Ames试验中菌落呈色计数法的探讨

本实验利用氯化三苯四氮唑(TTC)使革兰氏阴性菌显色的原理,在平板法Ames试验中,添加TTc浓度为1mg/皿时,使测试菌株(鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型株TA97、TA98、TA100、TA102)呈为红色。试验证明TTC本身无诱变性,亦不干扰阳性物(2-AF)的诱变性。菌落呈色后便于菌落计数,并在一定程度上提高试验结果的准确性。     

抗菌肽抑菌活性测定方法的研究

探讨建立一种在抗茵肽分离、纯化过程中简单、快速、灵敏的检测抑菌活性的方法。以微量稀释法为基础,利用氯化三苯四氮唑的显色原理设计了简单的显色MIC方法,且用该方法与K—B以及常规微量稀释法做了3种标准菌株的对比。与K—B法及常规微量稀释法相比,TTC微量稀释法可以准确地判断细菌生长抑制终点,得到确切的结果。TTC微量稀释法反应灵敏．操作简便,尤其适合在分离、纯化过程中跟踪检测抗菌肽的活性。     

Ames试验中各类不同样品处理方法的探讨

Ａｍｅｓ试验中各类不同样品处理方法的探讨韩惠娟,查捷（杭州市卫生防疫站,杭州３１０００６）８０年代以来,世界各国对人类肿瘤和遗传病与环境污染关系的认识逐渐加深,更加重视环境污染问题。环境污染为每一个工业国家必须解决的重大问题之一。Ａｍｅｓ试验是目前国...     

TTC-脱氢酶还原法测定螺旋藻细胞活性的条件优化

为确定氯化三苯基四氮唑(TTC)-脱氢酶还原法测定螺旋藻细胞活性的最优条件,首先通过单因素实验对影响藻细胞活性测定的TTC质量分数、缓冲液pH、提取剂（乙醇）质量分数、培养时间、培养温度进行分析,选定各因素的变化范围,再利用正交试验设计方法,在藻细胞活性测定的最适培养温度下,对TTC质量分数、缓冲液pH、提取剂质量分数、培养时间进行3水平优化试验。最后确定优化的TTC 脱氢酶还原法测定螺旋藻细胞活性的条件为TTC质量分数0.1%、缓冲液pH 8.0~8.5、乙醇质量分数60%、培养时间5 h、培养温度35 ℃。在此条件下所测藻细胞活性最高,为螺旋藻细胞活性的评价提供了一定参考。     

Ames试验假阳性的判断方法

目的:确立一种判断Ames试验假阳性的可靠方法。方法:在Ames平皿掺入试验中发现经受试物处理的TA97和TA1535的菌落数相比溶媒对照组明显增加,为了证实其是因为受试物致突变性导致的回变菌落数增加还是由受试物毒性导致的菌落数增加,对分别经受试物和阳性对照物处理的Ames菌落进行增菌培养后接种于无组氨酸的培养基上,观察比较细菌的生长情况。结果:经受试物处理的菌株不能生长在无组氨酸的培养基中,而经阳性对照物处理的菌株则可以生长在无组氨酸的培养基上,说明经受试物处理的菌株没有发生突变。结论:此方法能可靠地验证菌株是否为突变菌株,由本研究可以发现经受试物处理的菌株没有发生突变,Ames平皿掺入试验中所观察到的菌落数增加是由于受试物毒性造成的假阳性。     

蕨菜乙醇提取物的Ames试验研究

目的：研究蕨菜乙醇提取物的致突变作用,为蕨菜的开发利用提供一定依据;方法：制备蕨菜乙醇提取物,采用Ames试验方法,以50μg/皿敌克松作为诱变剂,分别添加提取物50、100、200、400、800μg/皿,统计回变菌落数;结果：受试物各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍,且无剂量-反应关系;结论：在本实验条件下,蕨菜乙醇提取物无致突变作用.     

两种Ames试验方法在槲皮素致突变试验中灵敏度的研究

目的:通过传统Ames试验与改进彷徨试验对槲皮素的致突变试验结果,比较两种试验的灵敏度。方法:Ames试验方法采用平板掺入法,选择3.2、16、80、400、2000μg/mL 5个剂量组的槲皮素在有或无代谢话化条件下处理鼠伤寒沙门氏菌株TA98和TA100 48小时后计数回复突变菌落数;改进彷徨试验采用96孔板法,选择0.128、0.64、3.2、16、80μg/mL 5个剂量组的槲皮素在有或无代谢活化条件下处理鼠伤寒沙门氏菌株TA98和TA100 24小时后计数变色孔数。结果:Ames试验结果显示槲皮素在80-2000μg/mL回复突变菌落数明显增加并超过对照2倍并有明显剂量反应关系,Ames试验结果阳性;改进彷徨试验结果显示槲皮素在0.64-80μg/mL变色孔数明显增加(P<0.01),并有剂量反应关系,结果为阳性;而在0.64-16μg/mL剂量下,改进彷徨试验能检测出阳性结果,而Ames试验未检测出阳性结果。结论:在较低浓度时,改进彷徨试验能检测出Ames试验检测不出的阳性结果,表明改进彷徨试验灵敏度较Ames试验高。     

两种Ames试验方法在槲皮素致突变试验中灵敏度的研究

目的:通过传统Ames试验与改进彷徨试验对槲皮素的致突变试验结果,比较两种试验的灵敏度.方法:Ames试验方法采用平板掺入法,选择3.2、16、80、400、2000μg/mL 5个剂量组的槲皮素在有或无代谢话化条件下处理鼠伤寒沙门氏菌株TA98和TA 100 48小时后计数回复突变菌落数;改进彷徨试验采用96孔板法,选择0.128、0.64、3.2、16、80μg/mL 5个剂量组的槲皮素在有或无代谢活化条件下处理鼠伤寒沙门氏菌株TA98和TA100 24小时后计数变色孔数.结果:Ames试验结果显示槲皮素在80-2000μg/mL回复突变菌落数明显增加并超过对照2倍并有明显剂量反应关系,Ames试验结果阳性;改进彷徨试验结果显示槲皮素在0.64-80μg/mL变色孔数明显增加(P＜0.01),并有剂量反应关系,结果为阳性;而在0.64-16μg/mL剂量下,改进彷徨试验能检测出阳性结果,而Ames试验未检测出阳性结果.结论:在较低浓度时,改进彷徨试验能检测出Ames试验检测不出的阳性结果,表明改进彷徨试验灵敏度较Ames试验高.     

Ames试验在水质检测方面的应用

近年来 ,水体污染日趋严重 ,各国学者从氯化后饮水中分离出多种致突变、致癌物质。为此我们采用Ames试验 ,对珠江流域主要取水点的水源水和对应自来水中的有机致突变物污染情况进行了研究。研究表明 ,部分取水点的有机致突变物污染较严重 ,并且氯化消毒后自来水的致突性大于水源水的致突性。因而 ,加强饮水中致突变物质的检测 ,改进净水消毒剂和净水流程很有必要。     

昆明水源水和自来水水质致突变性及化学背景值:I.Ames试验和水源水及自来水微量有机、无机污染物化学背景值

本文报道，用XAD-2离子树脂吸附富集法制备自来水和滇池及松华坝水库源水提取物，以Ames鼠伤寒沙门氏菌回复突变系统诱发致突变性，Ames试验结果如下：来自滇池源水经氯化的自来水提取物，用TA[98]菌株加S9或不加S[9]混合物，突变率>2，结果为阳性。滇池源水提取物致突变性为可疑。使用化学分析法结合生物分析法评价昆明自来水和滇池及松华坝水库水中的化学微量污染物，估价在水中的微量污染物对人体健康的潜在致癌效应是有意义的。     

超氧化物歧化酶活性正、负染色方法的比较

超氧化物歧化酶(SOD)广泛存在于活细胞中,它是机体内超氧自由基O_2~-的清除剂,对机体细胞有保护作用。由于该酶的基质O_2~-极不稳定,所以迄今对SOD的检测都采用间接方法。SOD在电泳凝胶     

三苯氧胺和雌二醇对大鼠子宫雌激素受体的竞争性结合作用

利用改进的葡聚糖活性炭饱和分析法（ＤＣＣ法）,对卵巢切除大鼠注射雌二醇（Ｅ组）或同时注射雌二醇和三苯氧胺（Ｅ＋Ｔ组）后６ｈ至６４ｄ,进行子宫ＥＲ含量测定,发现,Ｅ＋Ｔ组比Ｅ组的ＥＲ值小并且增加缓慢;Ｅ组的ＥＲ值在注射后３０ｄ达到最大值而且数值超过对照组（Ｃ组）。计算机曲线拟合Ｅ组或Ｅ＋Ｔ组与Ｃ组的ＥＲ比值求得：Ｅ组开始注射雌二醇时ＥＲ水平为Ｃ组的２．０３３倍,即＝２．０３３,恢复过程的时间常数τ＇为５１．５５ｄ,３￣Ｈ－雌二醇与ＥＲ结合过程的时间常数τ为１３．０ｄ;Ｅ＋Ｔ组的＝１．３１５,τ＇＝３８．７６ｄ,τ＝２１．５５ｄ,说明同时给予三苯氧胺和雌二醇情况下,三苯氧胺有抑制雌二醇诱导ＥＲ水平升高的作用,并减缓３￣Ｈ－雌二醇与ＥＲ的结合过程。另外,还求得Ｅ＋Ｔ组中三苯氧胺和ＥＲ和结合率约占４３．７％,表明三苯氧胺与雌二醇对ＥＲ有竞争性结合作用。     

TTC在螺旋平板法测定冷冻水产品中菌落总数的应用研究

研究以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)作为指示剂在螺旋平板法测定冷冻水产品中菌落总数的适宜用量。通过对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌三株标准菌株制备的菌悬液在含梯度含量TTC的平板计数琼脂(PCA)中分别进行菌落计数、生长和显色观察实验,初步筛选出适宜的TTC含量范围。以冷冻水产品样品在该用量范围内的菌落计数和显色观察实验,验证在实际应用中的适宜性。验证实验结果显示:在TTC含量为1.5mg/100ml的组与未添加TTC的对照组菌落计数结果经统计学检验无显著性差异,且菌落显色情况良好,有利于计数的准确性。     

用三色荧光原位杂交(Three-Color FISH)检测小鼠精子中染色体数目异常的研究

用小鼠X、Y和8号染色体特异的DNA探针,与经DTT（dithiotreitol）和LIS（lithium-3,5-diiodosalicylicacid）解聚的小鼠附单精子进行三色荧光原位杂交（fluoresceoceinsituhybridization,FISH）,以检测精子中的染色体数目异常,并与MMⅡ染色体分析比较．结果表明精子三色FISH具有以下优点和特点：（1）方法敏感稳定,且简便快速;（2）在每一个体至少分析10000尾精子的基础上计算非整倍体单,因此结果更为准确;（3）能检测多倍体即减数分裂停止的发生率及停止的时期;（4）不仅能测定发生于试数分裂Ⅰ（MI）的染色体分离异常,还能检测发生于减数分裂Ⅱ（MII）的不分离和丢失．并对探针的选用、分析标准的建立以及三色FISH用于精于染色体分析的必要性等进行了讨论．     

昆明水源水和自来水水质致突变性及化学背景值1．Ames试验和水源水及自来水微量有机、无机污染物化学背景值

本文报道：用ＸＡＤ－２离子树脂吸附富集法制备自来水和滇池及松华坝水库源水提取物,以Ａｍｅｓ鼠伤寒沙门氏菌回复突变系统诱发致突变性。Ａｍｅｓ试验结果如下：来自滇池源水经氯化的自来水提取物,用ＴＡ９８菌株加Ｓ９或不加Ｓ９混合物,突变率＞２,结果为阳性。滇池源水提取物致突变性为可疑。使用化学分析法结合生物分析法评价昆明自来水和滇池及松华坝水库水中的化学微量污染物,估价在水中的微量污染物对人体健康的潜在致癌效应是有意义的。     

城市污泥和土壤中苯并（a）芘的初步研究

应用GC／MS技术对我国11个城市污泥和4种土壤中的苯并（a)芘进行研究,探讨苯并（a)芘在城市污泥和土壤中的含量和分布特征,结果表明,城市污泥中苯并（a)芘的含量在0．007－0．578mg.kg^-1之间,平均为1．272mg/kg^-1,绝大部分低于1．0mg/kg^-1,但在珠海和北京污泥中超过我国农用污泥的控制标准,褐土,水稻土和石灰性土中苯并（a)芘的含量分别为2．138,0．782和0．664mg.kg^-1,在赤红壤中未检出,城市污泥中苏并（a)芘含量与污水来源,污水处理方式和污泥类型等因素有关,土壤中苯并（a)芘含量与母质,大气污染,污水灌溉,污泥农用等因素有关。     

黄芩甙、茜草素、茶多酚和Trolox抗氧化能力的增强化学发光研究

应用辣根过氧化物－鲁米诺－过硼酸钠－对碘酚增强化学发光体系测量了四种抗氧化剂清除苯氧自由基的能力,并与其清除超氧阴离子和抗鼠肝微粒体脂质过氧化的能力相比较,结果表明,这四种抗氧化剂在不同系统中都有明显的抗氧化能力,抗氧化剂清除苯氧自由基比清除超氧阴离子的能力更接近于抗鼠肝微粒体脂质过氧化的能力,从而提示增强化学发光法在测定抗氧化剂的抗氧化能力上有良好的应用前景。     

糠秕马拉色菌药敏试验新方法的探讨

目的 建立一种新的糠秕马拉色菌药敏试验方法.方法 在ATBF2半固体培养基中添加不同种类和含量的脂质,用ATB Fungus 3药敏板条对ATCC14521和临床分离的糠秕马拉色菌进行了MIC测试.结果 孵育时间为72 h时对照孔中糠秕马拉色菌生长充分,吐温40浓度为1％时糠秕马拉色菌生长充分,且对药敏结果的影响最小.脂质的种类和含量对实验结果有影响.结论 用改良ATB Fungus 3药敏试验方法对糠秕马拉色菌进行抗真菌药敏试验,方法操作简便、结果易观察、试验结果重复性好.临床分离菌株与糠秕马拉色菌ATCC14521在ATB Fungus 3对照孔中的生长状况相同,结果易于判断.     

抑菌试验用于测定T-2毒素

本文从镰刀菌中提取T-2毒素,对不同的酵母菌进行抑菌试验,结果证明红酵母属(Rho-dotorula)的三个种,即红酵母(R.glutrnis)、深红酵母(R.ruber)和小红酵母(R.minuta)对T-2毒素最敏感,被定为测毒敏感菌。将抑菌试验与家兔皮肤反应试验、豌豆发芽抑制试验进行对比,结果有部分重合,但不能相互取代。由于抑菌试验具有快速、简便、准确的优点,可做为测定T-2毒素的方法之一。