超滤法提取分离甘蔗叶多糖的研究

目的：应用超滤技术对甘蔗叶多糖进行提取分离。方法：采用切割分子量为50000、30000、10000和5000的滤膜对甘蔗提取液进行提取分离,葸酮-硫酸法测定多糖的含量。结果：甘蔗叶多糖的超滤法最佳分离纯化参数为温度30℃-40℃,压力差0．15MPa。膜面流速20m/s,相对分子质量为50000以上的多糖约占总糖的17．2％,而相对分子质量5000以下的寡糖和单糖约占35．5％。     

薯蔓多糖的分离纯化和性质鉴定

以我国资源量巨大的薯蔓为原料, 采用中试设备, 利用水提醇沉法提取多糖。研究了活性炭脱色工艺, 经初步纯化获得薯蔓多糖(PSPV), 并研究了其理化性质。DEAE-纤维素柱对来自于二个季节的PSPV进行分离、纯化, 分别得到PSPVⅠ和PSPVⅡ、PSPVⅢ三个多糖组分, 高效凝胶过滤色谱法测定三个组分的分子量分别为6.278×104 D, 3.801×104 D和1.418×104 D, 气相色谱结合标样测定单糖组成。研究结果为充分高效利用薯蔓资源提供了理论依据。     

薯蔓多糖的分离纯化和性质鉴定

以我国资源量巨大的薯蔓为原料, 采用中试设备, 利用水提醇沉法提取多糖。研究了活性炭脱色工艺, 经初步纯化获得薯蔓多糖(PSPV), 并研究了其理化性质。DEAE-纤维素柱对来自于二个季节的PSPV进行分离、纯化, 分别得到PSPVⅠ和PSPVⅡ、PSPVⅢ三个多糖组分, 高效凝胶过滤色谱法测定三个组分的分子量分别为6.278×104 D, 3.801×104 D和1.418×104 D, 气相色谱结合标样测定单糖组成。研究结果为充分高效利用薯蔓资源提供了理论依据。     

香菇多糖提取分离的研究

采用DEAE—cellulose柱层析和Sephadex G-200柱层析从香菇子实体热水浸提的粗多糖中分离出两个多糖组分Lenl—A、Len2-A,经旋光度法、Sepharose 4B柱层析、红外光谱等方法检测确定为均一多糖组分,且均为α-构型的吡喃糖,苯酚硫酸法测得其糖质量分数分别为91．5％和92．3％,旋光度为＋5．6°、＋11．2°,相对分子质量为375×10^3、718×10^3。     

香菇菌丝体多糖的分离鉴定与免疫功能研究

从香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ）菌丝体提取得到的粗多糖,经ＤＥ５２柱层析,得到均一的多糖成分,命名为ＬＥ。其平均分子量为５．０８×１０５,ＬＥ经红外（ＩＲ）和紫外（ＵＶ）光谱分析,为多糖蛋白质复合体,其中糖含量为９４．２％,蛋白质含量为５．８％。完全酸水解表明糖组成为单一的葡萄糖,蛋白质组成主要为Ａｌａ等１６种天然氨基酸。ＬＥ经完全甲基化、酸水解、乙酰化、薄层层析（ＴＬＣ）和［１Ｈ］核磁共振（［１Ｈ］ＮＭＲ）分析,确定其多糖部分的基本结构为１→３连接的葡聚糖,含有部分１→６侧链。此外,用反转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）和生物测定法分别研究了健康人外周血单核细胞中白细胞介素２（ＩＬ２）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）的基因表达和活性,结果发现ＩＬ２和ＴＮＦα的基因表达和活性均高于空白对照组,这表明ＬＥ可诱导某些免疫反应。     

5个不同灵芝种菌丝体多糖理化性质及免疫活性研究

对灵芝属G.lucidum,G.tsugae,G.oerstedii,G.resinaceum,G.subamboinens5个不同种用同一条件进行了液体发酵培养、多糖提取、理化性质及免疫活性的分析。结果表明,5种灵芝的菌丝体多糖得率相差较大,以G.oerstedii最高,但各多糖提取物分子量分布相似,单糖组成均以葡萄糖为主,并含半乳糖、甘露糖、盐酸氨基葡萄糖、岩藻糖。5种多糖提取物均能显著增强小鼠巨噬细胞Raw264.7吞噬作用、释放NO,但以G.subamboinens菌丝体多糖提取物的活性最强。这些多糖提取物还均能促进小鼠脾细胞的增殖,并对ConA诱导的淋巴细胞增殖有抑制作用。研究表明灵芝属内其他3个物种的菌丝体多糖提取物理化特征与G.lucidum和G.tsugae接近,并同样具有免疫调节作用。     

枸杞多糖LBP－I的分离纯化及性质鉴定

枸杞多糖ＬＢＰ－Ｉ的分离纯化及性质鉴定何进梁运祥张声华（华中农业大学生命科学技术学院,武汉４３００７０）（华中农业大学食品科学技术系）Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ,ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｐｅｒｔｙｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈ...     

应用超滤技术提取坛紫菜多糖的研究

以截留分子量为50 KD的超滤膜对坛紫菜粗多糖提取液进行超滤分离。结果表明,超滤对坛紫菜粗多糖提取液具有较好的脱色效果,脱色率达91.65%。超滤技术能很好地保留坛紫菜粗多糖中的生理活性物质,浓缩了坛紫菜粗多糖提取物,使粗多糖中总糖含量从超滤前的34.95%提高到52.07%,明显提高了坛紫菜粗多糖的糖含量,同时进一步纯化了样品。     

仙草多糖的分离纯化及鉴定

仙草(Mesona Chiliensis Benth)是我国的一种民间草药。用0.5％NaHCO_3抽提,乙醇沉淀得到了仙草多糖的粗品。经过H_2O_2脱色处理,Sephadex G-75柱层析和硫酸—苯酚法收集单一峰部分,得到仙草多糖纯品(简称MCPS),薄层层析、凝胶电泳和醋纤薄膜电泳证明其为均一性多糖。红外光谱扫描表明,它具有典型的多糖吸收峰。HPLC法测得相对分子量为4.3×10~4,经薄层层析确定MCPS的单糖组成为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖,半乳糖醛酸及一种未知单糖。药理实验表明,它具有免疫促进作用与抑瘤效应。     

香菇蛋白的分级纯化和结构分析

香菇粉经10℃pH 10的水提取制备香菇蛋白,得率13.1%,其蛋白含量47.5%,多糖含量24.2%.香菇蛋白经DEAE Sepharose CL-6B柱层析分级得5个级分,收集级分F1、F2、F3、F4,它们都是由蛋白和多糖构成的复合物.Sepharose CL-6B凝胶色谱显示,F2和F4的分子量分布较为均匀,且以蛋白为主,多糖含量很低;F3主要由两个分子量不同的蛋白级分构成,含有一定的多糖;F1中多糖含量较高,蛋白含量较少,且多糖分子量分布均匀.香菇蛋白的分子量主要集中在20 kDa～40 kDa之间.F1、F3、F4都属于酸性蛋白质,含有除色氨酸之外的7种必需氨基酸,除蛋氨酸含量较低外,其余必需氮基酸含量接近,且赖氨酸含量较高.红外光谱分析表明,香菇蛋白的二级结构主要为α-螺旋和无规卷曲.     

香菇谷氨酰胺转氨酶的分离和动力学研究

采用超滤,DEAE-纤维素和SephadexG-100层析,研究了香菇谷氨酰胺转氨酶的制备方法,对酶反应动力学的最适温度、最适pH、酶的稳定性和酶催化激活剂等进行了研究。结果表明,获得了香菇谷氨酰胺转氨酶,经SDS-PAGE电泳检测,为一均一性蛋白;香菇谷氨酰胺转氨酶酶动力学研究结果显示,最适温度为40℃,酶促反应的Vmax为0.020 4 mg/(mL.min),米氏常数Km为1.520 mg/mL。Na 、Ca2 、Pb2 、K 、Mg2 、Cu2 等离子对酶活影响甚微,为非Ca2 依赖性酶。该酶由2个亚基组成,分子量分别为53 ku和27 ku,pI为5.33。     

香菇杂交菌株辽香1号的初步鉴定

以申香4号、L26菌株为亲本,利用原生质体单核体杂交技术筛选获得1株高产、高抗、短柄的新菌株—辽香1号(Liao1)。形态学鉴定、拮抗实验、酯酶同工酶实验、ITS序列分析等是较常见且简单实用的菌株鉴定方法。采用上述方法对香菇菌株Liao1进行鉴定,以求得到科学结论,达到进一步推广的目的。结果表明,Liao1属于Lentinus edodes,但有别于其亲本申香4号、L26及其他供试菌株,可以初步认定为新菌株。     

Immunomodulatory beta-glucan from Lentinus edodes activates mitogen-activated protein kinases and nuclear factor-kappaB in murine RAW 264.7 macrophages

Lentinan, a cell wall β-glucan from the fruiting bodies of Lentinus edodes, is well known to be a biological defense modifier, but the signal transduction pathway(s) induced by Lentinan have not been elucidated. In this study, we extracted Lentinan (LNT-S) by ultrasonication from Lentinus edodes and report that, in murine RAW 264.7 macrophages, LNT-S glucan activated NF-κB p65 and triggered its nuclear translocation as determined by Western blotting. Moreover, LNT-S enhanced NF-κB-luciferase activity in the Dual-Luciferase gene system assay. Its upstream signaling molecules, MAPKs such as ERK1/2 and JNK1/2, were shown to be activated by assessing the level of phosphorylation in a time- and concentration-dependent manner, but its downstream proinflammatory enzyme, inducible NOS, was not observed. The data evaluated using a TNF-α ELISA kit and Griess reagent further demonstrated that no proinflammatory mediators such as TNF-α and NO were produced by LNT-S stimulation in RAW 264.7 cells. In contrast, LPS significantly induced inducible NOS expression and increased NO and TNF-α production, which are associated with activation of the NF-κB p65/p50 heterodimer complex. It is possible that LNT-S did not activate NF-κB p65/p50, and the activation of NF-κB p65 was not sufficient to stimulate cytokine production. These data demonstrate that LNT-S glucan carries out its immunomodulating activity by activating MAPK signaling pathways without secretion of TNF-α and NO.     

Production and isolation of chitosan by submerged and solid-state fermentation from Lentinus edodes

A method for the laboratory-scale production and isolation of chitosan (polyglucosamine) by liquid and solidstate fermentation from Lentinus edodes was developed. The yields of isolated chitosan were 120 mg/L of fermentation medium under liquid fermentation conditions and 6.18 g/kg of fermentation medium under solid-state fermentation conditions. The latter method, which gives up to 50 times yields than other chitosan production methods from fungi, provides a new flexible and easily scaledup procedure for the production of low acetylation degree chitosan. (c) 1996 John Wiley & Sons, Inc.     

香菇印gpd-Le和ras-Le启动子的功能分析

利用从香菇菌丝体中克隆的启动子片段gpd-Le(613bp)和ras-Le(715bp)分别连接于报告基因gfp(绿色荧光蛋白基因)的上游,构建了启动子功能活性检测表达质粒pLg-gfp和pLr-gfp。采用PEG介导法把表达质粒pLg-gfp和pLr-gfp分别与辅助质粒pCc1001(含有trp1基因)共转化进色氨酸营养缺陷型的灰盖鬼伞粉孢子的原生质体中。经过选择培养基筛选、假定转化子的分子鉴定以及GFP荧光检测。结果表明:香菇gpd-Le启动子在灰盖鬼伞的菌丝中具有较强驱动外源gfp基因表达的活性,在荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察到gfp基因表达的绿色荧光。而香菇ras-Le启动子没有检测到有驱动外源gfp基因表达的活性。     

Purification and Some Properties of Metal Proteinases from Lentinus edodes

To investigate the function of proteinases in the fruiting of Basidiomycetes, we purified the neutral proteinase in vegetative mycelium of Lentinus edodes. About 1.6 mg of purified enzyme was obtained from 1.5 kg of mycelium. The purified enzyme was confirmed to be monodispersive on disc electrophoresis.

The neutral proteinase was most active around pH 7.5 toward hemoglobin and 7.0 toward casein and was extremely labile with temperature. The enzyme was strongly inhibited by EDTA or Talopeptin (MK-I). The molecular weight and isoelectric point of the enzyme were 45,000 and pH 5.3, respectively. The enzyme contained no methionine residues. The enzyme hydrolyzed the bonds involving hydrophobic or bulky amino acid residues of oxidized insulin B-chain such as His-Leu (10–11 and 5–6), Leu (17)-Val (18) and Ala (14)-Leu (15).

These characteristics are compared with those of the metal proteinase in the fruit-body of the same fungus, which was purified and characterized at the same time as in vegetative mycelium. We also compare it with proteinases from other microbes.     

香菇子实体蛋白我糖的分离纯组成结构分析

香菇〔Lentinus edodes（Berk.）Sing.〕子实体经热水提取,乙醇沉淀,得多糖粗品（Le）。Le脱游离蛋白,脱色,经DEAE－纤维素柱及纤维素凝胶柱层析分离酏化和到Le－1、Le－2和 Le－33个级分。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和SepharoseCL－6B柱层析鉴定为分子量分布均一的蛋白多糖。凝胶渗透色谱法测得Le－1、Le－2和 Le－3分子量分别为954000,90000和14000。3个级分均由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸组成,气相色谱测得Le－1的阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖的摩尔比为0．39：0．46：1．00：0．93：14．13;Le－2为0．19：0．41：1．00：0．93：10．72;Le－3为0．31：0．47：1．00：1．15：8．92。Le－1、Le－2和 Le－3葡萄糖 醛酸含量（％）分别为24．10、34．77和40．05,蛋白质含量（％）分别为2．01、7．28和25．31,红外扫描确定Le－1和Le－2 的糖苷键为a型,Le－3为β型。