小熊猫出血性肠炎的病原初探

小熊猫出血性肠炎的病原初探张传彬,高巽坤,顾淑君,张再容,李光汉,钟顺隆,张安居,余建秋,李绍昌,陈立礼,柯红,秦光明华西医科大学微生物学教研组成都６１００４１成都大熊猫繁育研究基地、成都动物园四川省卫生防疫站１９９３年成都大熊猫繁育研究基地饲养的小...     

大熊猫和小熊猫犬瘟热病与疫苗免疫现状

犬瘟热病(Canine Distemper)是由犬瘟热病毒(CDV)引起敏感动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。在临床上以双相热、卡他性鼻炎以及随后引起支气管炎、卡他性肺炎、严重胃肠炎和神经症状等为主要特征,发病率几乎达100%,死亡率达50%~80%,素有“毁灭性传染病”之称[1~3]。该病最早发现于18世纪后叶,1905年Carre氏发现其病原为病毒,因而本病又名Carre氏病。病原为副粘病毒科麻疹病毒属的犬瘟热病毒,属于RNA病毒,呈球形,大小为150~300 nm[2,3]。一般认为CDV只有一个血清型。但近年的研究表明该病毒出现了变异毒株[4~10]。目前本病分布于世界各地。其发病率和死亡率在敏感动物各科之间以及同科之间存在较大的差异,如该病对雪貂的致死率接近100%,而对家犬的致死率则在50%~70%之间[11~13]。除犬科动物、鼬科、浣熊科等动物高度易感外,犬瘟热病毒对大熊猫和小熊猫也高度易感,并且已成为威胁大熊猫和小熊猫种群数量和生命安全的第一大烈性传染病[11,14~19]。至今为止,对于该病的防治措施除采用疫苗进行定期的免疫接种加以预防外,全球范围内尚无特异性治疗方法[11]。然而,...     

犬瘟热减毒疫苗对小熊猫安全性与免疫原性研究

犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)是副粘病毒科麻疹病毒属成员,与麻疹病毒和牛瘟病毒亲缘关系很近,其基因组为不分节、非重叠的负链RNA,长15 960bp,由6个基因组成,编码N、P、M、F、H、L蛋白.此外,还包括由P基因编码的V和C蛋白[1].由CDV感染引起的犬瘟热,是一种急性、高度接触性传染病,主要引起犬科、鼬科和浣熊科动物的犬瘟热(CD),但是伴随生态环境的变化和犬瘟热病毒对动物流行病因素的适应,它的自然感染宿主范围在不断扩大,危害也越来越大.大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)是我国特产的世界级珍稀濒危动物,由于大熊猫具有极高的科研和观赏价值,成了世界人民保护自然资源的象征.近年来有大熊猫发生CD的报道[2],研究大熊猫CD的预防是必要的.小熊猫作为浣熊科的动物,对CDV非常敏感[3].本研究通过犬瘟热减毒疫苗对小熊猫安全性与免疫原性研究,探讨小熊猫作为评价犬瘟热弱毒疫苗对大熊猫的安全性与免疫原性动物模型的可能性.     

犬瘟热病毒小熊猫株反向遗传系统的构建及其鉴定

以驯化致弱的犬瘟热病毒小熊猫株(Canine distemper virus,CDV)为模板,构建犬痘热病毒感染性cDNA克隆.对其全基因组序列测定后,用RT-PCR的方法获得组成全长基因的7个片段,通过酶切、拼接将7段CDVcDNA序列插入到真核表达载体pCI的MCS上,构建犬瘟热病毒小熊猫株的全长cDNA质粒(pCI-CDV-LP),同时分别克隆CDV小熊猫株N、P、L蛋白ORF构建三个辅助质粒.酶切鉴定和序列测定表明,pCI载体中插入的核酶及CDV cDNA序列正确无误,使用转染试剂Lipofectamine TM 2000将全长质粒和三个辅助质粒共转染中国仓鼠肾细胞(BSR),经RT-PCR、间接免疫荧光和病毒感染VERO-SLAM细胞试验鉴定,成功拯救出CDV小熊猫株,显示CDV小熊猫株反向遗传系统构建完成,为犬瘟热病毒致病机理及免疫研究奠定基础.     

圈养小熊猫繁殖行为变化及繁殖行为对策

In order to investigate the change of reproductive behaviors and understand reproductive strategies of both male and female red pandas, one-year behavioral observation was conducted through the focal sampling method in the Chengdu Research Base of Giant Panda Breeding from December 1999 to November 2000. Our results indicated that reproductive behaviors showed significant differences between the estrous and non-estrous seasons. Frequencies of the rubbing anogenital, sniffing and licking marking were much higher in estrus than in non-estrus. Bleating only appeared in the estrus and can be regarded as an estrous indicator.The result also demonstrated that both male and females applied different reproductive behavioral strategies. Frequencies of activity, rubbing anogenital, licking and sniffing marking, and bleat were much higher in the male than in the female. However, those of resting and investigating were much lower in the male than in the female. This indicated that the male was more active than the female during the estrus and might imply that the male acts mainly as an estrous message sender, and the female as a message receiver in the estrous season.     

小熊猫肾脏和输尿管的组织学研究

小熊猫的肾脏呈蚕豆形,表面光滑不分叶,只有1个肾锥体和1个肾盏,无肾盂。肾脏皮质内可见皮质迷路和髓放线。皮质迷路内有近曲小管、远曲小管和肾小体等结构。髓放线内有近端小管直部和远端小管直部。髓质可分为外髓和内髓两个区域。外髓有较多的集合管断面,少量的远端小管直部和细段,较多的直小血管束。内髓部位有大量的细段和乳头管。各种泌尿小管之间有少量的疏松结缔组织构成的间质,间质内有丰富的毛细血管。输尿管横切面呈圆形或卵圆形,管腔呈不规则的裂隙状。管壁由粘膜、肌肉层和外膜组成。并与大熊猫肾脏和输尿管的组织结构作了比较研究。     

小熊猫胃的解剖和组织结构研究

小熊猫的胃属单室腺型胃,它以角切迹为界,可分为胃底部和幽门部两部分。胃壁由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜四层组成。四上皮为单层柱状上皮,具有分泌粘液的功能。胃腺有贲门腺、胃底腺、幽门腺三种,但贲门腺不发达。主细胞、壁细胞和粘液细胞的数量与分布呈现规律性变化。肌层发达,特别是内环行肌发达。并与大熊猫胃的结构作了比较。     

犬瘟热和犬冠状病毒联合RT-PCR检测方法的应用

塔里木农垦大学乔军、解放军大学夏咸柱、东北农业大学何宠彬等对此课题进行了研究。他们利用犬瘟热(CDV)和犬冠状病毒(CCV)牧异性引物对同一样品中CDV和CCV的RNA模板进行联合RT—PCR扩增,并优化其扩增条件,得到两条大小与试验设计完全相符的特异性扩增带,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、轮状病毒的核酸。其敏感性试验表明：该联合PCR能检测出10^-4倍稀释的CDV模板(10^6.6TCID50／0．1mL)。对7份临床发病犬病科检测,其阳性检出率可高于电镜负染检查。这表明此法有高度敏感、特异、准确、快速等特点,适用于当前民用和军用兽医临床对CDV、CCV的检测和对犬的其他疾病的鉴别诊断。     

小熊猫颈髓灰质细胞构筑的研究

作者以冰冻切片,尼氏染色,参照Rexed氏关于猫脊髓细胞分布与灰质的原则,对我国珍稀动物—小熊猫颈髓灰质作了详细观察。 材料和方法 成年小熊猫经Lillie氏液灌注固定,取脊髓按节段作冰冻切片(80和40微米横切片和部分纵切片);以甲苯胺兰染色,部分切片作fast blue染色用中性红复染。按Rexed分层标准观察并绘图、摄影,细胞大小用目镜测微尺直接测量。     

犬瘟热病毒XJ株的分离鉴定

应用犬肺原代巨噬细胞,从新疆阿克苏送检的一只病死犬肺脏中分离出1株犬瘟热病毒,并对其进行了形态学、理化学、血清学、动物感染试验、分子生物学鉴定。结果证明所分离的XJ株为1株CDV的强毒株。     

犬瘟热病毒反转录—聚合酶链反应诊断方法的建立和初步应用

根据Ｂａｒｒｅｔｔ报道的犬瘟热病毒Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株的融合蛋白基因序列,设计合成了一对能扩增３２４ｂｐ基因片段的引物。将异硫氰酸胍－酚－仿一步法提取得到的细胞总ＲＮＡ进行反转录,以此产物为模板进行ＰＣＲ扩增,并对ＰＣＲ扩增条件进行了优化。经鉴定,以此对引物进行的ＰＣＲ扩增,得到了与设计片段大小和酶切位点相同的产物,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒和狂犬病病毒犬的三种病原的核酸,这表明此方     

小熊猫染色体异染色质的显示

以培养的小熊猫外周淋巴细胞为实验材料,结合Ｃ－显带技术及ＣＭＡ３／ＤＡ／ＤＡＰＩ三竽荧光杂色的方法,对小熊猫的染色体组型、Ｃ－带带型及ＣＭＡ３／ＤＡ／ＤＡＰＩ荧光带带型进行了研究,发现：（１）经Ｃ－显带技术处理,可在小熊猫染色体上呈现出一种极为独特的Ｃ－带带型。在多数染色体上可见到丰富的插入Ｃ－带及端粒Ｃ－带。而着丝区仅显示弱阳性Ｃ－带;（２）除着丝粒区外,ＣＭＡ３诱导的大多数强荧光带纹与Ｃ－阳性     

大熊猫精子体外获能的研究

本文通过１６次大熊猫精子体外获能和精子穿透试验,建立起一套大熊猫精子体外获能的有效方法,特别是促获能物质的筛选,将为今后开展大熊猫胚胎移植提供可靠的参考资料。     

邛崃和相岭山系小熊猫种群的遗传结构

测定了来自小熊猫主要分布的两大山系———相岭和邛崃的 2 3只小熊猫样品的mtDNA控制区 5’端 5 69bp序列 ,共发现 2 3个变异位点 ,定义了 8种单元型 ,其中邛崃山系 5种 ,相岭山系 3种。分析结果表明 ,两山系均表现出较低的核苷酸多态性 ;单元型多态性差异明显 ,其中邛崃山系高于相岭山系。分子变异分析表明 ,两山系的小熊猫种群间具有较高的基因流 (Nm =2 95 ) ,两种群遗传分化不明显 (ΦST=0 1 45 ,P >0 0 5 )。结合细胞色素b序列分析 ,认为两种群可能是从经历了近期瓶颈效应的同一祖先群衍生而来 ,并且可将两山系的小熊猫种群作为一个管理单元进行保护和管理     

大熊猫栖息环境的森林凋落物动态研究

本文以王朗自然保护区冷杉、云杉暗针叶林为对象,在定位测定森林凋落量及其动态和枯枝落叶贮量的基础上,研究了凋落物分解速率及其主要营养元素含量的变化,结果表明：(1)地表枯枝落叶总贮量变化在30.0—91.8t／ha,其中未分解层4.9—17.8,半分解层11.5—19.7,腐殖质层13.6—57.3t／ha。(2)森林凋落的枯枝落叶量因林型不同而略有差异,平均为2.8 t／ha·yr,其凋落高峰期分别在生长季开始的5月和生长季末的10月。(3)每年以凋落物形式返回林地的养分,氮为35.5kg／ha、磷为5.7kg／ha、钾为7.0kg／ha、镁为6.8kg／ha、钙为62.9kg／ha。(4)森林各种凋落物的混合物年分解率为0.3041g／g。95%的凋落物被分解需时约10年,在分解一段时间后,凋落物中的氮、钙、镁含量略有上升,钾明显减少,而磷含量变化不大。(5)森林凋落物的混合物腐解过程中,养分释放速率大小的顺序为：K>P>Mg>Ca>N,大熊猫主食竹的凋落叶则为：K>N>Ca>Mg>P。     

大熊猫等五种食肉动物血清蛋白和LDH同工酶盘电泳比较

大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)是世界珍稀动物之一,近年来,兽类科学工作者对它进行了多方面的研究,也包括生化方面的工作(潘文石等,1982;Sarich,1973),但与其他食肉哺乳动物相比研究较少,而此又为探讨其分类地位所需。本文应用聚丙烯酰胺凝胶盘电泳,对大熊猫、小熊猫(AilurSs fulgens)、黑熊(Selenarctos thibetanus)、家猫及犬等5种食肉动物的血清蛋白和LDH同工酶进行比较分析,目的在于了解这5种动物的血清蛋白图象和LDH同工酶酶谱以及它们之间的谱型、相对活力、迁移率的异同,进而讨论大熊猫的分类地位。     

小熊猫种群遗传结构和地理分化

本文采用分子系统地理学的研究方法 ,对我国小熊猫 (Ailurusfulgens)地理分布格局的形成原因进行了探讨。我们从四个地理单元的 32号样品中成功地扩增出了 371bp的线粒体DNA控制区片段 ,在所有可比较的 35 7bp的序列中 ,发现 2 9个变异位点 ,其中转换和颠换分别为 2 1和 8,没有插入 /缺失。在四个地理单元中 ,共有 16种线粒体DNA单倍型 ,且在各地理单元中都具有较高的单倍型的多态性。进一步分析表明 ,各单倍型之间的遗传距离平均为 1 6 0 % ,76 5 9%的遗传差异发生在地理单元间 ,仅 2 3 4 1%发生在单元内。分子变异分析和系统重建结果也表明 ,各地理单元之间不存在共享的单倍型 ,YN (云南地理单元 )与XL (相岭地理单元 )和QL (邛崃地理单元 )之间存在着显著的遗传分化 ,FST分别为 0 336和 0 35 1(P <0 0 0 1) ,其余地理种群之间分化不明显 (P >0 0 5 ) ,单倍型缺乏比较明显的地理分布格局 ,各地理单元中的单倍型相互散布在不同的分布群中。经Fs检验 (Fs=- 10 12 1) ,并结合化石资料 ,我们认为由于受第四纪气候和环境变化的影响 ,小熊猫种群在进化过程中曾经历种群暴发而不断扩散 ,从而形成今天的分布格局。