霍山石斛人工种子包埋繁殖体和萌发

以腋芽、原球茎、不定芽为繁殖体, 制作霍山石斛人工种子, 利用正交设计探讨麦芽糖、6-BA/NAA、活性炭、海藻酸钠、离子交换时间五个因素对霍山石斛人工种子萌发的影响; 并对人工种皮的糖分泄漏率以及pH的变化进行测定, 另外对霍山石斛人工种子的贮藏和防腐做了初步研究。结果表明: 麦芽糖是影响霍山石斛人工种子萌发的主要因素, 适宜的处理组合为麦芽糖含量为4%、6-BA/NAA 10:1, 活性炭浓度0.1%, 海藻酸钠浓度4.0%, 将含有繁殖体的此配方溶液滴入2% CaCl2溶液中, 进行离子交换反应, 反应时间10 min。以腋芽, 原球茎, 不定芽为繁殖体的霍山石斛人工种子萌发率分别可达到65.6%、90.1%、75.2%, 萌发后幼苗的存活率分别为16.1%、80.6%和19.1%。4°C下贮藏20 d后, 霍山石斛人工种子以腋芽, 原球茎, 不定芽为繁殖体的萌发率分别为3.3%、10.6%、5.2%。包埋剂加入多菌灵后, 自然条件下萌发率分别可以达到6.8%, 13.8%, 7.9%。     

霍山石斛人工种子包埋繁殖体和萌发

以腋芽、原球茎、不定芽为繁殖体, 制作霍山石斛人工种子, 利用正交设计探讨麦芽糖、6-BA/NAA、活性炭、海藻酸钠、离子交换时间五个因素对霍山石斛人工种子萌发的影响; 并对人工种皮的糖分泄漏率以及pH的变化进行测定, 另外对霍山石斛人工种子的贮藏和防腐做了初步研究。结果表明: 麦芽糖是影响霍山石斛人工种子萌发的主要因素, 适宜的处理组合为麦芽糖含量为4%、6-BA/NAA 10:1, 活性炭浓度0.1%, 海藻酸钠浓度4.0%, 将含有繁殖体的此配方溶液滴入2% CaCl2溶液中, 进行离子交换反应, 反应时间10 min。以腋芽, 原球茎, 不定芽为繁殖体的霍山石斛人工种子萌发率分别可达到65.6%、90.1%、75.2%, 萌发后幼苗的存活率分别为16.1%、80.6%和19.1%。4°C下贮藏20 d后, 霍山石斛人工种子以腋芽, 原球茎, 不定芽为繁殖体的萌发率分别为3.3%、10.6%、5.2%。包埋剂加入多菌灵后, 自然条件下萌发率分别可以达到6.8%, 13.8%, 7.9%。     

印度梨形孢对铁皮石斛种子萌发和原球茎生长的影响

为探究印度梨形孢(Piriformospora indica)对铁皮石斛(Dendrobium officinale)种子萌发和原球茎生长的影响,在铁皮石斛种子离体培养和原球茎生长阶段分别接种印度梨形孢,对其形态发育特征和生理特性进行研究.结果表明,接种印度梨形孢的铁皮石斛种子的起始萌发时间提前,接种印度梨形孢的铁皮石...     

同色兜兰的非共生萌发与快速繁殖研究

以授粉后不同发育时期的同色兜兰种子为材料,观察其形态特征和萌发过程,并探讨建立同色兜兰高效快繁体系的最佳条件。结果表明,种子发育中后期即授粉后210~240d为较适宜的采收期,授粉后210d的种子萌发率最高(达77.79%);1/4 MS和1/2MS为同色兜兰适宜的基本培养基,添加100mL/L椰乳或1g/L蛋白胨对种子萌发及原球茎生长和分化有明显的促进作用;添加1g/L活性炭对原球茎褐化有一定的抑制作用,但添加剂量不宜过大;添加香蕉汁和苹果汁对同色兜兰种子萌发和原球茎生长分化有抑制作用;暗处理对同色兜兰种子萌发无影响;分化后的原球茎在壮苗和生根培养基上培养120d即可得到4~5片叶、高3~5cm的同色兜兰健壮试管苗。     

铁皮石斛GRAS转录因子家族基因SCL3克隆及表达分析

GRAS家族是一类植物特有的转录调控因子,参与调控植物生长发育及抵御逆境胁迫,并且在赤霉素(gibberellins, GAs)信号转导过程中具有重要作用。本研究采用RT-PCR结合RACE方法从铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)原球茎中克隆到了一个转录因子GRAS家族基因SCL3 (scarecrow-like 3)并对其进行了表达分析。该基因cDNA序列全长2 278 bp,命名为DoSCL3 (GenBank注册号:MG252261),其编码425个氨基酸,分子量为47.88 kD,等电点(PI)为6.21。DoSCL3基因编码的蛋白不含跨膜域和信号肽,具有GRAS转录因子家族特有的保守结构域(22~422);多序列比对表明,DoSCL3与小兰屿蝴蝶兰的SCL3蛋白高度同源(相似性达到83%),同时进化树分析结果显示其与小兰屿蝴蝶兰亲缘关系非常相近。qRT-PCR实验结果显示,DoSCL3基因在铁皮石斛种子共生萌发中随着萌发进程的变化(1~3级,萌发至原球茎阶段)其表达量逐渐升高,并且在种子萌发至2级时,共生萌发组表达量显著高于无菌萌发组(为无菌组2.2倍),表明DoSCL3在兰科药用植物铁皮石斛种子共生萌发中菌根共生关系的建立过程起到重要的调控作用。     

鹤顶兰种子萌发及原球茎增殖培养研究

以鹤顶兰成熟蒴果的种子为实验材料,研究影响种子非共生萌发的因素和种胚发育途径,并采用正交设计研究了原球茎增殖的影响因素。结果表明:冷藏影响种子的活力且其萌发率随冷藏时间延长而降低;0.5%NaClO溶液浸泡种子可提高萌发率,缩短初始萌发时间;种胚发育途径为种胚转绿后从种子侧面突破种皮而形成原球茎,随后分化出具根芽结构的完整植株;6-BA对原球茎增殖作用显著,原球茎增殖的最适培养基为1/2MS+3.0mg/L6-BA+1.0mg/L KT+1.0mg/L NAA,增殖倍数为6.67。     

4种野生兰花种子特征及离体培养初报

对4种野生兰花--虾脊兰、羊耳蒜、石仙桃及密花石斛的果荚、种子、种胚性状进行初步研究,并对其种子进行离体培养。结果显示,4种野生兰种子为白色、淡绿或黄褐,呈纺锤体或椭球体。羊耳蒜、石仙桃及密花石斛种子具种孔,种胚浓密且清晰可见;种子萌发较快且萌发率高,其中以石仙桃及密花石斛种子萌发最快,仅需36d,萌发率高达100%。虾脊兰种子未见种孔,种胚不甚明显,种子萌发缓慢且萌发率低。4种兰科植物种子均以原球茎方式萌发,通过继代培养,获得了一批无菌苗。     

胶膜菌属真菌S7(Tulasnella sp.)及提取物对铁皮石斛种子萌发的影响

兰科植物种子细小,无胚乳,自然条件下依赖共生的真菌为其提供营养实现种子萌发.前期研究表明,在燕麦琼脂(oatmeal agar, OMA)培养基上与兰科铁皮石斛种子共生培养时,胶膜菌属真菌S7(Tulasnella sp.)能促进种子萌发.本文用S7培养物在6种基质上进行播种实验,考察S7的田间使用效果;将S7提取物分别加入OMA和MS培养基中,考察S7提取物对铁皮石斛种子萌发的影响.研究发现:(ⅰ)不使用S7,种子在3种基质上能够出芽,最高出芽率为1.96%±1.26%,在1种基质上能形成幼苗,最高成苗率为0.96%±1.07%.使用S7,种子在6种基质上都能够出芽并形成幼苗;种子在泥炭土:锯末(1:1)基质上的萌发效果最好,出芽率和成苗率分别达到26.68%±6.26%和20.97%±6.93%.这些结果验证了S7具有促进铁皮石斛种子萌发作用,可应用于田间播种,同时说明播种基质能够影响S7的作用.(ⅱ) OMA培养基中添加高浓度S7菌丝体提取物后,培养50天形成原球茎,比对照组提前了20天; 60天时形成叶片,对照组原球茎未见继续发育;培养80天种子萌发率为54.90%±2.46%,与对照组相比提高了57.6%(P0.05),出芽率为9.11%±4.17%,对照组仅为0.41%±0.38%.这些结果提示, S7菌丝体提取物中含有可以促进种子萌发与原球茎发育的物质.本研究为进一步探索该菌的实际应用价值,并探索共生真菌中促进兰科种子萌发的活性代谢产物奠定了基础,为兰科种子共生萌发的机制研究开拓了新的思路.     

霍山石斛(Dendrobidium huoshanness)的组织培养

霍山石斛(Dendrobidium huoshanness)是重要的药用植物,在组培过程中,其营养器官脱分化困难.本文研究了霍山石斛拟原球茎(PLBs)诱导的适宜条件,发现假鳞茎下段是诱导拟原球茎适宜的外植体,低浓度的NAA和CPPU的诱导效果较好,黑暗培养可缩短诱导时间,提高诱导率.     

硝普钠、植酸和水杨酸对悬浮培养的霍山石斛原球茎生长和生理活性的影响

在建立霍山石斛的液体悬浮培养技术的基础上,添加诱导子硝普钠（SNP）、植酸（PA）和水杨酸（SA）。3种诱导子均可促进霍山石斛原球茎中生物碱的积累,0.1mmol·L-1SNP、7.5g·L-1PA和100μmol·L-1SA处理的原球茎,其生物碱含量分别为不作处理的2.02倍、1.84倍和1.62倍。促进霍山石斛生物碱积累的适宜诱导子为SNP,其适宜浓度为0.1mmol·L-1。高浓度的3种诱导子均导致培养液酸化,原球茎的相对电导率上升,其生物量和生物碱含量明显下降。     

霍山石斛种苗繁殖与栽培研究

为探讨霍山石斛(Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng)的种苗繁殖与栽培技术,对霍山石斛的人工辅助授粉方式、无菌播种和试管苗移栽技术进行了研究。结果表明,人工辅助授粉时,栽培大棚内的异花授粉结果率可达65%以上,而自花授粉结果率不到4%,异花授粉的果实发育更好,但二者果实成熟所需时间基本一致。在无菌培养条件下,试管开花植株的异花授粉结果率可达到18.18%,并且果实成熟所需时间比栽培大棚的短67 d。不论是栽培大棚和无菌培养的异花授粉的成熟种子,还是在4℃下贮存2.5年的种子,无菌播种的萌发率均超过80%,比自花授粉的种子萌发率高20%左右。培养基中添加土豆、香蕉和苹果汁等添加物,对霍山石斛的壮苗均有明显的促进作用,以添加香蕉匀浆的效果最好。试管苗移栽的适宜基质为分层基质:下部3/10树皮+上部7/10木屑,其移栽成活率(78%)和萌芽数较高(每丛2.7个芽),这可能与该基质良好的保水性和透气性等有关。     

卡德丽亚兰种子非共生萌发及萌发过程中原球茎发育的细胞学研究

对卡德丽亚兰种子非共生萌发条件及萌发过程中原球茎发育进行了研究。结果表明,低离子浓度培养基(KC、RE)利于卡德丽亚兰种子萌发;适宜种类和浓度的激素(1.0mg/LBA和0.1mg/LNAA或1.0mg/LKT和0.1mg/LNAA)对种子萌发有良好的促进作用。细胞学研究表明:卡德丽亚兰种子萌发过程的本质是未分化胚细胞团通过细胞的不断分裂形成原球茎,原球茎出现极性,随之分化形成芽端分生区,最终形成实生苗。     

组培霍山石斛、野生霍山石斛及河南石斛多糖及乙醇溶出物动态积累规律研究

为了揭示不同种源的霍山石斛及其近缘种河南石斛多糖和醇溶性浸出物含量的动态变化规律,为霍山石斛和河南石斛规范化种植及品种鉴定提供依据,采用蒽酮-浓硫酸比色法和醇溶性浸出物热浸法对1~4年株龄的野生霍山石斛、组培霍山石斛和河南石斛的多糖和浸出物含量进行测定。结果表明,不同株龄的组培霍山石斛、野生霍山石斛和河南石斛的多糖、浸出物含量均存在极显著差异。以多糖含量为标准,三者均以生长2年采收为宜,以醇溶物为标准,以栽培三年采收最好。以多糖和醇溶出物总量计,组培霍山石斛以2年采收为宜,野生霍山石斛及河南石斛以3年株龄品质最佳。     

铁皮石斛泛素结合酶基因DoUBC24的克隆及表达分析

目的:克隆铁皮石斛泛素结合酶基因DoUBC24,预测其蛋白结构特征和进化关系,分析其时空差异表达情况,并推测其在植物生长发育中的功能。方法:提取铁皮石斛全苗总RNA,采用cDNA末端快速扩增(RACE)和巢式PCR技术克隆Do UBC24基因;用生物信息手段分析基因序列结构特征,并预测其编码蛋白及其理化性质和亚细胞定位;用MEGA6.0构建系统发育树,分析物种进化关系;用qRT-PCR检测DoUBC24在原球茎不同发育时期及不同组织中的相对表达量。结果:克隆得到基因全长为3811 bp,包含2880 bp的CDS,编码959个氨基酸残基,编码产物含有一个保守的UBCc结构域;分子进化分析显示,DoUBC24同海枣、油棕、小果野芭蕉、玉米、短花药野生稻、二穗短柄草和大麦等单子叶植物的亲缘关系较近;qRT-PCR分析显示,DoUBC24在铁皮石斛叶原基维管系统形成、原球茎退化时期表达显著下降,而在椭球形原球茎、根端分生组织和类原球茎中表达量较高,在组织中的表达量水平依次为花茎种子根叶。结论:铁皮石斛泛素结合酶DoUBC24基因在铁皮石斛原球茎不同发育时期及不同组织中均有显著的差异表达,可能对原球茎发育及植物组织的形态建成具有重要调控作用。     

霍山石斛(Dendrobidium huoshanness)的组织培养

霍山石斛(Dendrobidium huoshanness)是重要的药用植物,在组培过程中,其营养器官脱分化困难。本文研究了霍山石斛拟原球茎(PLBs)诱导的适宜条件,发现假鳞茎下段是诱导拟原球茎适宜的外植体,低浓度的NAA和CPPU的诱导效果较好,黑暗培养可缩短诱导时间,提高诱导率。     

铁皮石斛不同授粉方式对蒴果发育及种子萌发的影响

为研究不同授粉方式对铁皮石斛蒴果发育以及无菌播种种子萌发的影响,选用健康的铁皮石斛植株花朵进行了自花授粉、异花授粉和自然授粉;选用不同种龄的种子在离体培养条件下进行萌发实验。研究结果表明:铁皮石斛自花授粉和异花授粉均能结实,异花授粉的结实率较高,达64.8%;铁皮石斛在开花的第2~3天授粉的结实率最高;120~210 d种龄的种子萌发率较高,均为90%以上。选择人工异花授粉和适宜种龄的种子离体培养,不仅可培育优良品种,还可缩短繁殖周期,为铁皮石斛遗传改良提供依据。     

硬叶兰种子的迁地共生萌发及有效共生真菌的分离和鉴定

兰科植物的种子原地和迁地共生萌发技术是近年发展起来的开展兰科植物种子和共生真菌研究的有效方法。该研究对兰属(Cymbidium)附生植物硬叶兰(C. mannii)开展了种子的迁地共生萌发研究, 试图获得其种子萌发的有效真菌。利用硬叶兰成年植株根部周围的树皮、苔藓、枯枝落叶、腐殖质等作为培养基质, 进行种子的共生培养。在培养133天后, 成功地获得了处于不同阶段的已萌发种子、原球茎和幼苗, 并从原球茎中分离得到一种瘤菌根菌属(Epulorhiza)真菌。用所分离到的FCb4菌株和一种从兜唇石斛(Dendrobium aphyllum)分离到的胶膜菌属(Tulasnella) FDaI7菌株和硬叶兰种子在燕麦琼脂培养基上进行共生萌发, 设置不接菌作为对照处理, 以检验FCb4菌株对硬叶兰种子萌发的有效性。经过58天的培养, 不接菌的对照处理中种子没有萌发, 接种FCb4和FDaI7菌株的处理都有很高的种子萌发率, 两种接菌处理在不同光照条件下的种子萌发率均无显著性差异。但暗培养条件下, 种子萌发形成原球茎后, 表现出生长停滞的趋势, 仅有很少的原球茎继续生长达到幼苗阶段, 说明原球茎发育后期与幼苗发育阶段需要光照。在光照条件下, 接种FCb4菌株处理中达到幼苗阶段种子的比例为(25.67 ± 9.27)%, 显著高于接种FDaI7菌株处理的(3.04 ± 2.27)% (W = 56, p = 0.026, Mann-Whitney U-test), 表明此研究中分离到的瘤菌根菌属真菌能有效地促使硬叶兰种子萌发并生长发育到幼苗阶段。     

霍山石斛多糖的分离鉴定及药理活性研究进展

霍山石斛是我国传统医药中的一种名贵中药材,拥有中华九大仙草之首的美誉,明确收录于《本草纲目拾遗》,其干燥茎和鲜品均可入药,具有悠久的药用历史和良好的药用价值。近年来,国内外学者对霍山石斛多糖的结构分析和药理活性等方面进行了大量深入研究,为霍山石斛资源的开发利用提供了理论依据,通过相关文献查阅,本文主要就霍山石斛多糖的分离鉴定及药理活性相关研究进展进行概述,为霍山石斛多糖的进一步研究奠定基础。     

铁皮石斛种子的室内共生萌发

由于人为的采挖和原生境的破坏,使得铁皮石斛野生资源已濒临灭绝。因此,保护铁皮石斛野生资源及其生境,加快其野生资源的繁殖显得非常重要。以铁皮石斛种子(TTC染色显示种子生活力为77.65%)为材料,与分离自2种野生兰科植物根部的4株共生真菌 (C20来自铁皮石斛,L12,L24b 和 L28来自美花石斛)在燕麦培养基上进行共生萌发。经过18周的共生培养,4株真菌均不同程度地促进了铁皮石斛种子的萌发,其中菌株L24b (Epulorhiza)和L28 (Epulorhiza)显著提高了种子的萌发率,分别比对照高出26.51%和12.20%,但未形成幼苗,只是处于原生分生组织阶段(阶段3);菌株C20(Epulorhiza)和L12 (Alternaria) 虽没有显著提高种子的萌发率,但对原球茎的发育和幼苗的生长有明显的促进作用;而对照的种子仍然处于膨大转绿期,即萌发阶段(阶段2)。同时发现,TTC染色显示的铁皮石斛种子生活力要高于种子共生萌发的萌发率(除了菌株L24b)。研究结果表明:种子生活力染色检测的活力值只代表种子所具有的潜在的萌发能力,而不能代表实际的萌发率。在异地条件下,铁皮石斛与共生真菌间没有严格的专一性,可以与瘤菌根菌属、链格孢属真菌形成共生关系。菌株C20和L12能促进萌发后的种子进一步分化成幼苗。这两个菌株为铁皮石斛的人工优质栽培和野外种群的建立提供了可能。     

不同产地菱角壳(欧菱果壳)中总多酚含量及抗氧化活性和对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的比较

正国产菱属(Trapa Linn.)植物仅包含欧菱(T.natans Linn.)和细果野菱(T.incisa Sieb.et Zucc.)2种~([1]),全国各地均有分布,长江流域为主要分布区和栽培区。该属植物的果实统称为菱角,《本草纲目》中记载菱角具有解暑、解伤寒积热、止消渴和解酒毒的功效;子叶富含淀粉,可食用;菱角壳具有降血糖、抗氧化、抗癌和抗肿瘤等~([2-4])药理活性,含黄酮类~([5-6])、总多酚类~([3,6])、萜类和甾体类~([7])、苯丙素类~([6])以及生物碱类~([8])等成分,主要活性成分为总多酚。为明确不同产地菱角壳中总多酚含量的差异,作者对来