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为研究反义RNA表达载体在细胞内的稳定性,构建了一个特异性针对β地中海贫血基因IVS-2-654C→T(β654)突变mRNA前体异常剪接位点的反义RNA表达载体pCMVA.pCMVA转染β654HeLa细胞后,通过RNA定量检测反义片段对β654mRNA异常剪接的纠正作用;再从转染后传代5次并冰冻保存1年的HeLa细胞中回收反义表达载体,转染另外的β654HeLa细胞,同样检测它对β654mRNA异常剪接的纠正作用.结果显示该载体在细胞传代前后均能阻断β654异常剪接,部分恢复其正常剪接途径:用回收的pCMVA转染β654HeLa细胞后,正常剪接的βmRNA水平[β/(β+β*)]由0.05上升到处理后15d的0.48,而2种对照质粒处理后对这一比值影响不大.表明pCMVA可在HeLa细胞中随着细胞传代而传递下去,并保持结构与功能完整 相似文献
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