人胎肝中低分子抑瘤物的分离纯化、结构鉴定及其对肿瘤细胞生长的选择性抑制

在胎儿组织中存在一类低分子肿瘤抑制物,胎肝细胞的甲醇－丙酮提取物中保留有大部分抑瘤活性,用体外液体培养条件下对人急性粒系白血病细胞系（HL－60）的抑制作用为指标,跟踪指导分离过程,提取物经反相C18中压液相色谱,Sephadex LH-20凝胶色谱及氨基键合相高效液相色谱分离得到一纯活性物质。经NMR和MS鉴定为7－酮基胆固醇（7－ketocholesterol,7-KC)。体外琼脂培养条件下7－KC对小鼠WEHI－3和S－180细胞较对正常小鼠骨髓粒－巨噬系祖细胞有更强的抑制增殖及集落生成作用,7－KC对HL－60细胞增殖较对正常人骨髓CFU－GM有更强的抑制作用。     

人胎肝中低分子抑瘤物的分离纯化、结构鉴定及其对肿瘤细胞生长的选择性抑制作用

在胎儿组织中存在一类低分子肿瘤抑制物。胎肝细胞的甲醇－丙酮提取物中保留有大部分抑瘤活性。用体外液体培养条件下对人急性粒系白血病细胞系（ＨＬ－６０）的抑制作用为指标,跟踪指导分离过程。提取物经反相Ｃ１８中压液相色谱、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０凝胶色谱及氨基键合相高效液相色谱分离得到一纯活性物质,经ＮＭＲ和ＭＳ鉴定为７－酮基胆固醇（７－ｋｅｔｏｃｂｌｅｓｔｅｒｏｌ,７－ＫＣ）。体外琼脂培养条件下７－ＫＣ对小鼠ＷＥＨ１－３和Ｓ－１８０细胞较对正常小鼠骨髓粒一巨噬系祖细胞有更强的抑制增殖及集落生成作用。７－ＫＣ对ＨＬ－６０细胞增殖较对正常人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ有更强的抑制作用。     

人胎肝中低分子天然抑瘤物对小鼠肉瘤S—180作用的研究

从人胎儿肝脏中分离出一种分子量较小的抑瘤物质(FLS-MeOH),观察了它对小鼠肉瘤S-180细胞生长的抑制效应。在体外琼脂培养中,当FLS-MeOH浓度达到300μg/ml时,可完全抑制S-180细胞的集落形成;给荷瘤小鼠每日注射FLS-MeOH8mg/g体重,共20d,可明显延长小鼠的存活时间,部分小鼠可以无病存活。这些结果说明FLSMeOH在体内外均有明显的抗肿瘤活性,而且具有分子量小、无组织和种系特异性,以及对肿瘤细胞不可逆的毒性作用等特性。     

人胎肝干细胞的分离培养、鉴定及mRNA转录分析

目的：探讨体外大量扩增培养人胎肝干细胞的方法,研究其形态、特性及mRNA转录情况。方法：采用两步灌流法结合链霉蛋白酶消化及Percoll密度梯度离心法分离12～20周胎龄的胎肝细胞,采用免疫细胞化学染色及RT-PCR方法对分离培养的细胞进行鉴定分析。结果：刚分离的细胞活力在80%以上,原代培养3d开始出现小细胞团,2周后即形成肉眼可见的细胞集落,细胞体积小,核质比大;原代、传代培养的胎肝细胞甲胎蛋白（AFP）、细胞角蛋白19（CK19）、卵圆标记蛋白OV-6、细胞分化抗原34免疫染色阳性;RT-PCR分析证明胎肝干细胞中AFP、白蛋白、CK19、CK18和八聚体结合蛋白（OCT）-4mRNA的表达。结论：分离了胎肝干细胞,具有肝细胞、胆管细胞及干细胞表面标志及相应的基因表达,为进一步的基础研究奠定了基础。     

人胎肝细胞分泌的低分子抑瘤物对白血病细胞的抑制作用

本工作证明了在胎儿组织中存在一类低分子天然肿瘤抑制物,它是胎儿组织细胞生成和分泌的,对瘤株细胞和原代白血病细胞有选择性抑制作用。初发期或复发期急性非淋巴细胞白血病患者的骨髓在体外液体培养条件下与肝细胞上清及其甲醇提取物共同孵育4d,可使所有病例的骨髓AML—CFU降低到不可检出的程度。因而,低分子天然抑瘤物是天然肿瘤免疫中的一个组成部分,它在肿瘤的诊断和治疗中有着深远的意义。     

人胎肝造血干细胞增殖刺激物的分离及鉴定

经过超滤,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００和Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２ＨＲ多步分离纯化,从人胎肝细胞原代培养上清中分离到一分了阳为３５ｋＤ的单一活性组分,真有造血干细胞增殖刺激活性,定义为ＦＬＳ－４,ＦＬＳ－４可能是一种新型造血干细胞增殖刺激因子,与具有这类活性的ＩＬ－３,ＩＬ－６,ＧＭ－ＣＳＦ,ＦＬＴ３配基和ＳＣＦ等在理化特性或生物学性质上均有所差异,在胎肝造血活跃时期,是启动     

脑肿瘤抑制因子的功能研究

本文证明了胎脑组织中存在一类可以抑制人白血病细胞系的生长的低分子天然抑癌物．这种抑瘤物抑制活性分布在小于１０ｋＤａ组分,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ２５凝胶过滤可分离为单一组分,且具有广谱的抗肿瘤效应．体外可抑制人白血病、肝癌、胃癌细胞系和小鼠粒、单核和淋巴系白血病细胞,而对人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ和小鼠骨髓ＣＦＵ—ＧＭ的抑制作用较弱。     

人胎肝中肝细胞生长因子生物活性的研究

人胎肝细胞裂解液经膜超滤,在分子量10～30kD组分中可检测出人肝细胞生长因子(hHGF)活性。hHGF为一热稳定的蛋白质或多肽类物质。它可特异地刺激肝来源细胞~3H-TdR掺入的增加,并且存在量效依赖关系,而对非肝来源细胞的DNA合成无刺激作用。hHGF的生物活性及理化性质与某些已知因子,如胰岛素、胰高血糖素、血小板来源的生长因子、表皮生长因子及增殖刺激因子等有所不同。     

人胚胎脑组织中低分子肿瘤抑制物的实验研究

人胚胎脑组织提取液可以抑制人白血病细胞系的生长。分析表明:肿瘤抑制活性主要分布在小于10kDa组分,经Sephadex-G25凝胶过滤可初步分离为单一组分。这种低分子肿瘤抑制物具有广谱的抗肿瘤效应,在体外可以抑制人白血病、肝癌、胃癌细胞系和小鼠粒、单核和淋巴系白血病细胞,但对人骨髓CFU-GM和小鼠骨髓CFU-GM的抑制作用较弱,说明人胎脑低分子肿瘤抑制物对肿瘤细胞具有一定的选择性抑制作用。     

人胎胰腺巢蛋白阳性细胞的分离培养及其生物学特性研究

胰腺巢蛋白(nestin)阳性细胞是近年发现的与胰腺发育密切相关的一种多能干细胞。我们对人胎胰腺中的nestin~+细胞进行了分离和体外培养,并对其生物学特性进行了研究结果表明:(1)胎胰nestin~+细胞表达高水平ABCG2/BCRP1,并在形态和生长方式上均不同于导管上皮细胞;(2)Nestin~+细胞在体外可自发形成类胰岛细胞团(ICC,islet-likc cell clusters);(3)ICC中的nestin~+细胞具有多向分化潜能,可表达多种细胞特异抗原,经体外诱导可产生少量胰岛素阳性的类β细胞。     

人红细胞生成素的分离、纯化及鉴定

 用自制的苯基-琼脂糖CL-4B和羟基邻灰石等层析材料,从再生障碍性贫血病人尿中分离、纯化制得了红细胞生成素(EPO)。用多血小鼠红细胞~(56)Fe参入法测定该制品在体内的生物活力。用小鼠与人骨髓红系祖细胞培养法测其在体外的生物活力。实验结果说明,我们自制的EPO制品,不仅能用于动物,也能用于人骨贿红系祖细胞的培养。用Azocoll法测该制品中蛋白水解酶活力为阴性。     

人胎肝中一种35kD成分的造血调控研究

肝脏作为胚胎发育一定阶段的造血中心器官,其造血干细胞增殖十分活跃,已发现的具有正向调节其作用的因子有IL-3,IL-6,GM-CSF,SCF及FLT 3配基等;然而上述因子的作用并不足以解释胎肝如此活跃的造血活动。推测可能还有其他特异的源于胎肝造血微环境细胞的正向调节因子存在,并以旁分泌方式作用于G_0期造血干细胞,使其进入细胞周期。     

人胎肝基质细胞培养上清液中造血生长因子的分析

采用人胎肝造血基质细胞的体外液体培养技术,结合造血干细胞和祖细胞的体外测试方法,研究了造血基质细胞所释放的造血生长因子与造血干细胞和祖细胞之间的相互作用。结果表明,在适宜的条件下,人胎肝造血基质细胞可在体外传代培养达100d之久。培养过程中,对不同时间收集的培养上清液进行测试的结果表明,这些贴壁细胞可以不断地释放多种造血活性物质。在100d培养过程中,上清液中始终都可以检出CFU-S增殖刺激物活性。培养第24天的上清液中还可检出BPF和GM-CSF活性。这些造血活性物质对CFU-S的生理状态和祖细胞的增殖与分化有着深刻的影响。但是在培养上清液中未检出IL-3样活性物质。     

中国红豆杉细胞培养物中两种紫杉烷的分离鉴定

从中国红豆杉细胞培养物中分离得到两个紫杉化合物,它们的结构为1β－ 羟基巴卡亭Ⅰ（1β-hydroxy baccatinⅠ）和云南红豆杉甲素（yunnanxane）。     

松口蘑菌丝体的分离和RAPD-PCR分析

针对松口蘑 [Tricholomamatsutake(S .ItoetImai)Sing .]菌丝体分离培养困难和各种相关分离物目前难以用出菇试验鉴定的现实 ,采用 8种培养基配方 ,对 9个不同来源的松口蘑子实体的不同部位及菌根、菌土进行组织分离 ,计接种试管 81 0多支 ,结果从菌褶部位获得 94支慢生型的菌丝体分离菌株 ,从菌柄部位仅获得 1支快生型的菌丝体分离菌株。以马铃薯葡萄糖土壤滤液培养基 (PDAS)、马铃薯葡萄糖麦麸滤液培养基 (PDAW )、BM培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA)对菌褶进行组织分离 ,获慢生型菌丝体的成功率依次为 74.4%、35.5%、156%和 8.9%。以各分离菌株的来源松口蘑子实体和中日两国松口蘑研究者提供的分离菌株作为DNA参照样品 ,对从供试子实体、菌根、菌土进行组织分离获得的各种相关纯培养物进行亲菌鉴定。采用筛选的 1 7个随机引物介导 2 5个供试松口蘑子实体及其分离菌体的RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA) PCR反应 ,全部获得了清晰而稳定的DNA指纹图谱 ,结果一致表明 :每个松口蘑子实体的菌盖 (含菌褶…