马槟榔甜味蛋白的研究 Ⅳ.稳定性和变性

通过对马槟榔甜昧蛋白Ⅰ和Ⅱ热变性试验,发现MaⅠ在80℃水浴中很快失甜味;圆二色谱证明其主链构象中的α螺旋几乎全部消失了。但Ma Ⅱ却能经受长时间保温而不失去甜味;电泳行为亦不发生改变。 在盐酸胍和尿素变性试验中发现,随变性剂浓度加大,蛋白质荧光发射光谱中色氨酸峰发生红移,直至蛋白质发生完全变性为止。以此为指标发现在酸性条件下,马槟榔甜蛋白更稳定;一般情况下3—5M的盐酸胍就足以使它变性;但即使是8M的尿素也不能使它完全变性。此和横向变性剂梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果是一致的。当脱掉8M尿素或—6M盐酸胍-MaⅠ溶液中的变性剂后,MaⅠ的甜味可恢复,其二级结构及电泳行为只发生微小的变化。 MaⅠ在SDS聚丙烯酰胺电泳分析中出现了一条双分子聚合体带,但将MaⅠ热变性、还原变性或羧甲基化等后,随MaⅠ甜味的消失,这条聚合体带也消失了。MaⅡ在任何情况下均不出现上述现象,因此认为这条带的形成与MaⅠ本身和甜味相关的一种特殊结构有关。     

马槟榔甜味蛋白的研究Ⅱ.甜蛋白Ⅱ和甜蛋白Ⅰ的比较

从马槟榔(Capparis masaikai Levl.)种子分离鉴定了二种甜蛋白:甜蛋白Ⅰ(mabinlinⅠ或MaⅠ)分子量MW11600,等电点pI 11.8;甜蛋白Ⅱ(mabinlinⅡ或MaⅡ)MW10400,pI 11.3。另一组分mabinlinⅢ MW10200,pI 11.8,可能是提取过程产物。MaⅡ有84个氨基酸残基,比MaⅠ少15个。它们有80个氨基酸残基是共同的,都是缺丝氨酸和蛋氨酸的单一多肽链。MaⅠ还缺赖氨酸和酪氨酸。测不出有自由SH基。在8M尿素中用巯基乙醇还原处理,两种甜蛋白分子都可转变为二聚体而失去甜味。 自去壳脱脂的种子干粉中提取MaⅠ和MaⅡ的得率依所用溶剂和提取条件而异。用50％丙酮水溶液提取,继用CM-纤维素分离,甜蛋白的得率达13％。用水或0.1N pH6.2磷酸缓冲液提取,得率低于1％。     

马槟榔甜味蛋白的研究Ⅱ．甜蛋白Ⅱ和甜蛋白Ⅰ的比较

从马槟榔（Capparis masaikai Levl．）种子分离鉴定了二种甜蛋白：甜蛋白I（mabinlinⅠ或MaⅠ）分子量MWll600,等电点PⅠll.8;甜蛋白Ⅱ（mabinlinⅡ或MaⅡ）MW 10400,PⅠll.3。另一组分mabinlinⅡ MW10200,pl 11.8,可能是提取过程产物。MaⅡ有84个氨基酸残基,比MaⅠ少15个。它们有80个氨基酸残基是共同的,都是缺丝氨酸和蛋氨酸的单一多肽链。MaⅠ还缺赖氨酸和酪氨酸。测不出有自由SH基。在8 M尿素中用巯基乙醇还原处理,两种甜蛋白分子都可转变为二聚体而失去甜味。     

马槟榔甜味蛋白的圆二色谱和激光拉曼光谱

测定了自马槟榔(Capparis masaikai Levl.)种子分离的二种甜味蛋白MaⅠ和MaⅡ的远紫外区域圆二色谱,并按Yang和Chen的方法用最小二乘法计算了它们的构象单元含量,结果表明α螺旋含量最多:对MaⅠf_H=0.43、f_β=0.24、f_R=0.33;对MaⅡ,f_H=0.37、f_β=0.33、f_R=0.30;其相关系数均为0.9876;计算所得理论曲线与实验曲钱其本吻合。二种甜蛋白的激光拉曼光谱测定结果也表明其主要构象单元为α螺旋,此外,均无SH谱带:MaⅠ的Tyr残基暴露于分子表面;与MaⅡ相比,MaⅠ有明显的545cm~(-1)和1101cm~(-1)谱带,这可能从构象上说明MaⅠ与MaⅡ对热和变性剂处理表现不同的原因。     

马槟榔甜蛋白基因（MBL11）的剪切重组和结构分析

马槟榔甜蛋白（mabinlin II）是我国所特有且唯一的植物甜蛋白,在体外至今没有得到具有甜味的基因表达产物。本文采用基因工程手段对基因进行剪切重组,将重组基因构建成植物表达载体转入拟南芥中,通过RT-．PCR检测导入基因的表达,同时采用生物信息学方法对MBL II基因及其重组基因进行分析和甜味检测显示,转基因拟南芥不具有明显的甜味,但RT-PCR的结果显示,MBL II基因及其重组基因可在转基因的拟南芥中表达。根据生物信息学方法分析结果推测,导入拟南芥中的重组马槟榔甜蛋白可能是具有甜味的蛋白。     

重组马槟榔甜蛋白MabinlinⅡ在大肠杆菌中的表达

Mabinlin Ⅱ是我国所特有且唯一的植物甜蛋白,在体外至今没有得到具有甜味的基因表达产物.本文根据已知马槟榔甜蛋白的序列设计引物克隆Mabinlin Ⅱ基因,对基因进行剪切重组.将重组基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,构建了3个重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),得到三株表达重组马槟榔甜蛋白的大肠杆菌工程菌.经IPTG诱导,3个重组MabinlinⅡ基因可在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达.     

甜味蛋白和矫味蛋白的研究进展

迄今为止,已发现了六种甜味蛋白和一种矫味蛋白,它们具有无毒、安全、热量低等优点,因此有可能取代蔗糖成为一类新型甜味剂。这些蛋白结构虽然都能诱发甜味,但他们结构却不一样。许多生物技术被应用到这类蛋白的研究中,但廉价而安全地把这类蛋白推向市场还需进一步研究。     

甜味蛋白研究的新进展

甜味蛋白(thaumatin)是世界上已知最甜的物质,具有很大的应用前景.Thaumatin的基因核苷酸和蛋白质氨基酸序列都已测定.晶体分析表明它具有高稳定的四级结构.在味蕾小孔中发现了介导thaumatin发生作用的物质.Thaumatin自身的功能仍不清楚.在多种生物中发现了thaumatin类似蛋白质,具有不同的生物活性.用基因工程手段实现了thaumatin在多种原核和真核生物中的表达,但迄今仍未得到理想的基因工程产品.     

马槟榔种子中恶唑烷-2-硫酮的分离和鉴定

马槟榔(Capparis masaikai Levl.)种子是一种中药材,据本草纲目记载,具有清热解毒和催产避孕之功效,其化学成分尚未见报道。马槟榔种仁嚼之先苦而后回甜。已证明甜味物质是一种碱性清蛋白。种子的苦味随贮存时间延长而增加;当种子浸泡于水中一段时间后,则种仁和浸泡液均呈强烈苦味。本文证明,苦味物质是噁唑烷-2-硫酮,结构式为:     

马槟榔种子中的葡糖硫甙硫酸酯和葡糖硫甙酶

自马槟榔(Capparis masaikai L(?)vl.)种子中分离出一种新的葡糖硫甙硫酸酯,即2-羟乙基葡糖硫甙硫酸酯(2-hydroxyethylglucosinolate),得率为干种仁的3％;在葡糖硫甙酶(pH 6.0)作用下,酶解产物为(口恶)唑烷硫酮(oxazolidine-2-thione)。马槟榔种子中的葡糖硫甙酶用1N氯化纳提取,经硫酸铵沉淀,通过葡聚糖G50凝胶过滤层析和羧甲基纤维素离子交换层析,得到纯制品。测得该酶分子量Mr=116 kD,是由二个相近的亚基组成,等电点pI=5.05。与文献中报道从十字花科植物中提取的葡糖硫甙酶是分子量为140 kD的糖蛋白不同,该酶未检出含糖。     

氨基酸组成聚类、蛋白质结构型和结构型的预测

用信息聚类方法对蛋白质的氨基酸组成进行聚类,发现存在梯级成团（大集团分解成小集团）现象,６４５个蛋白质可分成１５个小集团,每一个小集团与蛋白质二级结构含量决定的结构型有一定相关性,但与蛋白质五大结构型相关性不明显。指出了由氨基酸成分和二级结构含量预测结构型的方案中存在的问题。提出了由蛋白质二级结构序列预测蛋白质结构型的新方法,并给出了预测蛋白质结构型的简明预测规则     

贵州四种植物种子蛋白质的氨基酸研究

本文根据贵州所产四种植物种子或种仁,进行了蛋白质的氨基酸测定,采用氨基酸分析仪对它们进行定量。根据分析结果,本文主要讨论了四种植物种子蛋白质的氨基酸含量、种类及利用。     

嗜热与嗜常温微生物的蛋白质氨基酸组成比较

嗜热微生物的嗜热特性与其蛋白质的高度热稳定性紧密相关。为了探索嗜热蛋白质的热稳定机制,比较嗜热和嗜常温微生物的蛋白质在氨基酸组成上的差别,收集110对分别来自嗜热和嗜常温微生物的同源蛋白质序列,比较两组蛋白质各种氨基酸含量以及疏水性氨基酸组成、疏水性指数和荷电氨基酸组成的差别,结果两者在多种氨基酸含量上存在微小但统计学上显著的差别,嗜热蛋白质比嗜常温蛋白质具有较高的平均疏水性和荷电氨基酸组成。对两组蛋白质的“脂肪族氨基酸指数”进行分析,证明嗜热蛋白质之所以具有较高的脂肪族氨基酸指数是由于其亮氨酸含量较高,与影响该指数的其它几种氨基酸无关;从而认为该指数的意义值得怀疑。通过对大量同源嗜热蛋白质和嗜常温蛋白质氨基酸组成的比较,能够揭示一些有关蛋白质热稳定性的普遍规律。     

花生种子贮藏蛋白的氨基酸组成分析及发育过程中17.5 kDa多肽的合成规律

分析了两种不同蛋白质组成类型花生的子叶总蛋白３个主要组分及高甲硫氨酸类型花生的６０．５、４１、３８．５、１８和１７．５ｋＤａ多肽的氨基酸组成,结果表明它们均含有１７种氨基酸,其中天冬氨酸、谷氨酸和精氨酸含量最高,而甲硫氨酸含量和半胱氨酸水平都极低。高甲硫氨酸类型品种的各组分的甲硫氨酸含量均显著高于低甲硫氨酸类型品种的对应组分的甲硫氨酸含量,在这两种类型花生中伴花生球蛋白Ⅱ都是甲硫氨酸含量最高的组分     

AMINO ACID SEQUENCE ANALYSIS OF THE SMALL SUBUNIT OF RIBULOSE BISPHOSPHATE CARBOXYLASE FROM FUCUS (PHAEOPHYCEAE)1

This paper reports for the first time amino acid sequence information for the small subunit of ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase / oxygenase (Rubisco) from a non-green alga. N-terminal sequences are presented for the polypeptide from three species of the genus Fucus (Phaeophyceae). Although homologous to small subunit polypeptides from other organisms, the Fucus sequences exhibit a unique N-terminal section resembling neither cyanobacterial nor chlorophytic sequences. This difference may be a consequence of the plastid DNA coding arrangement for the small subunit in chromophytes, a situation reported for the related organism Olisthodiscus but not previously investigated at the amino acid sequence level.     

沙门菌CWDMs氨基酸代谢的检测

采用氨基氨利用生长试验和谷丙转氨酶（ＧＰＴ）、谷草转酶（ＧＯＴ）、乳酸脱氨酶（ＬＤＨ）、肌酸激酶（ＣＫ）、α－闳丁酸脱氢酶（α－ＨＢＤ）、γ－谷志肽酶（γ－ＧＴ）,酸性磷酸酶（ＡＣＰ）定性与定量分析法,检测伤ＣＷＤＭｓ变异的特点及其机制,探讨ＣＷＤＭｓ变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。结果表明,沙门菌ＣＷＤＭｓ变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。结果表明,沙门菌ＣＷＤＭｓ在仅含蛋氨酸或脯氨     

芸苔属植物种子蛋白质及脂肪酸成分研究

本文对芸苔属(Brassica)19个植物种和变种的种子作了蛋白质、油脂及脂肪酸成分的系统分析。该属植物种子含蛋白质21.2—28.8%,油脂29.3—43.2%,均含有相同的至少13种脂肪酸成分,芥酸是其主要的也是特征脂肪酸,占总脂肪酸的24.2—52.0%。芥酸含量大于50%的种有紫菜苔、塌棵菜、白菜和花椰菜;笋子芥芥酸含量最低,为24.2—30.5%。     

三种蜘蛛丝蛋白组成分析

本文应用高压液相色谱（ＨＰＬＣ）法分析了岳麓山的大腹园蛛Ａｒａｎｅｕｓ ｖｅｎｔｒｉｃｏｓｕｓ（Ｃ．Ｋｏｃｈ,１８７８）,机敏漏头蛛Ａｇｅｌｅｎａ ｄｉｆｆｉｃｌｉｓ （Ｆｏｘ,１９３７）,白额巨蟹蛛Ｈｅｔｅｒｏｐｏｄａ ｖｅｎａｔｏｒｉａ （Ｌｉｎｎａｅｕｓ,１７５７）的丝蛋白的氨基酸组成,以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测定了大腹园蛛不同丝腺体的未成丝的可溶性丝蛋白的分子量。实验结果表明蛛丝蛋白中占优势的     

广西一些第四纪洞穴堆积中化石的氨基酸地质年龄

利用化石中氨基酸的外消旋程度随化石年龄增加而增大的原理,本文分别用“校正法”和“高温法”测定了广西柳州早更新世巨猿洞、中更新世笔架山洞、晚更新世一全新世白莲洞、大龙潭及桂林Chen皮岩的一此处第四纪洞穴堆积物中牙化石、骨化石或贝壳化石的氨基酸年龄,测年结果与其它地质证据或^14C年龄基本一致。