去除转基因植物标记基因的研究进展

得到转基因植物以后 ,标记基因就失去了筛选的作用。但它的存在引起公众对转基因植物的安全性以及环境效应的担心 ,所以在目的基因转入后 ,要去除标记基因。该文主要就利用共转化、转座子、同源重组、位点特异重组酶等去除标记基因的方法进行了总结 ,并对各种方法的优缺点进行了比较 ,对该技术未来的发展趋势也进行了展望。     

去除选择标记基因的Cre/lox重组系统在植物中的应用

获得无选择标记基因的转基因植物越来越受到研究者的重视。目前,应用得较广泛的去除选择标记基因的方法有共转化法和位点特异性重组法,其中位点特异性重组系统中Cre/lox重组系统研究最多。以下介绍了Cre/lox位点特异性重组系统的原理、特点及其近几年在植物中的应用,针对本实验室在这一领域的研究情况,重点阐述了Cre/lox系统的应用前景。随着植物反应器研究领域的不断壮大,去除筛选标记基因是植物反应器研究的必然趋势。     

日本用基因重组技术制造谷胱甘肽

日本兴人公司用生物反应器生产肝脏药物谷胱甘肽已得到厚生省的批准。这是首次被批准的采用日本本国技术研制的基因重组药物,它是通过自身克隆化大肠杆菌固定在生物反应器中进行生产的。今后将按工业化目标建厂。     

转基因植物中标记基因去除方法的研究进展

随着越来越多的转基因植物品种的出现,转基因植物的环境安全及食用安全越来越受到人们的广泛关注。目前存在的问题之一是转基因植物中抗生素或除草剂抗性的选择标记基因的存留。为了提高转基因植物的安全性,将转基因植物中选择性标记基因去除,不仅利于同一转基因植物的多次操作,而且更容易被人们所接受。就目前转基因植物中选择性标记基因去除的方法及其优缺点进行了横纵向的比较,希望对相关研究领域方法的选择方向具有指导意义。     

日本用基因重组技术生产色氨酸的进展

日本三乐公司用基因重组技术生产L-色氨酸的工艺已符合通产省的“重组DNA技术工业化准则”的要求,于1986年底获得该省的确认。现在世界上L-色氨酸市场每年300-400吨。如果每公斤价格在300日元以下,那么,作为饲料添加剂的年需要约为一万吨。所以,各企业为降低生产成本,相继从事色氨酸廉价制造法的开发。     

植物基因工程——标记基因的安全利用

基因工程自诞生以来,在提高植物的农艺和园艺品质上发挥着巨大作用的同时,其安全性也一直是人们争论的焦点。其安全性争论主要集中在导入的目的基因,以及标记基因是否会对食品安全和生态平衡造成威胁。就植物基因工程中标记基因的安全利用作一论述和评价。     

用链霉菌生产重组产品更引入注目

在生产rDNA产品中,绝非只是Bioger公司对使用链霉菌比使用大肠杆菌更为感兴趣。1985年5月14～16日,在波士顿召开的Bio Expo年会上,Smithkline公司的Dean Taylor讲述了他的公司在链霉菌方面进行的部分工作情况。用链霉菌大规模生产抗生素已有多年,且成为商业用抗生素的主要来源。到某一天rDNA技术可能对这方面的生产有帮助。此外,用链霉菌进行重组蛋白的商业性生产也一定有它的优势。大规模生产人类治疗性蛋白是不必要的。但积累大规模培养链球菌的经验在生产大量的     

木霉植酸酶编码基因多样性及作为系统发育标记潜力研究

对现有的148株木霉菌株在含植酸钙的琼脂培养基上进行了产植酸酶能力鉴定,结果表明所有菌株均产生了水解透明图,说明所有测试的木霉菌株都具有植酸酶活性,植酸酶编码基因在木霉群体中具有广泛性.选取14个种类的21株木霉,采用植酸酶保守序列设计简并引物P8205、P500-2扩增获得其中11种17株木霉植酸酶基因片段,进行了序列测定;利用ITS4、ITS5引物扩增17个木霉菌株的ITS序列并测序.分别基于植酸酶基因片段序列以及ITS序列信息,通过邻接法(N-J法)构建系统发育树,结果表明植酸酶基因序列具有多样性的特点,而基于植酸酶基因序列与基于ITS序列的分类结果基本相同,不同的是长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)植酸酶基因序列与哈茨木霉(Trichoderma harzianum)被分到同一分支当中,与ITS序列的进化关系相差较大,表明有可以作为木霉分类的一种新的标记的潜力,并携带部分与ITS序列不同的系统发育相关信息.     

天蓝色链霉菌中分化发育基因参与同源性重组

在天蓝色链霉菌中,ＳＣＰ２＾＊质粒接合转移频率的快增长,ＳＣＰ２＾＊质粒介导的质粒同源性重组频率的快增长与气生菌丝的形成同步。在１株ｂｌｄ基因突变株中,３株ｗｈｉ基因突变株中,测定ＳＣＰ２＾＊质粒接合转移及其介导的质粒同源性重组,结果表明,除ｗｈｉＡ基因突变导致质粒接合转移频率不稳定外,其余３个基因突变对质粒接合转移不产生影响,但在所测定的４个基因突变株中,质粒同源性重组的频率降低超过１０掊。     

用种子表达植酸酶,添加重组种子提高饲料效率

荷兰PlantZyme公司(Leiden)宣布,用基因操作开发大量生产种子特异性植酸酶的技术,重组种子用烤鸡器处理提高了饲料效率(磷酸的吸收效率)。该公司的合作方荷兰Gist-Brocades打算5年内在EU商品化。这次的实验还是初级阶段。但重组种子可用于饲料用酶和食品用酶等的生产、保存和流通。该公司征集合作伙伴共同开发除植酸酶以外的使用重组种子的生产技术。     

产植酸酶菌株的筛选及其植酸酶基因的克隆

从土壤中筛选到产植酸酶活性较高的烟曲霉菌株WY-2,其植酸酶最适pH为5.5,最适温度为55℃。通过对烟曲霉WY-2植酸酶基因进行PCR扩增,获得了一个1.5kb大小的特异性产物,将其克隆到载体pMD18-T中。测序结果分析表明,该基因片段含有植酸酶基因完整的阅读框架(ORF),基因全长1459bp,其中包含一个61bp的内含子,编码465个氨基酸,有7个潜在的糖基化位点,5′端有一编码26个氨基酸的信号肽序列。该基因与已报道的烟曲霉ATCC34625植酸酶基因有91%同源性,编码的氨基酸序列同源性为91%。     

Cre-loxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能评价

选择标记的使用和残留可引起消费者对转基因生物环境安全和产品安全的担忧,建立消除选择标记的有效对策甚为必要.本研究的目标是评价Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能,为猪安全转基因研究提供实验依据和技术支撑.本文所用的打靶载体ΔMSTN含有LoxP位点锚定的选择标记表达框(LoxP-CMV-NeoR-IRES-EGFP-LoxP). 经电穿孔将该打靶载体导入猪肾PK15细胞,经G418筛选,获得稳定整合该载体、EGFP表达均一的单克隆细胞系. 将Cre重组酶表达载体pTurbo-Cre导入该细胞系,借助流式分选（FACS）、终点PCR、荧光定量PCR、TA克隆与测序等手段,证明Cre-LoxP重组系统可在猪细胞内高效介导内源性选择标记基因的删除反应,EGFP水平的删除效率达到46.1 %,DNA水平的删除效率则达到97 %.本文的研究结果为消除选择标记的安全隐患提供了可靠的解决方案,为建立猪安全转基因技术提供了重要的科学依据.     

用基因重组方法生产微生物杀虫剂

<正> 据《生命工学》1986年第1期报道,日本住友化学工业株式会社建立了一种用基因重组方法生产苏云金杆菌制剂(BT剂)的新技术。该社试制了对甘蓝夜蛾有效的BT剂第1号,在此之前生产的BT剂对这种蔬菜害虫是没有杀虫效果的。BT剂原来的生产周期将近为1星期,而现在的新生产方法培养时间缩短为半天,而且,杀虫性蛋白质的活性也提高了将近两倍。通过使用大肠杆菌进行基因重组的方法,获得超过10万的高分子物质,这在世界上也是罕见的。     

转基因植物标记基因的安全技术

转基因植物中抗性标记基因潜在的生态和食用安全性一直是颇有争论且悬而未决的问题。解决的途径有2条：一是选用安全性标记基因;二是开发、应用删除抗性标记基因新技术。综述了这两方面的研究进展。     

用基因重组的大肠杆菌合成靛兰

美国加州的 Ensrei 等和德克萨斯大学的 Wakett 等发表的论文宣称(美国“科学”杂志10月14日),大肠杆菌中的萘氧化基因能生物合成人们最早知道的染料之一靛兰。他们将恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)PPG7中取出的质粒 NAH_7的片段进行克隆,并在大肠杆菌 HB101中表达。这一重组大肠杆菌在培养基中增殖,结果生成了靛兰。该染料可在色氨酸或吲哚存在下增产。能氧化芳烃为顺(?)二羟硫醇的某些细菌也