L615白血病小鼠肝、脾中cAMP依赖的蛋白激酶活力变化

cAMP不仅参与细胞的多种代谢调节过程,而且还和细胞的增殖、分化有关.cAMP要发挥其生理效应,需通过cAMP依赖的蛋白激酶才能实现.有报道认为肿瘤细胞的恶性行为可能和其细胞内cAMP水平下降有关.另有人认为肿瘤细胞内cAMP下降不是主要原     

前列腺素E_2对四氧嘧啶处理的新生大鼠离体胰岛细胞内环核苷酸含量变化的影响

将分离的新生大鼠胰岛细胞,分别置入四氧嘧啶,PGE_2,PGE_2和四氧嘧啶以及高浓度葡萄糖和四氧嘧啶液进行孵育,用RIA 法测细胞内cAMP和cGMP的含量。结果表明,四氧嘧啶使胰岛细胞内 cAMP含量明显降低 cGMP含量升高cAMP/cGMP 比值比正常鼠低2.79倍,但 PGE_2预处理可以防止由四氧嘧啶引起的cAMP 的降低和 cGMP升高,使胰岛细胞内cAMP/cGMP 比值维持在接近正常水平。高浓度葡萄糖预处理虽不能防止由四氧嘧啶引起的cAMP 降低,但因能使cGMP 和cAMP 值均降低,故cAMP/cGMP 比值仍接近正常水平。单纯 PCE_2可使胰岛细胞内 cAMP含量轻度升高cGMP值略下降,cAMP/cGMP比值比正常值外高1.49倍。上述结果提示PGE_2可能是通过调节胰岛细胞内环核苷酸水平,实现其对胰岛B细胞的细胞保护作用的。     

精氨酸加压素、神经降压素和强啡肽对神经母细胞瘤细胞cAMP和cGMP的影响

本文报道小鼠神经母细胞瘤细胞在无血清培养条件下,用cAMP和cGMP放射免疫测定方法,观察AVP、NT和DYN对小鼠神经母细胞瘤细胞内cAMP和cGMP水平及cAMP/cGMP比值的影响。结果发现:AVP使cAMP水平和cAMP/cGMP比值显著升高(P<0.01);DYN使cGMP水平升高(P<0.01),但cAMP/cGMP比值下降;NT使cAMP水平和cAMP/cGMP比值下降,同时又使cGMP水平升高。结果提示:这三种神经肽可以分别对神经母细胞瘤细胞内cAMP、cGMP水平和cAMP/cGMP比值产生影响。     

四膜虫S1营养生长和有性过程中cAMP的含量变化

用放射免疫法测定了四膜虫在群体生长各阶段和在有性过程中cAMP的含量变化。在群体生长的延迟期(Lag phase)之末,即将进入对数期时,cAMP含量出现一个峰值。随着对数期的进展,cAMP含量陆续下降,在对数期之末,cAMP含量降至最低值。群体进入静止期后,细胞内cAMP含量略有回升。 在饥饿诱导接台的过程中,细胞内cAMP含量在开始饥饿的很短时间内即迅速降至一个最低点,并且在整个接合过程中一直保持较低的水平。接合抑制剂伴刀豆球蛋白A(CoaA)和精胺(spermine)等在抑制接合的同时,也阻止饥饿细胞cAMP含量的迅速下降,使之不能达到在正制情况下接合出现时所达到的低水平。 在饥俄细胞的培养液中检出了较高量的cAMP。这可能有助于说明何以饥饿细胞的cAMP含量能够在很短时间内迅速下降。至于排出的cAMP对四膜虫的接合有无促进或其他作用,有特继续研究。     

FSH,EGF,胰岛素促进小鼠卵母细胞体外减数分裂恢复机制的研究

FSH、EGF和胰岛素均对体外培养的小鼠卵母细胞的减数分裂的恢复起促进作用,而FSH的促进作用滞后,但作用后使卵丘细胞扩散。三者的促进作用似受卵巢颗粒细胞内游离钙和cAMP的调节。EGF和胰岛素可使培养的颗粒细胞内的cAMP水平降低;同时FSH使单个卵丘细胞内的游离Ca~(2 )水平降低,而胰岛素无影响。所以FSH、EGF和胰岛素诱发卵母细胞成熟的机制不同:EGF通过细胞内Ca~(2 )的升高和cAMP水平的下降促使卵母细胞的减数分裂恢复;FSH降低卵丘细胞内Ca~(2 )的水平,但由于卵丘细胞与卵母细胞之间的联系被打断,最终使GVBD发生;而胰岛素的作用只涉及胞内cAMP的变化。     

环化腺苷酸对细菌生长的影响

用大肠杆菌(Escherichia coli AS 1.797)、北京棒状杆菌(Corynebacterium pekinense AS1.299)和巨大芽孢杆菌(Bacills megatertum AS 1.217)研究了细胞内环化腺苷酸(cAMP)浓度和外源cAMP对细胞生长的影响。结果表明,大肠杆菌在不同碳源中生长时,细胞的生长量随细胞内cAMF’浓度升高而降低。在以葡萄糖作碳源时,细胞内cAMP浓度低,外源cAMP。对生长有抑制作用,而cAMP的类似物5'-AMP则无抑制作用。在以乳糖、麦芽糖和甘油分别作碳源时,细胞内cAMP浓度高,外源cAMP对生长无影响。北京捧状杆菌以葡萄糖作碳源时,细胞生长也受外源cAMP的抑制,但cAMP的抑制作用不是专一的,它的作用可用类似物5’-AMP来代替。自身不合cAMP的巨大芽孢杆菌在不同碳原(包括葡萄糖)中生长时,生长不受外源cAMP抑制,也不受5’-Amt’的影响。因此认为,cAMP不是细菌生长的必需物,而是生长调节物,但这种调节物对巨大芽孢杆菌无效。     

小鼠BW5147细胞与网织红细胞融合后cAMP水平及其磷酸二酯酶的细胞化学观察

本实验用PEG介导,将小鼠BW_(5147)细胞与小鼠网织红细胞在体外进行悬浮融合,经HAT选择性培养基筛选获得的胞质杂交细胞,表现出增殖减慢、生长率下降、生瘤能力降低等去恶化现象。本实验从cAMP-PDE细胞化学反应显示出胞质杂交细胞内cAMP-PDE活性比亲本BW_(5147)瘤细胞有所减弱,而cAMP水平则有所升高,提示胞质杂交细胞恶性程度下降可能与细胞内cAMP-PDE活性降低和cAMP水平升高具有一定的关系。本实验的结果将为进一步探索促使肿瘤细胞逆转的可能途径提供一定的依据。     

丁酸钠对人胃癌和食道癌细胞的生物学效应

5mM丁酸钠可使人胃癌MGc803细胞形态发生改变,细胞变长,出现胞浆突起,趋向于成纤维细胞形态的变化,使食道癌ECa109细胞的核/质比下降。同时能抑制细胞增殖,使细胞生长率下降,丁酸钠对细胞增殖的抑制作用是随其浓度的增加而增强的,具有剂量依赖关系。丁酸钠可促进人胃癌MGc803细胞胞质中微管和食道癌ECa109细胞内中等纤维的组装,这种变化对丁酸钠处理后细胞形态的改变有关。丁酸钠可使细胞阻断于G_1期。??对3’,5’-cAMP—PDE(cAMP-磷酸二酯酶)活力具有强的抑制作用,并提高细胞内cAMP水平,从而抑制细胞增殖。这些结果表明丁酸钠对人胃癌MGc803和食道癌ECa109细胞具有一定的诱导分化作用。     

环化腺苷酸(cAMP)在孕酮诱导两栖类卵母细胞成熟过程中的作用

环腺苷酸(cAMP)作为一种第二信使,通过影响依赖于它的蛋白激酶活性,广泛参与细胞各种生理活动。孕酮既能够抑制卵母细胞腺苷酸环化酶的活性(作用位点在Gs亚单位上),又可从激活其磷酸二酯酶的活性,从而使卵母细胞内cAMP水平下降。实验证明,孕酮诱发的cAMP水平下降为卵球成熟早期的必要变化之一,同时对成熟来说又是充分的条件。cAMP水平下降似乎导致一种所谓的成熟蛋白质(MP)的磷酸化速度的减慢或抑制,和导致该蛋白脱磷酸化速度的加快,从而解除了它对卵球成熟的抑制作用。     

小鼠艾氏腹水癌细胞内3'''',5''''-环腺苷酸(cAMP)的免疫荧光细胞化学定位和外源性cAMP对癌细胞内cAMP的影响

本工作用显示cAMP的免疫荧光细胞化学方法观察了小鼠艾氏腹水癌细胞内cAMP的分布,并发现经外源性cAMP及氨茶碱处理后,有使小鼠艾氏腹水癌细胞内cAMP荧光增强的效应。cAMP主要分布在胞质内。实验组动物从接种癌细胞的次日起,每日从腹腔注射2毫克的cAMP和1毫克的氨茶碱,发现在接种后第9天,大多数癌细胞胞质内的cAMP荧光增强,以核周区胞质内的荧光最显著。进一步证实了我室以前用生化测定癌细胞内cAMP含量的结果。本文并对显示cAMP的免疫荧光细胞化学方法进行了讨论,用cAMP荧光染色反应的特异性鉴定证明了方法的可靠性。     

乳杆菌DM9811代谢产物中的RNA组分对宫颈癌细胞cAMP/cGMP影响

目的通过分析乳杆菌DM9811代谢产物中的RNA组分对宫颈癌细胞cAMP/cGMP影响,探讨乳杆菌对细胞作用的分子机制。方法采用细胞与分子生物学方法。结果乳杆菌代谢产物中的RNA组分对细胞的信息分子cAMP具有重要的调节活性。当除去代谢产物中的RNA分子刺激细胞时,细胞内的cAMP水平低于纯化后的RNA组cAMP水平,低了1.75倍,cGMP水平也出现了对应关系。结论乳杆菌DM9811代谢产物中的RNA组分对细胞内信息分子cAMP/cGMP具有调节作用。     

注射依赖cAMP的蛋白激酶催化亚基加速胚胎内细胞间连接通讯的发育(英文)

本研究以爪蟾胚胎内胚层细胞间连接通讯发育的时程为指标,观察了cAMP和依赖cAMP的蛋白激酶催化亚基对这一发育的影响。将依赖cAMP的蛋白激酶催化亚基注射入爪蟾胚胎四细胞期的每一个细胞可使该胚胎内胚层细胞间连接通讯的发育明显加快,提示在正常状态下这一发育的进程是受细胞内依赖cAMP的磷酸化水平的制约。但用双丁酰cAMP和磷酸二酯酶抑制剂对胚胎进行培育,或将cAMP和磷酸二酯酶抑制剂注射入胚胎细胞,对这一发育并无影响,可能是由于这些胚胎细胞内依赖cAMP的蛋白激酶的实际有效含量较低而cAMP含量较高所致。注射这种蛋白激酶催化亚基所诱导的胚胎细胞间连接通讯在注射后约8.5小时出现。这一时间比前人在哺乳动物细胞培养中用cAMP或必需的信使RNA诱导出细胞间连接通讯所需要的时间(2—4小时)长得多,提示在胚胎中依赖cAMP的磷酸化对细胞间连接通讯发育的作用是从RNA转录的水平上开始的。     

S_(180)-V系细胞周期中cAMP,cGMP含量与细胞形态变化扫描电镜的观察

本实验用氚标记环磷酸腺苷(~3H-cAMP)及碘标记环一磷酸鸟苷(I~(125)-cAGP)的放射免疫法,测定了体外培养S_(180)-V系细胞周期中悬浮的M期细胞和其贴瓶细胞与均相细胞内cAMP及cGMP的含量,并对相应的细胞形态的变化做了扫描电镜观察。此外,对这三种群体细胞体积进行了测量,据此对这些细胞内cAMP及cGMP浓度进行了换算。实验结果表明:M期细胞体积的平均值接近其它时相细胞平均细胞体积的2倍,M期细胞的cAMP含量明显低于贴瓶细胞和均相细胞内cAMP含量,而cGMP含量略有提高,但差异不显著,但cAMP/cGMP比值与贴瓶细胞(非M期的其它时相细胞)及均相细胞(包括M期时相的混合细胞)相比,显著降低,相差2—3倍。用扫描电镜对上述测定的各类细胞组份进行了对应的观察,从其外形的变化表明,S_(180)-V系细胞的骨架系统很不发达,在cANP含量低的漂浮组(M期细胞)比贴瓶细胞的骨骼系统更不发达.     

菊芋组织培养中cAMP-磷酸二酯酶的组织化学观察

在高等动物细胞中作为激素第二信使的cAMP早已引起人们的重视,其作用及其重要性已有不少的研究资料可以来说明,但在高等植物细胞中,此项研究工作开展甚少。cAMP在动物体内分布甚广,它具有广泛的生物学效应,它直接地影响许多酶的活性以及细胞内的生理生化过程。然而在植物细胞中cAMP分布情况如何?其生理生化效应又表现在哪些方面?不仅对cAMP的研究是需要的,而且对直接对cAMP起调节作用的腺苷环化酶(adenylate cyclase)和cAMP一磷酸二酯酶(3', 5'-cyclic adenylic acid-phosphodiesterase)的研究也同样是非常需要的。     

癌基因表达与膜分子侧向运动和cAMP转运的相关性(环核苷酸对癌细胞作用)

Ehrlich癌细胞在cAMP诱导下,于接种后5-7天癌基因c-myc、c-fos、c-H-ras、c-sis的表达强烈被抑制.与此同时癌细胞膜对cAMP转运增强.膜蛋白分子扩散系数[D]值下降,均以接种后7天最为显著P<0.01.可动分子百分比提高.这反映出癌细胞的分化变异.但至接种后9天,上述癌基因重新表达,膜蛋白分子扩散系数上升,cAMP转运下降,这可能是导致接种后11天癌细胞增殖急剧上升,细胞内cAMP水平下降的原因.说明Ehrlich细胞在去恶化及恶化过程中,癌基因表达变异.膜蛋白分子运动和癌细胞多种表型之间密切相关.     

癌基因表达与膜分子侧向运动和cAMP转运的相关性(环核苷酸对癌细胞作用)

Ehrlich癌细胞在cAMP诱导下,于接种后5-7天癌基因c-myc、c-fos、c-H-ras、c-sis的表达强烈被抑制.与此同时癌细胞膜对cAMP转运增强.膜蛋白分子扩散系数[D]值下降,均以接种后7天最为显著P<0.01.可动分子百分比提高.这反映出癌细胞的分化变异.但至接种后9天,上述癌基因重新表达,膜蛋白分子扩散系数上升,cAMP转运下降,这可能是导致接种后11天癌细胞增殖急剧上升,细胞内cAMP水平下降的原因.说明Ehrlich细胞在去恶化及恶化过程中,癌基因表达变异.膜蛋白分子运动和癌细胞多种表型之间密切相关.     

15甲基前列腺素F_(2α)对兔卵巢环磷酸腺苷和孕酮含量的影响

于假孕第7天的家兔,分別静脉注射15-甲-PGF_(2α)、HCG、HCG 15-甲-PGF_(2α),茶碱,茶碱 15-甲 PGF_(2α),观察用药后卵巢内 cAMP 和孕酮含量的变化。结果表明15-甲-PGF_(2α)能使卵巢内孕酮相 cAMP 含量明显下降,HCG 能促进孕酮合成,使卵巢内孕酮和cAMP 含量增加。HCG 和15-甲-PGF_(2α)联合应用则卵巢中孕酮和 cAMP 的含量与对照组比较均无显著差别,这表明15-甲-PGF_(2α)对 HCG 增加细胞内 cAMP 含量和促进孕酮合成均有颉颃作用,以上结果提示15-甲-PGF_(2α)的溶黄体作用与降低卵巢内 cAMP 水平是相关的。注射茶碱后卵巢内 cAMP 和孕酮含量均较对照组显著增加,茶碱是磷酸二酯酶抑制剂,表明茶碱增高孕酮的合成可能与提高卵巢细胞内 cAMP 水平是有关的,也表明磷酸二酯酶促进 cAMP转变为5′AMP 的过程也参与假孕兔卵巢孕酮合成的调节。茶碱与15-甲-PGF_(2α)合并应用后卵巢中 cAMP 和孕酮含量均不增加,与对照组比较无明显差別,表明15-甲-PGF_(2α)有颉颃茶碱使卵巢细胞内 cAMP 含量增加和促进孕酮合成的作用,实验结果进一步支持了15-甲-PG-F_(2a)溶黄体作用机制可能与细胞内 cAMP 水平降低有关。     

环六亚甲基双乙酰胺对人胃癌MGc80-3细胞的诱导分化及PKA-RⅡ与PKC-α亚型在细胞内分布的变化

用HMBA作为诱导分化剂.研究了HMBA对人胃癌MGc80-3细胞的诱导分化效应,并采用免疫荧光技术观察了PKA-RⅡ与PKC-α亚型在细胞内分布的变化.细胞经5mmol/L HMBA处理后,细胞形态产生明显变化.细长突起明显增加,生长速度减慢,倍增时间延长.24小时,48小时,72小时的生长抑制率分别为20%.40.6%.54.8%.细胞在软琼脂上生长不成集落.细胞周期时相的分布发生变化、G_0+G_1期比对照组增加18.4%.而s期细胞比对照组减少14.8%.细胞内cAMP、DG水平也发生了显著变化.HMBA处理24小时后.细胞内cAMP水平上升62%.DG水平下降64.7.处理48小时后.cAMP水平上升76.2%.而DG水平下降的69.8%.以上结果充分表明了HMBA对人胃癌MGc80-3细胞的诱导分化作用.实验中还发现细胞经HMBA处理后.PKC-α分布于胞质,而PKA-RⅡ向胞核移位.提示HMBA对细胞的诱导分化作用与信号传递通路密切相关.     

出生后心率变慢的窦房结调控机制

用离体兔心灌流、窦房结细胞动作电位记录、膜片钳实验和放射免疫分析细胞内cAMP含量等方法,研究不同周龄组兔心自律性变慢的心脏内源性因素。实验结果提示,离体心脏和窦房结标本在没有神经体液因素影响的情况下也有随周龄增长而自律性变慢的现象。进一步的实验提示,这可能是由于窦房结细胞内cAMP含量下降,使起搏离子流If的阈电位向负方向移位,造成窦房结细胞4期自动除极速率降低,最后导致心率变慢。上述结果表明,成长过程中的心率变慢,除有神经体液因素影响外,窦房结细胞本身自律性的改变也起了一定作用。     

环六亚甲基双乙酰胺对人胃癌MGc80-3细胞的诱导分化及PKA-RⅡ与PKC-α亚型在细胞内分布的变化

用HMBA作为诱导分化剂.研究了HMBA对人胃癌MGc80-3细胞的诱导分化效应,并采用免疫荧光技术观察了PKA-RⅡ与PKC-α亚型在细胞内分布的变化.细胞经5mmol/L HMBA处理后,细胞形态产生明显变化.细长突起明显增加,生长速度减慢,倍增时间延长.24小时,48小时,72小时的生长抑制率分别为20%.40.6%.54.8%.细胞在软琼脂上生长不成集落.细胞周期时相的分布发生变化、G_0+G_1期比对照组增加18.4%.而s期细胞比对照组减少14.8%.细胞内cAMP、DG水平也发生了显著变化.HMBA处理24小时后.细胞内cAMP水平上升62%.DG水平下降64.7.处理48小时后.cAMP水平上升76.2%.而DG水平下降的69.8%.以上结果充分表明了HMBA对人胃癌MGc80-3细胞的诱导分化作用.实验中还发现细胞经HMBA处理后.PKC-α分布于胞质,而PKA-RⅡ向胞核移位.提示HMBA对细胞的诱导分化作用与信号传递通路密切相关.