paso para le enzima lacasa deNeurospora crassa. Consiste en el empleo de la cromatografía en Celite que permite la concentración de la enzima exocelular de grandes volúmenes de cultivo. Este método es útil para aislar cualquier lacasa de hongos o plantas así como otras proteínas que contienen sobre. En este trabajo, hemos aprovechado también la inducción de la enzima en más de 100 veces por bajas concentraciones de cicloheximida.

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Résumé Nous rapportons ici une procédure de purification en une étape de la laccase deNeurospora crassa. Elle consiste à employer la chromatographie sur Celite qui permet la concentration de l'enzyme exo-cellulaire à partir de grands volumes de milieu de culture. Cette méthode permet d'isoler n'importe quelle laccase fungique ou de plante ainsi que d'autres protéines à cuivre. Dans le présent travail, nous avons aussi tiré parti de l'induction au centuple de l'enzyme par de faibles concentrations en cycloheximide.

     

Isolation and identification of the predominant lactobacilli in elephant grass (Pennisetum purpureum) and Guatemala grass (Trypsacum laxum) silage from Bambui,Cameroon

Summary The predominant lactobacilli in silages made from elephant grass and Guatemala grass were strains ofLactobacillus casei. These were characterized by traditional taxonomic methods.

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Resumen Los lactobacilos predominantes en ensilados de pasto elefante y pasto guatemala eran cepas deLactobacilus casei. Estas cepas se caracterizaron mediante métodos taxonómicos tradicionales.

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Résumé Les lactobacilles prédominant dans les ensilages d'herbe à éléphant et d'herbe du Guatemala sont des souches deLactobacillus casei. Ces souches ont été caractérisées par les méthods taxonomiques traditionelles.

     

Cassava starch fermentation pattern ofRhizopus oligosporus

Summary Rhizopus oligosporus UQM 145F was grown on cassava starch medium without a preliminary treatment of starch. The fermentation pattern ofR. oligosporus is shown to be influenced significantly by the medium composition, pH of the growth culture and the size of the spore inoculum. By varying the carbon, nitrogen and mineral salt concentrations, it was found that either glucose accumulated due to excess hydrolysis of starch or single cell protein production became dominant. In the case of the carbon source, increases in the concentration of starch led to higher biomass values, but lower rates of protein production. These observations led to a new formulated medium, resulting in an 82.9% cassava starch utilization and a true protein yield of 5.32 g/100 g initial substrate. The response ofR. oligosporus to inorganic compounds such as (NH₄)₂SO₄, urea, NaCl and MgSO₄ indicates an interesting fermentation control system.

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Resumen Rhizopus oligosporus UQM 145F se hizo crecer en un medio a base de almidón de casava sin que hubiera pasado por un tratamiento previo con almidón. Se demostró que el patrón de fermentación seguido porRh.oligosporus estaba significativamente influenciado por: la composición del medio, su pH y el tamaño del inóculo. Al variar las concentraciones de carbono, nitrógeno y sales minerales se observó que predominaba la acumulación de glucosa o bien la producción de proteínas unicelulares. Un incremento en la fuente de carbono aumentó la biomasa pero disminuyó el ritmo de producción de proteínas. Estas observaciones permitieron elaborar un nuevo medio de cultivo que resultó en la utilización del 82.9% del almidón de casava con un rendimiento en proteínas de 5.32 g/100 g de sustrato inicial. La respuesta deRh. oligosporus a compuestos inorgánicos como sulfato amónico, urea, cloruro sódico y sulfato magnésico indican la existencia de un sistema de control de la fermentación muy interesante.

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Résumé On a fait croîtreRhizopus oligosporus UQM 145 F sur un milieu à base d'amidon de manioc sans traitement préalable de l'amidon. Le profil de fermentation parR. oligosporus apparaît être influencé de manière significative par la composition du milieu, le pH de la culture en croissance et la taille de l'inoculum de spores. En variant les concentrations en carbone, en azote et en sels minéraux, on remarque la prédominance tantôt de la protéine unicellulaire, tantôt de l'accumulation de glucose. Un accroissement en concentration conduit à des valeurs plus élevées de la biomasse mais en une moindre production de protéines. Ces observations ont abouti à une nouvelle formulation du milieu avec pour résultat une utilisation à 82.9% de l'amidon de manioc et un rendement vrai en protéines de 5.32 g/100 g de substrat initial. La réponse deR. oligosporus aux composés inorganiques comme le sulfate d'ammonium, l'uréi, le chlorure de sodium et le sulfate de magnésium sont indicateurs d'un système très intéressant de contrôle de la fermentation.