洛伐他汀在巴马香猪体内的长期毒性试验

为研究洛伐他汀在巴马香猪体内为期42 d的长期毒性特点,以抗动脉粥样硬化药物洛伐他汀为模型药,选择健康6月龄雄性巴马香猪为实验对象,经灌胃途径给药(12 mg.kg-1和135 mg.kg-1),观察给药后的临床表现、血液学、血生化、脏器系数和组织病理学等指标进行药物毒性的评价。结果主要毒性反应在135 mg.kg-1组,给药后巴马香猪出现了竖毛、腹泻等症状,总采食量和体重减轻;血液血检查显示白细胞总数有所增加,红细胞总数、血红蛋白含量和血小板计数明显下降;血液生化检查显示ALT、AST、ALP和CK升高2~10倍,肌酐和尿素有所升高。同时,组织病理学分析结果显示,巴马香猪出现了与人相似的肝肾病理改变。可见洛伐他汀给药后,巴马香猪在高剂量组可大部分呈现洛伐他汀在人临床出现的毒理反应,表明巴马香猪能敏感的反映洛伐他汀的潜在毒性。     

洛伐他汀在巴马香猪体内的绝对生物利用度

目的选择HMG-CoA还原酶抑制剂洛伐他汀作为模型药物,在巴马香猪体内进行生物利用度及药代动力学研究,探讨巴马香猪对洛伐他汀的处置规律。方法12头6~8月龄健康雄性巴马香猪随机分为灌胃组、静脉组和空白对照组,其中灌胃组和静脉组通过胃管和耳静脉分别给与洛伐他汀8、1.2 mg/kg。给药后前腔静脉采血,用RP-HPLC-UV法检测血浆洛伐他汀浓度;用3P97计算药代动力学参数,用统计矩法计算血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-∝)。结果灌胃组t1/2和Ke分别为3.43 h和0.20 h;静脉组C0、Ke、Vdt、1/2和CL分别为180.27 ng/mL、0.17h、6.7L/kg3、.97 h和66.97 mL/min。统计矩法计算得到灌胃组和静脉组的AUC0-∝分别为每小时409.41,1627.78ng/mL,绝对生物利用度F为3.8%。结论洛伐他汀在巴马香猪体内的绝对生物利用度人和犬基本一致,提示巴马香猪与人和犬对药物的处置具有一定的相似性。     

溴氰菊酯在鸡体内的排泄,分布和代谢

用三种不同部位~(14)C标记的溴氰菊酯喂食产卵母鸡,观察它在鸡体内的排泄、分布和代谢,结果表明鸡吞食溴氰萄酯后24小时大部分都由排泄物中排出,一星期内排出吞食量的90％左右。溴氰菊酯及其代谢产物在鸡体内的各组织中均有发现,其中以肝脏、肠及肌胃中较多,鸡蛋中也有发现。溴氰菊酯在鸡体内的代谢,其排泄物中除有未经代谢的溴氰菊酯外,还有包括二溴菊酸和3-苯氧基苯甲醛在内的23种代谢产物。     

生物隋性纳米粒子的体内分布、移行和排泄

给小鼠或兔静脉注射印度墨水或纳米活性炭,取标本进行病理观察或取胆汁和屎液制备涂片进行电镜观察．以研究生物惰性纳米粒子在体内的分布、移行及其排泄。结果在病理切片中发现纳米粒子除广泛分布于网状内皮系统外,也可见于胃肠道上皮细胞、杯状细胞等部位;电镜观察发现胆汁及屎液中存在大量纳米粒子。以上结果表明,生物惰性纳米粒子可在体内进行再分布及通过屎液、胆汁和杯状细胞排出体外。     

四氯化碳一过性处理对巴马香猪肠道菌群的影响

目的探讨四氯化碳（CCl4）一过性处理对巴马香猪肠道菌群的影响,评估CCl4诱导处理的肝损伤动物模型能否用于肠道微生态研究。方法选取3头雄性巴马香猪,一次性按每千克体重腹腔注射0.25 ml[0.25ml/（kg·bw）]40%CCl4橄榄油溶液。于注射12 h之后的第1、2、3、4、7和10天连续采集粪便,以注射CCl4溶液之前所采集粪便样作对照。分别提取粪样总DNA,采用变性梯度凝胶电泳技术（DGGE）对CCl4一过性处理后巴马香猪肠道菌群的多样性变化进行动态监测。结果PCR-DGGE法分析表明,巴马香猪肠道菌群组成在注射CCl4前后差异无显著性（P〉0.05）。相似性聚类分析结果表明,菌群组成在注射CCl4前后相似度在65%以上。结论CCl4一过性处理后巴马香猪肠道菌群组成未发生显著变化。表明CCl4处理诱导的肝损伤动物模型可以用来研究相关疾病与肠道菌群之间的关系。     

两种饲料对巴马香猪肠道菌群多样性的影响

目的研究正常混合饲料和玉米面对巴马香猪肠道菌群多样性的影响。方法使用PCR-DGGE技术研究其肠道菌群的多样性,16SDNA测序技术研究其差异性。结果食用同种饲料的巴马香猪DGGE谱带相似性较高,同时存在个体差异;2种饲料食养的巴马香猪肠道菌群丰富度和多样性指数差异无显著性,而均匀度差异有极显著性;16SDNA测序显示,混合饲料组和玉米面组的特异性菌种分别为 Coprococcus eutactus.Clostridium bartlettii 和 B ifidobacterium animalis subsp.Streptococcus infantarius subsp 。结论不同饲料可导致巴马香猪肠道菌群产生差异。     

胆总管结扎引起梗阻性黄疸对巴马香猪肠道菌群多样性的影响

目的 研究胆总管阻塞引起的梗阻性黄疸对于巴马香猪肠道菌群优势菌的影响.方法 结扎巴马香猪胆总管制备小型猪梗阻性黄疸动物模型,于结扎前1天及2周后分别取对照组和实验组小型猪粪样,PCR-DGGE法分析巴马香猪胆汁淤积前后肠道菌群总菌的相似性和多样性.结果 多样性分析显示梗阻性黄疸可显著降低巴马香猪肠道菌群总菌的丰富度和多样性指数(P＜0.01),UPGMA聚类分析显示梗阻性黄疸的巴马香猪肠道菌群可以明显的区分于对照组.结论 梗阻性黄疸可导致巴马香猪肠道菌群发生严重紊乱.     

重组人ω-干扰素在金黄地鼠和Wistar大鼠体内的组织分布和排泄

目的:为进一步的临床试验提供重组人ω-干扰素(rhIFN-ω)的分布和排泄试验数据。方法:用125I同位素示踪法结合三氯醋酸(TCA)沉淀法测定各主要器官组织的总放射性浓度和酸沉淀部分放射性浓度,获得rhIFN-ω的尿粪排泄和胆汁排泄数据。结果:各主要器官组织的总放射性浓度AUC0-4h排序由大到小依次为:尿、胸腺、胆囊、膀胱、肾、肾上腺、肠内容物、肠淋巴结、空肠、肺脏、血清、卵巢、脾、肝、肌肉、心脏、骨髓/股骨、睾丸、脂肪、脑。皮下注射125I-rhIFN-ω后48h尿和粪的累计排出量分别达到注入放射量的87.9%±2.8%和4.0%±1.6%,尿粪合计排出量占注入放射性量的91.9%±2.1%,而皮下注射125I-rhIFN-ω后20h内胆汁排泄放射性量占注入放射性量的3.34%。结论:rhIFN-ω在泌尿系统分布比较高,与血清蛋白结合比较少,在脑、脂肪和肌肉等组织的药物浓度最低。rhIFN-ω主要以尿的形式排泄。     

重组人甲状旁腺素（1-34）在大鼠体内的组织分布和排泄

目的：研究重组人甲状旁腺素（1-34）[rhPTH（1—34）]在大鼠体内的组织分布和排泄情况,为进一步的临床实验提供参考。方法：用^125I-同位素示踪法结合TCA酸沉淀法测定各主要器官组织的总放射性浓度和酸沉淀部分放射性浓度,获得rhPTH（1-34）的尿粪排泄和胆汁排泄数据。结果：各主要器官组织的总放射性浓度排序由高到低依次为：尿、肾、膀胱、肠内容物、肌肉、血清、肾上腺、空肠、肝、肺脏、卵巢、肠淋巴结、脾、胸腺、心脏、脂肪、睾丸和脑;大鼠皮下注射。^125I-rhPTH（1-34）后,骨骼组织中放射性分布低于血浆,但消除缓慢,血浆浓度4h较15min降低了78％,而骨骼浓度多数仅降低了50％以下;注射后72h,尿、粪分别排出注入放射性量的73．6％±10．9％和3．2％±1．3％,尿、粪合计排出注入放射性量的76．8％±11,4％;注射后12h,胆汁中累积排出注入放射性的6．64％±1．04％。经分子筛排阻HPLC证实,^125I-rhPTH（1-34）不与大鼠的血浆蛋白发生结合。结论：rhPTH（1-34）在泌尿系统中的分布较高,在脂肪和脑中最低,提示药物不易透过血脑屏障;就全身放射性分布而言,在骨骼中分布较高,提示药物具有一定的靶向性;rhPTH（1-34）主要经尿的形式排泄。     

贵州小型香猪和广西巴马小型猪微卫星位点的遗传学分析

利用35个微卫星位点对贵州小型香猪,广西巴马小型猪的封闭群进行了遗传检测,计算出两个小型猪品系个体样本微卫星位点的平均杂合度,多态信息含量（PIC）、有效等效基因数及品系间的遗传距离。结果表明两个品系的小型猪平均杂合度和PIC均较低,有效等效基因数与实测等位基因数较接近,也表明两品系均有稳定的遗传;两者的遗传距离表明贵州小型香猪和广西巴马小型猪亲缘关系较近,同时表明两者已分别成为两个猛增的封闭群动物。     

我国巴马小型猪SLA-2基因克隆及分子特征

为研究我国巴马小型猪SLA-Ⅰ分子特征,设计引物克隆了SLA-Ⅰ类分子SLA-2基因(SLA-2bm),并通过分子生物学软件分析其分子特征。经克隆及序列测定分析,SLA-2bm为1119bp,其中3~1097为ORF区,共编码364个氨基酸,分别在第125、188、227和283位置出现半胱氨酸残基,含有两对链内二硫键。氨基酸同源性分析显示SLA-2bm与其它SLA-2、SLA-3和SLA-1序列的同源率分别为88.4%~96.4%、88.3%~90.5%和87.7%~92.7%。系统进化树显示SLA-2bm与其它SLA-2等位基因在遗传关系上相对独立,进化程度较低;各功能区分析,SLA-2bm与人HLA-A2和小鼠H-2K分子结构相似,且保留了人HLA-A2基因的部分功能位点。结果表明,SLA-2bm属于一个新的等位基因,巴马小型猪是保留原始基因特征的品种。     

我国巴马小型猪SLA-2基因克隆及分子特征

为研究我国巴马小型猪SLA-Ⅰ分子特征,设计引物克隆了SLA-Ⅰ类分子SLA-2基因（SLA-2*bm）,并通过分子生物学软件分析其分子特征。经克隆及序列测定分析,SLA-2*bm为1119bp,其中3～1097为ORF区,共编码364个氨基酸,分别在第125、188、227和283位置出现半胱氨酸残基,含有两对链内二硫键。氨基酸同源性分析显示SLA-2*bm与其它SLA-2、 SLA-3和SLA-1序列的同源率分别为88.4%～96.4%、88.3%～90.5%和87.7%～92.7%。系统进化树显示SLA-2*bm与其它SLA-2等位基因在遗传关系上相对独立,进化程度较低;各功能区分析,SLA-2*bm与人HLA-A2和小鼠H-2K分子结构相似,且保留了人HLA-A2基因的部分功能位点。结果表明,SLA-2*bm属于一个新的等位基因,巴马小型猪是保留原始基因特征的品种。     

我国巴马小型猪SLA-2基因克隆及分子特征

为研究我国巴马小型猪SLA-Ⅰ分子特征,设计引物克隆了SLA-Ⅰ类分子SLA-2基因（SLA-2*bm）,并通过分子生物学软件分析其分子特征。经克隆及序列测定分析,SLA-2*bm为1119bp,其中3～1097为ORF区,共编码364个氨基酸,分别在第125、188、227和283位置出现半胱氨酸残基,含有两对链内二硫键。氨基酸同源性分析显示SLA-2*bm与其它SLA-2、 SLA-3和SLA-1序列的同源率分别为88.4%～96.4%、88.3%～90.5%和87.7%～92.7%。系统进化树显示SLA-2*bm与其它SLA-2等位基因在遗传关系上相对独立,进化程度较低;各功能区分析,SLA-2*bm与人HLA-A2和小鼠H-2K分子结构相似,且保留了人HLA-A2基因的部分功能位点。结果表明,SLA-2*bm属于一个新的等位基因,巴马小型猪是保留原始基因特征的品种。     

巴马小型猪肝硬化前后肠道乳杆菌的比较研究

目的比较巴马小型猪诱导型肝硬化造模前(正常猪)和造模成功后(肝硬化猪)肠道乳杆菌的变化情况,探讨小型猪肝硬化模型在肝硬化肠道微生态研究中的适用性。方法收集肝硬化造模前和CCl4诱导肝硬化造模成功后巴马小型猪的新鲜粪便,提取粪便总菌DNA,用乳杆菌特异性引物进行PCR扩增,对扩增产物进行变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel-Electrophoresis,DGGE),即用PCR-DGGE分析巴马小型猪肝硬化前后肠道乳杆菌的相似性和多样性。结果聚类分析和主成分分析显示巴马小型猪肝硬化前(正常猪)和肝硬化后混杂排列,无明显界限;多样性数据分析显示巴马小型猪肝硬化前后肠道乳杆菌的丰富度(S)、微生物区系Shannon-Wiener指数(H′)和均匀度(E)差异均无统计学意义(P0.05)。结论巴马小型猪肝硬化后肠道乳杆菌与正常猪比较差异无统计学意义。     

Distribution of the CD4 Alleles in Sus scrofa Demonstrates the Genetic Profiles of Western Breeds and Miniature Pigs

Widely used antipig CD4 monoclonal antibodies (mAbs) fail to recognize CD4 alleles characteristic of miniature pig lines such as the National Institutes of Health (NIH) miniature pigs and microminipigs. We surveyed polymorphisms in the coding sequence of the porcine CD4 gene among Western and Oriental pig breeds and Japanese wild boars and investigated their distribution. Of the 13 alleles that we identified among the 47 animals, 2 in group I and 3 in group II were found exclusively in Western breed pigs. Group IV alleles, which included mAb-nonbinding alleles, were found frequently in Oriental breed pigs, suggesting that the mAb-nonbinding allele arose from the gene pool of Oriental pigs. Group IV alleles were also found in Duroc and Large White pigs, suggesting genetic inflow from Oriental pig breeds into Western breeds. Comparison of the CD4 sequences of species in Cetartiodactyla suggested that the group IV alleles in Sus scrofa occurred before the divergence of this species from the other artiodactyls. The different antibody specificities of the various CD4 alleles may facilitate the discrimination of T-cell populations in transplantation studies using miniature pigs. The significance of the preservation of CD4 polymorphisms to immune function in pigs warrants further investigation.     

Heat stress upregulation of Toll-like receptors 2/4 and acute inflammatory cytokines in peripheral blood mononuclear cell (PBMC) of Bama miniature pigs: an in vivo and in vitro study

Global warming is a challenge to animal health, because of increased heat stress, with subsequent induction of immunosuppression and increased susceptibility to disease. Toll-like receptors (TLR) are pattern recognition receptors that act as sentinels of pathogen invasion and tissue damage. Ligation of TLRs results in a signaling cascade and production of inflammatory cytokines, which eradicate pathogens and maintain the health of the host. We hypothesized that the TLR signaling pathway plays a role in immunosuppression in heat-stressed pigs. We explored the changes in the expression of TLR2, TLR4 and the concentration of acute inflammatory cytokines, such as IL-2, IL-8, IL-12 and IFN-γ in Bama miniature pigs subjected to 21 consecutive days of heat stress, both in vitro and in vivo models. The results showed that heat stress induced the upregulation of cortisol in the plasma of pigs (P<0.05); TLR4 mRNA was elevated, but IL-2 was reduced in peripheral blood mononuclear cells (PBMC, P<0.05). The white blood cell count and the percentage of granulocytes (eosinophilic+basophilic) decreased significantly in heat-stressed pigs (P<0.05). In the in vitro model (PBMC heat shocked for 1 h followed by a 9 h recovery period), TLR2 and TLR4 mRNA expression also increased, as did the concentration of IL-12 in supernatants. However, IFN-γ was significantly reduced in PBMC culture supernatants (P<0.05). We concluded that a consecutive heat stress period elevated the expression of TLR2 and TLR4 in PBMC and increased the plasma levels of inflammatory cytokines. These data indicate that TLR activation and dysregulation of cytokine expression in response to prolonged heat stress may be associated with immunosuppression and increased susceptibility to antigenic challenge in Bama miniature pigs.     

三种小型猪线粒体DNA控制区的比较研究

目的分析五指山小型猪、巴马小型猪和贵州香猪线粒体DNA控制区碱基序列,比较研究不同猪种的遗传标志。方法应用PCR技术分别对这三种小型猪的血液总DNA样品中线粒体DNA D-loop区进行扩增,测序比对。结果猪的线粒体DNA D-loop区分三个区域。I区（靠近5’端区域）704bp,五指山小型猪在此区共有6个变异位点,通过6个变异位点中归纳出3个单倍体,而巴马小型猪在此区有9个变异位点,通过9个变异位点归纳出4个单倍体,贵州香猪在此区共有6个变异位点,通过6个变异位点归纳出3个单倍体。Ⅱ区（串联重复序列区）,五指山小型猪、巴马小型猪和贵州香猪序列相同。Ⅲ区（靠近3’端区域）三种小型猪的序列几乎相同。结论五指山小型猪、巴马小型猪和贵州香猪三种小型猪之间线粒体DNA碱基序列变异位点较少,五指山小型猪和巴马小型猪亲缘关系较近。     

贵州小型香猪基因组DNA的AFLP检测研究

报道了AFLP标记在研究贵州小型香猪遗传多性方面的应用和该品系猪个体基因组DNA的AFLP扩增结果,分析了贵州小型香猪的群体遗传结构。实验应用10条AFLP引物,用PstⅠ酶切,对17头猪基因组DNA进行AFLP反应,共获得116个AFLP标记,单引物获得的标记数在2－22间,贵州小型香猪群体相似系数AFLP研究结果为0．866（0．760－0．967）,该研究为贵州小型香猪的遗传稳定性提供了相关的参数,准确评价尚待和其它品种猪对研究后确定。