漆酶测定过程中缓冲体系的影响研究

采用L9（3^4）正交设计,研究了缓冲体系的三项指标——缓冲液成分、pH值和缓冲液浓度对白腐菌胞外漆酶活力测定的影响。结果表明：α=0．01时,缓冲体系的三项指标对白腐菌漆酶测定均有极显著影响;正交实验中获得的最高酶活测定值（14400-14976U,pH4．0,0．4mol／LNa2HPO4-柠檬酸缓7中液中）,是最低测定值（176-592U,pH4．8,0．8mol／LNa2HPO4-柠檬酸缓冲液中）的25～80倍。并考虑因素间交互作用,将分析所得最佳的缓冲体系“pH4．0,0．4mol／L邻苯二甲酸氢钾-NaOH缓冲液”,与正交实验中表现最佳的“pH4．0,0．4mol／LNa2HPO4-柠檬酸缓冲液”进行重复实验比较,灵芝菌株胞外漆酶测定的最适缓冲体系为“pH4．0,0、4mol／LNa2HPO4-柠檬酸缓冲液”。这为研究白腐菌漆酶酶活提供了较好的测定体系。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳方法的一些改进

聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质时所使用的“高pH系统”的电极缓冲液,通常是Glycine-Tris缓冲液。这两种试剂比较贵,虽然可以重复使用,但消耗量大,不利于普及。此外凝胶的常规染色和脱色需要较长的时间。作者在研究天然橡胶蛋白质的分离分析时,对这些方法作了一些改进:使用“改进高pH系统”的电极缓冲液——硼酸、NaOH缓冲液、改进分离凝胶的制备,并采用了快速染色和脱色,缩短了试验的时间。本法应用于人血清蛋白的测定,亦得到满意的结果。材料与方法 1.天然橡胶的蛋白质新鲜天然胶乳用2％醋酸凝固(5∶1v/v),用压榨的方法取出天然橡胶乳清(乳清相当于人血清),可溶性蛋白质存在于乳清中。 2.正常人血清湛江医学院附属医院提供。     

几种IgG提纯方法的抗体活性回收率和纯度

<正>缓冲液和一般方法 磷酸盐缓冲液为100mM氯化钠,20mM磷酸钠缓冲液,pH7.7。磷酸盐缓冲液(A)为10mM氯化钠,10mM磷酸钠缓冲液,pH6.8。正常血清缓冲液为磷酸盐缓冲液中含1:6(v/v)正常山羊血清,0.1％聚氧乙烯十二烷基醚(Brij 35)。蛋白质浓度以牛IgG作为标准溶液用计算280nm(E280)的消光值求得。     

限制性内切酶反应缓冲液配制

低盐缓冲液中盐缓冲液高盐缓冲液smal缓冲液 10mM 10mM lmM 10mM 50mM 10mM lmM100mM 50mM 10mM lmM 20mM 10mM 10口IM lmMTris一el(pH7 .5)MgCI:盛TTTr七一el(pH7.5)NaCIMgC】:D口fTNaCITr此一el(pH7.5)MgCI:八TTKCITr认cl(pHS.o)MgCI,奋TT。限制性内切酶反应缓冲液配制 ~~     

金属螯合亲和层析法纯化抗乙肝核心抗原单克隆抗体

采用金属螯合亲和层析法,纯化了小鼠腹水来源的抗乙肝核心抗原单克隆抗体,对上样缓冲液的pH和离子强度、洗脱液种类和洗脱方式进行优化。结果表明,采用降低pH分步洗脱时,最佳上样缓冲液为pH8.0,20mmol/LPB+0.5mol/LNaCl,抗体在pH5.0被洗脱下来,抗体回收率80%,纯度85%。采用咪唑浓度梯度洗脱时,最佳的上样缓冲液为pH8.0,20mmol/LPB+5mmol/L咪唑,抗体纯度大于95%,回收率65%;在上样缓冲液中不添加NaCl而添加少量的咪唑,更有利于抗体分离。以上洗脱方式都能较好地保持mAb的生物学活性,为该抗体的应用提供了必要的实验基础。     

番木瓜果实β-甘露聚糖酶提取工艺研究

从番木瓜果实中提取β-甘露聚糖酶,采用分光光度法和凝胶扩散法测定酶活。研究中分别采用不同pH的提取缓冲溶液、不同的番木瓜果实(g)与提取缓冲液的比例(mL)以及在提取缓冲液中添加化合物等体系,得到最佳提取体系为pH 8.0 HEPES-NaOH缓冲液为基本提取液,样品与提取缓冲液的比例为1:3,提取缓冲液中不添加其他化合物。     

响应面法对黑果枸杞中花青素测定条件的优化

以黑果枸杞为原料,采用pH示差法,通过响应面法优化花青素含量的测定条件。通过单因素试验和Box-Behnken Design试验研究乙醇体积分数、pH 1.0缓冲液平衡时间、pH 4.5缓冲液平衡时间等3个变量对黑果枸杞中花青素响应值的影响程度。根据响应面的最优化分析,得出最佳条件是：用80%酸性乙醇溶液,超声萃取30min,取花青素提取液在pH 1.0和pH 4.5的缓冲液中各平衡80min,在最适波长处测定。通过试验验证,采用pH示差法,通过响应面法优化得到的黑果枸杞中花青素含量的测定条件,可靠准确、具有实用价值。     

甲3型流行性感冒病毒血凝素的pH特征

本文报告,pH9.6碳酸缓冲液对甲3型流感病毒的血凝滴度有明显降低作用,对甲1型和乙型仅有轻微影响,对甲2型的影响则介于两者之间。用不同pH的碳酸缓冲液、磷酸缓冲液及盐水等,测定甲3型流感病毒的血凝滴度,结果表明高pH对其有明显影响。分别具有甲3、甲2或甲1血凝素的重组株,在pH9.6碳酸缓冲液中,其血凝素的稳定性也和上述结果一样,即具有甲3血凝素的重组株,其血凝素对pH9.6碳酸缓冲液最敏感;甲1重组株的血凝素较稳定:而具有甲2血凝素的重组株则介于两者之间。利用此pH特征测定新分离的经血凝抑制试验鉴定为甲3型和乙型流感病毒,得到同样结果,因此有可能利用此pH特征对新分离的甲3型流感病毒进行初步鉴定。     

提取SOD的关键之一是控制离子强度

从动物血中提取SOD时,磷酸盐缓冲液的离子强度大小是分离成功与否的关键因素。pH 7.4的磷酸盐缓冲液的离子强度低于6.000时,SOD不能从DEAE-纤维素柱上洗脱下来。故磷酸盐缓冲液的梯度洗脱浓度应为0.0025mol/L～0.25mol/L。并介绍了计算离子强度的公式。     

不同pH值下预培养水稻花药对花粉愈伤组织分化绿苗的影响

我们曾经试验了不同pH值蔗糖磷酸缓冲液对蚕豆花药中小孢子有丝分裂状况的影响,结果显示,pH6.8比 pH5.8明显促进小孢子的均等分裂百分率;结果还显示,小孢子退化率有随pH值提高而增加,随高pH值缓冲液处理时间的延长而增幅加大的趋势。鉴于上述情况,以及,Zetterberg和Engstrom的报告,在血清供应极度不足的条件下,短时期pH.5—10处理对3T3细胞分裂的促进,只限于一个细胞周期,我们在进     

重组L-天冬氨酸-β-脱羧酶融合蛋白复性条件的研究

以本实验室构建保存的天冬氨酸脱羧酶工程菌为研究材料,通过基因表达,对所得到的重组胞内融合表达型天冬氨酸脱羧酶蛋白进行体外复性研究,考察温度、复性液的pH、复性时间、复性液种类等因素对重组天冬氨酸脱羧酶体外复性的影响。结果表明:最佳复性液为pH8.7的Tris-HCl缓冲液,在保温时间2h,温度40℃下,复性效果最好。另外一些pH能达到8.7的缓冲液复性效果都不如Tris-HCl缓冲液。     

巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶在新型环氧载体ZH-HA上的固定化

巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶共价结合在新型环氧-氨基型载体ZH-HA 上,通过对酶浓度、固定化时间、pH以及缓冲液浓度等条件的考察,确定了最优固定化条件:50 mg比活力6000 U/g的巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶蛋白和1g ZH-HA悬浮于pH 9.01 mol/L磷酸缓冲液,室温搅拌6 h,制得固定化巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶,活力2126 U/g湿载体,活力回收率7.67%.比较研究了固定化酶与原酶性质,原酶最适温度45℃,最适pH为8.0.固定化酶则分别是50℃和9.0,分别比溶液酶偏移5℃、1.0个pH单位.经过40批连续水解青霉素G钾盐,固定化巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶仍保持80%的活力,显示出良好的工作稳定性.     

鹰嘴豆铁蛋白提取工艺优化研究

本研究以鹰嘴豆为原料,研究了缓冲液种类、缓冲液pH值、料液比、盐析盐种类、盐浓度等因素对鹰嘴豆铁蛋白提取率、总蛋白提取率及干重的影响。在单因素实验的基础上,以L9(34)正交实验方法优化鹰嘴豆铁蛋白提取工艺。结果表明:各因素对鹰嘴豆铁蛋白提取率的影响顺序依次为:料液比盐浓度温度pH。最优提取工艺为:料液比1∶4,浓度为70 mmol/L MgCl2盐析,温度50℃,KH2PO4-NaOH缓冲液pH 7.5,最优提取率为0.002643%。     

磷酸缓冲液对丁酸梭菌A69酶活力及产氢量的影响

分别在不同浓度pH7.0的磷酸缓冲液中培养Clostridium butyricum A69,随着磷酸盐缓冲液浓度的增高,培养过程中pH值下降减慢,放氢氢酶较长时间地维持在较高的酶活水平上。而吸氢氢酶活力基本保持不变,因而导致氢气产量有较大幅度的提高。在10mmol和70mmol磷酸盐缓冲液中,最终氢气产量几乎相差一倍,说明控制溶液的pH能大幅度地提高氢气产量。     

寡核苷酸探针制备的优化

目的:探讨寡核苷酸微阵列制备中适合使用的探针浓度、探针缓冲液pH值、离子强度、优化杂交条件。方法:选取人白细胞抗原DQA1位点,针对多态性集中的外显子2设计一对保守引物及16条特异性分型探针;分别用ddH2O和0.1、0.2mol/L碳酸盐缓冲液(pH=7)稀释探针至100μmol/L;选取合适的缓冲液浓度后,调碳酸盐缓冲液为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0等6种pH值,选取最优pH值及离子强度,分别溶解探针至20、50、100、200μmol/L,比较上述不同条件的杂交结果。结果:用0.1mol/L、pH9的碳酸盐缓冲液溶解探针杂交效果最佳;探针浓度为20μmol/L时信号弱,其他浓度下无显著差别。结论:通过探针制备的优化可以提高杂交效率,探针浓度与杂交信号强度无明显正相关。     

米曲霉产氨基酰化酶最佳活力条件的研究

通过在不同的反应时间,反应温度,缓冲液种类及pH条件下测定氨基酰化酶的活力,得出氨基酰化酶的最佳活力条件。试验结果表明,氨基酰化酶在反应温度为37℃、磷酸缓冲液pH为7.5、与底物反应30 m in时,活力最高。     

龙虾肌甘油醛-3-磷酸脱氢酶及其衍生物与NAD~+的结合

平衡柱层析法测得每分子龙虾肌羧甲基化甘油醛-3磷酸脱氢酶能结合3.9分子NAD~+,而每分子光照酶则只能结合2分子NAD~+。 由蛋白荧光淬灭法得到,在25℃、pH7.0的磷酸盐缓冲液中,全酶、羧甲基酶及光照酶与NAD~+结合时均呈负协同性。     

提高Beckman 121 MB型氨基酸分析仪的分辨率

在Stein和Moor等人研究的基础上发展起来的Beckman 121MB型氨基酸分析仪,以聚苯乙烯磺酸树脂作为阳离子交换剂。单柱洗脱系统由pH3.28、pH3.90和pH 4.95的柠檬酸钠缓冲液组成。该仪器与日本、瑞典等国的同类仪器相比最大的缺点是无滤氨柱。因此对试剂、环境的要求很高,以消除氨对分析的污染。但在实际工作中,蒸馏水,缓冲液、试剂及实验室环境都可能带入氨,从而导致氨基酸分析,特别在碱     

微流控芯片电泳分离血清高密度脂蛋白亚类的研究

描述了一种微流控芯片电泳快速分离血清高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)亚类的方法.利用自制的微流控芯片,结合激光诱导荧光检测系统,40mmol/L Tricine、50mmol/L甲基葡胺(MEG)、0.2mmol/LSDS(pH8.5)为样品缓冲液,40mmol/L Tricine、50mmol/LMEG、0.01mmol/L SDS(pH8.5)为分离缓冲液,4min内HDL3和HDL2两种亚类得到基线分离.该法操作过程简单,重复性较佳,测试费用低廉,在临床HDL亚类的检测中具有较好的应用前景.     

用普通纯水代替缓冲液时蔗渣酶法水解反应的考察

使用Onozuk RS型纤维素酶,以普通的城市自来水和纯水代替缓冲液,直接加热膨化甘蔗渣进行酶法水解实验研究,结果表明:所使用的各种水代替缓冲液时,蔗渣酶解还原糖得率基本不变,还原糖得率最高时的最适宜pH为4.2～4.9,当蔗渣浓度大于1％时,反应液的pH恰好处于最适宜pH范围内,还原糖得率最高的酶解反应温度为50℃。