遗传转化技术在柑桔育种中的研究进展

本文概述了遗传转化技术在柑桔育种中的研究进展,主要内容包括：遗传转化的常用方法,柑桔遗传转化研究的现状,柑桔遗传转化研究中存在的主要问题及发展前景     

苹果遗传转化的研究进展

苹果的遗传转化技术通过分子手段改良苹果,有助于缩短其育种周期。最近十年,在该领域的研究取得很大进展,涉及到一些重要的苹果基因型及有用的外源基因。迄今,苹果的遗传转化主要采用农杆菌介导法,侵染与转化材料的再生是影响其转化效率的关键过程,了解其影响因素,寻找有利因素以提高转化效率是目前苹果遗传转化研究的重点。     

小麦遗传转化技术研究进展

植物基因工程研究兴起于本世纪八十年代中期。自其诞生至今,如何将这项技术应用于小麦、水稻、玉米等农作物的遗传改良研究便始终是人们努力的重要目标之一。要实现这一目标,首先需要建立一套高效、可靠、重复性好的基因转化系统。而在植物基因转化系统研究方面,禾谷类相对于其他双、单子叶植物而言,具     

玉米遗传转化的研究进展

自从１９８８年首次获得玉米转基因完整植株以来,玉米遗传转化技术的研究取得了许多重要进展,抗虫、抗除草剂的转基因业已率先应用于玉米的商品化生产。作者对近年来玉米遗传转化技术所取得的重要进展及其在玉米品种改良中的应用前景进行了论述。     

大豆遗传转化研究进展

近年来大豆的遗传转化取得了较大的进展.文章结合作者实验室的工作介绍了几种主要的大豆遗传转化系统及其操作方法,并探讨了影响农杆菌介导大豆遗传转化的因素.     

农杆菌介导的芸苔属植物遗传转化技术的研究进展

本文从芸苔属植物遗传转化技术的几大要素：植物基因型,农杆菌株系,外植体生理状态及培养条件;筛选标记及抗生生素类型,ＡｇＮＯ３的作用;褐化及玻璃苗的防治等方面对农杆菌介导的转化技术的研究进展进行了综述。     

农杆菌介导的玉米遗传转化研究进展

农杆菌介导的转基因法是目前玉米遗传转化的主流方法之一。目前,模式玉米种质幼胚的转化体系已程式化,且开发了新筛选基因和获得不含筛选基因转基因玉米的方法,但是大多数育种骨干自交系转化频率低和转化受体基本上是幼胚。从农杆菌、受体及培养条件多方面各种因素对问题进行分析,多数研究认为针对特定基因型和受体材料建立好的受体再生系统,结合高效率农杆菌转化体系,获得多目的基因聚合(无其它外源片段)的转基因玉米将是农杆菌介导玉米转化体系研究的最终目标。本文主要从农杆菌介导(转基因)法应用于玉米遗传转化的历史、现状、问题等方面进行综述,为同领域的研究者提供一定的参考。     

农杆菌介导的玉米遗传转化研究进展

本文就农杆菌介导的玉米遗传转化的技术要点及原理等进行了综述,并对各种影响农杆菌率玉米效率的关键因子包括农杆菌的菌株与载体、标记基因、受体材料的基因型、来源和发育状态以及组织培养的条件等进行了讨论。     

农杆菌介导玉米遗传转化体系的研究进展

玉米(Zea maysL.)是世界上三大主要粮食作物之一,至今其遗传转化仍比较困难,目前报道有多种成功的方法,其中农杆菌(Agrobactierium tumefaciens)介导法是当前玉米遗传转化的主要方法。本文综述了农杆菌介导的玉米遗传转化研究的发展历史、存在问题和影响因素等,并对未来发展趋势进行展望。     

影响农杆菌介导的柑桔基因转化因素研究

以柑桔（ Ｃｉｔｒｕｓ） 中的枳壳、甜橙、柠檬、四季桔上胚轴为对象, 进行了农杆菌介导的柑桔衰退病病毒外壳蛋白基因转化影响因素研究, 最终将衰退病病毒外壳蛋白基因转入枳壳。研究结果表明： 以卡那霉素为选择试剂, 且外植体水平放置时, 枳壳的选择浓度为５０μｇ／ｍＬ, 其它品种为２０ ～３０μｇ／ｍＬ。外植体与农杆菌的共培养时间３ ｄ 最好, ７０ ～１００μｍｏｌ／Ｌ的酚类化合物（Ａｓ） 的添加对外植体Ｇｕｓ 瞬时表达阳性率有明显促进作用。转化所用外植体年龄以２０ ｄ 最好, 品种之间抗性芽产生率与Ｇｕｓ 阳性芽产生率明显不同。以质粒ＤＮＡＮｃｏⅠ酶切产物为探针, 进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析, 结果表明外源基因已稳定整合到了枳壳植株的核基因组中。     

农杆菌介导红江橙遗传转化的研究初报

用红江橙实生苗的上胚轴为材料 ,初步研究以根癌农杆菌介导的 GUS基因转化。结果表明 :以卡那霉素作为选择试剂进行选择培养时 ,Km浓度为 5 0 mg/L;外植体以平放为好 ;抑菌剂选择头孢霉素较好。GUS基因瞬时表达检测 ,70 .4%的外植体呈阳性反应 ;GUS基因稳定表达检测 ,在获得的 1 2株抗性植株中 ,GUS反应呈阳性所占比例为 1 6.7%。     

根癌农杆菌对巴戟天遗传转化的影响因素

以巴戟天带节茎为材料,研究了根癌农杆菌对巴戟天遗传转化的影响因素。结果表明:外植体感染前先进行2 d预培养,对转化有一定促进作用;外植体与农杆菌共培养时间以3 d为宜;乙酰丁香酮能提高转化效率,抗性芽分化率可达18.0％;外植体与农杆菌共培养后延迟4 d选择,抗性芽分化率有所提高;硝酸银能抑制外植体表面农杆菌的生长,提高GUS阳性芽的比例,硝酸银浓度2 mg/L时,GUS阳性芽比例最高(42.9％)。     

根癌农杆菌介导库拉索芦荟遗传转化因素优化

以美国库拉索芦荟的横切薄片(transversethincelllayer,tTCL)作为转化外植体,初步研究了以根癌 农杆菌介导的多种因子对芦荟遗传转化的影响。结果表明:菌株EHA105比LBA4404及AGL1转化率高; 除了乙酰丁香酮(acetosyringone)外,菌液的预处理和重悬液的pH值也是影响转化的主要因子;菌液的预处 理和适合的蔗糖浓度对转化也有促进作用;感染时间为12～18min,共培养的温度和时间分别以25℃及5d 为佳。     

农杆菌及基因枪在玉米遗传转化中的应用

目前外源基因导入玉米受体细胞的方法很多 ,最受瞩目的是农杆菌介导法和基因枪法。就农杆菌、基因枪转化玉米的基本原理、影响转化率的因素 ,以及近年来在玉米遗传转化中的最新动态进行了综述     

农杆菌介导的苜蓿次级体细胞胚的遗传转化

采用农杆菌菌株GV3101感染子叶期苜蓿体细胞胚来研究苜蓿次级体细胞胚的遗传转化方法。农杆菌菌株GV3101双相载体pCAMBIA2301,此双相载体具有gus报告基因和nptⅡ抗卡那霉素筛选基因。感染的子叶期苜蓿体细胞在75 mg/L卡那霉素筛选压下,经过一系列诱导培养,最终获得转基因植株。然后,通过GUS组织化学定位分析来检测转基因植株不同器官中的GUS表达,并进一步通过PCR和Southern杂交确定转基因的稳定整合和转化率。结果表明转基因植株不同器官均有GUS表达,整合的nptⅡ基因的拷贝数是1~4,获得的转基因植株的转化率是65.82%。     

Establishment of Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation in Dunaliella bardawil

Dunaliella bardawil, a unicellular microalga, grows in relatively high concentrations of salt and has so far been refractory to Agrobacterium-mediated transformation. An inverse relationship between salt concentration and hygromycin resistance was observed. Co-cultivation at 0.2?M NaCl allowed growth of both D. bardawil and A. tumefaciens. Lowering salt concentrations also enabled the use of lower concentrations of hygromycin, the selection agent. Cells resistant to 100?mg?l^?1 hygromycin were selected and growth of Agrobacterium was completely eliminated in these cells using cefotaxime/potassium clavulanate. The concentration of sodium chloride was gradually increased to 1.0?M with simultaneous reduction of hygromycin concentration for better growth of D. bardawil. Agrobacterium was unable to survive in the growth medium used for Dunaliella. Expression of β-glucuronidase (uidA), green fluorescent protein (GFP) and hygromycin phosphotransferase (hpt) in the hygromycin-resistant culture was detected using X-gluc as substrate and Western blotting using GFP antibodies and RT-PCR respectively. Cells growing in 1.0?M NaCl (in the absence of hygromycin) retained their ability to grow in hygromycin even after 18 months of cultivation. These cells expressed GFP and PCR for hpt gene was positive. The stability of the integrated transgene and resistance to hygromycin in three different transformation events were ascertained periodically. Southern blotting of DNA extracted from hygromycin resistant cells (HRC) that were 15–18 months old established the presence of the integrated transgene in the DNA of D. bardawil. Results of the present study substantiate A. tumefaciens-mediated transformation of the unicellular marine alga D. bardawil. Agrobacterium tumefaciens-mediated transgene integration along with the massive outdoor cultivation methods used for D. bardawil may allow the commercial synthesis of secondary metabolites and heterologous proteins.     

植物遗传转化中抑菌剂的选择

农杆菌介导法进行植物遗传转化, 在农杆菌和外植体共培养后, 为使转化的外植体正常生长, 必须选择适宜的抑菌剂进行除菌。本文通过抑菌圈试验和稀释法试验测试了发根农杆菌pRi15834、pRiA₄b 、pRi1724 、pRiA13 对三种头孢霉素的敏感性, 其中头孢曲松钠的抑菌效果最好, 最适宜浓度为100~300 mg/L。     

根癌农杆菌介导真菌遗传转化的研究及应用

根癌农杆菌介导转化法（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT）具有转化效率高、遗传稳定、适用范围广等诸多优点,已成为真菌遗传转化研究中的强有力手段,在真菌基因资源开发、真菌性疾病研究和外源蛋白表达研究中发挥巨大作用。本文概述了根癌农杆菌转化法在真菌转化中的研究进展、技术优缺点、转化机制、实验方法和应用现状,着重介绍影响其转化效率的因素并对优化方法进行探讨,展望了该技术在真菌基因资源发掘、基因编辑等方面的应用前景,为今后真菌的遗传转化研究提供参考。