小鼠胚胎干细胞（ES—M13）核骨架—核纤层—中间纤维结构体系的研究

本文使用细胞的选择性抽提、ＤＧＤ包埋去包埋电镜制样、免疫荧光和免疫印迹技术研究了小鼠胚胎干细胞（ＥＳ－Ｍ１３）的核骨架－核纤层－中间纤维结构体系。在电镜下可以看到,ＥＳ细胞存在精细发达的核骨架结构,核骨架纤维同核纤层结构相连接,细胞质中有许多直径为１０ｎｍ的中间纤维单丝,细胞质中有许多直径为１０ｎｍ的中间纤维单丝,在免疫荧光分析中,使用角蛋白单克隆抗体有阳性反应,细胞质区域可以看到较强的荧光,没有     

鼠胚成纤维细胞中间丝—核纤层—核骨架结构体系的研究

本文以１２．５天小鼠胚胎成纤维细胞为材料,使用择性抽提和整装细胞电镜制技术,显示了鼠胚成纤维细胞的中间丝－核纤层－核内架（ＩＦ－Ｌ－ＮＭ）结构体系。细胞质中有非常发达的中间丝,有的纤丝结合为束状存在,纤丝沿着核呈一定方向平行排列。细胞中也可以观察到核纤层和核骨架结构,但同胞质中间丝相比,核骨架不发达。整装细胞电镜制样使观察到的ＩＦ－Ｌ－ＮＭ更具有真实感和立体感,应用音接免疫荧光技术检测细胞内的中间     

PtK2细胞的核骨架—核纤层—中间纤维体系

本文用选择性系列抽提的方法结合整装细胞电技术和ＤＧＤ包埋－去包埋超薄切片技术,在电镜下清晰地显示了ＰｔＫ细胞的核骨架－核纤层－中间纤维绵精细结构。处于分裂中期的细胞经抽提后看到,染色体残３余与中间纤维仍然保持一定的联系。用免疫荧光技术对提提后的ＰｔＫ２细胞进行分析结果表明：其中间纤维能同时与ＡＥ１和ＡＥ３反应;能一ＬａｍｉｎＢ反应的单抗可以特异地定位于其核周,而ＬａｍｉｎＡ（Ｃ）的单抗除了与其核纤     

北京鸭B淋巴细胞的中间纤维—核纤层—核内骨架体系

以北京鸭腔上囊为实验材料,应用细胞分级抽提方法与非树脂包埋－去包埋剂的电镜制样技术相结合,显示出Ｂ细胞中相互连结的中间纤维－核纤层－核内骨架体系的超结构及其分布,中间纤维交织成网络状,纤维直径在９－１１ｎｍ,其成份是分子量为６７ｋＤ,等电点约为６．２的波形蛋白,核纤民支呈片层状结构环绕在核区周围,其主要成份是分子量为６７ｋＤ,等电点偏酸性的Ｌａｍｉｎ Ｂ。核内骨架由粗细不一的纤维形成网络结构,其上     

PtK2细胞的核骨架—核纤层——中间纤维体系

本文用选择性系列抽提的方法结合整装细胞电镜技术和DGD包埋-去包埋超薄切片技术,在电镜下清晰地显示了PtK 2细胞的核骨架-核纤层-中间纤维体系的精细结构。处于分裂中期的细胞经抽提后可以看到,染色体残余与中间纤维仍然保持一定的联系。用免疫荧光技术对抽提后的PtK 2细胞进行分析结果表明:其中间纤维能同时与AE1和AE3反应;能与Lamin B反应的单抗可以特异地定位于其核周,而Lamin A(C)的单抗除了与其核纤层蛋白有很强的反应外还与中间纤维有交叉反应。此外,在分裂期细胞中可以看到Lamin A(C)可能与染色体能特异结合;与HeLa细胞不一样。PtK 2细胞的核骨架成份不能与280kD的核骨架蛋白单抗反应。双向电泳结果显示出PtK 2细胞的核骨架-核纤层-中间纤维体系的组成成份与HeLa细胞相比有较大的差异,而且这种差异主要反映在核骨架组份上,TdR的处理也能导致其组份发生变化。     

四膜虫细胞的核骨架及类中间纤维

采用非树脂包埋去包埋剂超薄切片结合选择性生抽提方法显示,原生动物四膜虫细胞大核具有发达的核骨架纤维网络,核周是一层完整的核纤层结构,在四膜虫细胞小核中,亦存在核骨架和核纤层。四膜虫细胞皮层中存在水下溶性纤维网架,其中含有类中间纤维蛋白组分,４９ＫＤ蛋白。     

营养期和休眠期冠突伪尾柱虫的类中间纤维-核纤层-核骨架体系

近年来的研究表明 ,尽管不同类群的纤毛虫形成包囊过程中 ,细胞经历了不同程度的分化 ,形成不同类型的包囊 ,但是其休眠包囊生命活动中对细胞内物质的消化、能量利用和代谢等都具有共同的特征 (顾福康等 ,1995 ,1999;李恭楚等 ,1999;陈灵等 ,2 0 0 0 )。这一现象提示 ,纤毛虫在休眠条件下的生命活动可能具有一些相同的物质和结构基础。由于在高等真核细胞中普遍存在的中间纤维-核纤层 -核骨架体系对细胞生命活动起到多方面的重要作用 ,并且尽管目前仅对极少数原生动物观察到该结构体系 ,但它却预示了在这一原始的单细胞类群中以中间纤维为基…     

急纤虫营养细胞和休眠细胞的中间纤维-核骨架体系

利用生化分级抽提、DGD包埋—去包埋透射电镜术和SDS—PAGE凝胶电泳,研究了膜状急纤虫营养细胞和休眠细胞内中间纤维—核骨架体系的分化特征及其蛋白组成。观察到营养细胞中,位于细胞质不同区域的中间纤维形成网状,其网络的密度不同;核骨架中,核纤层位于细胞核周缘,薄层状,厚约50nm;核内骨架由较致密的纤维网络组成。休眠细胞内该结构体系依然存在,但位于细胞内不同层次的纤维网比营养细胞的同种结构要致密得多,这可能与纤毛虫脱分化时细胞大范围的收缩有关;休眠细胞的包囊壁中层壁存在相当于中间纤维的网络结构。SDS—PAGE电泳图谱显示,休眠细胞内该体系的蛋白组成发生了较明显的变化,其中保留了营养细胞的部分蛋白条带,丢失了部分条带,同时还产生了一些特异性条带。分析表明,膜状急纤虫的中间纤维—核骨架体系是细胞在营养条件下和休眠状态下都稳定存在的结构;而纤毛虫形成休眠细胞后中间纤维—核骨架体系及蛋白组成上的变化提示,细胞在休眠状态下,基因的表达水平与营养细胞是不同的。     

BHK_(21)细胞的中间纤维-lamina-核骨架体系

以系列选择性抽提技术与显示细胞骨架的整装电镜技术为基础,应用免疫胶体金标记与蛋白质成份的双向电泳分析技术,研究了BHK_(21)细胞的中间纤维-lamina与核骨架(核基质)结构体系及其主要的蛋白成份。BHK_(21)细胞的中间纤维-lamina与核骨架是在结构上相互联系,贯穿于核与质的网络体系。中间纤维单丝直径为10nm,能很好地被抗波形蛋白抗体-金颗粒所标记,生化分析同样说明BHK_(21)细胞中间纤维的主要成份是波形蛋白(vimentin),其分子量为55KD,等电点为5.6。中间纤维网在胞质内呈极性分布,与lamina密切联结。BHK_(21)细胞的lamina能被抗lamin A与C的单克隆抗体-金颗粒标记。双向电泳分析证明,lamina含有三种蛋白成份,即lamin A,B,C,其分子最分别为68KD,70KD与62KD,lamin A,C等电点均为6.9—7.2,而lamin B偏酸,其等电点为5.8。BHK_(21)细胞核骨架纤维网也可以被清晰的显示,其蛋白成份较为复杂,在双向电泳谱上经常出现多个清晰的斑点,很可能含有肌动蛋白(actin)。298KD核基质蛋白的单克隆抗体-金颗粒能准确的标记核骨架纤维。     

不同条件对植物中间纤维体外装配的影响(简报)

细胞骨架的研究是当今细胞生物学中最为活跃的领域之一,而中间纤维是三种主要骨架纤维中研究较少的一种。从60年代发现至今,人们对动物细胞中间纤维的研究已经比较深入,近来又发现它在基因表达等重要生命活动中起一定的作用。中间纤维有一个显著的特征,就是能够在体外进行自我装配,不需要核苷酸和结合蛋白参加,也不依赖于蛋白质的浓度。植物细胞中是否存在中间纤维一直是未解决的问题。从80年代起,有一些研究发现在高等植物细胞中存在能与动物细胞中间纤维抗体进行     

寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)细胞核骨架与中间纤维的研究

甲藻(涡鞭毛虫,dinoflagellate)的细胞核是现存真核生物中最原始的。我们采用整装细胞制样和非树脂包埋去包埋剂超薄切片电镜技术,结合选择性生化抽提方法显示在寇氏隐甲藻(Cryptheccdinium cohnii)细胞中存在一个以水不溶性纤维蛋白成份为主的,贯穿于细胞核和细胞质的纤维网架系统,即核骨架-中间纤维结构体系,而Lamina结构不明显。免疫印迹法显示,甲藻细胞中存在类角蛋白组分,分子量为63kD和67kD,哺乳动物Lamin抗体与甲藻细胞全蛋白反应阴性。实验结果表明,在原始真核细胞中已经出现了类似于哺乳动物细胞的核骨架和中间纤维,并提示核骨架-中间纤维细胞骨架体系可能起源于真核细胞起源早期。本文对Lamina与中间纤维在进化上的关系及Lamina在真核细胞进化中的功能意义作了讨论。     

染色体端粒DNA与核骨架的结合关系(简报)

端粒是真核生物染色体的一种特化结构,对于染色体的稳定以及染色体的完全复制有着十分重要的意义。许多种生物的端粒DNA序列已被发现:四膜虫,草履虫为(G_4T_2)_n;人、锥虫、短膜虫为(AG_3T_2)_n;尖毛虫、棘尾虫、游仆虫为(T_4G_4)_n;拟蓝芥菜为(AG_3T_3)_n。     

植物细胞中含有类角蛋白多肽及角蛋白cDNA的同源序列

根据中间纤维对去圬剂和高盐溶液的抗性,用类似动物细胞中间纤维抽提的方法,对玉米和烟草的叶肉细胞进行选择性抽提处理,提取中间纤维的蛋白成份。蛋白经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳后,用动物细胞角蛋白的单克隆抗体进行免疫印迹反应,主要显示了分子量为52kD和64kD两种多肽成份。同时,提取玉米和烟草的DNA与α-~(32)P标记的兔K_3cDNA片段RB_3进行点杂交,均呈现较强的阳性反应,说明它们的基因组DNA中存在角蛋白基因的同源序列。     

植物细胞中间纤维角蛋白性质的分析

角蛋白是植物细胞中间纤维的主要成分。应用选择性抽提和生物化学技术,分离纯化了豌豆根尖细胞58-、52 kD、白菜子叶52kD和胡萝卜悬浮细胞64kD角蛋白,测定了它们的氨基酸组成,结果表明上述角蛋白与动物细胞中间纤维角蛋白的氨基酸组成有较大的相似性。比较了动、植物细胞角蛋白的肽谱,结果显示它们之间存在较大的差异,但是植物细胞间角蛋白的肽谱比较一致,这提示它们属于同一蛋白家族,为植物中间纤维及其角蛋白的存在提供了新的论据。     

百合花粉母细胞核骨架的超微结构观察

参照动物细胞核骨架的研究方法,用整装电镜技术和DGD包埋-去包埋技术研究了选择性抽提的和完整的百合(Lilium davidii var. willmottiae (Wilson) Roffill)花粉母细胞。结果表明,住减数分裂前期Ⅰ,百合花粉母细胞核内存在一个精细的非染色质纤维——核骨架。该网络由5～15nm的纤维交织而成,广泛地分布于细胞核内。这些核骨架有的分布于染色体间,有的分布于染色体周围,并与染色体和核仁相连。随着减数分裂时间的推移,染色体(质)间核骨架纤维逐渐减少,染色体(质)周围的核骨架纤维逐渐增多,并与染色体内部的纤维结构相连,表明核骨架一方面为染色体拓扑变化提供一个空间支架,另一方面也可能参与了染色体骨架的构建。     

植物细胞核基质(Nuclear Matrix)的形态结构及其NuMA蛋白成分的研究

应用细胞选择性抽提并结合DGD包埋去包埋剂电镜技术对植物细胞核基质的形态结构进行了观察。结果显示胡萝卜悬浮培养细胞、银杏花粉细胞和精子细胞的细胞核内存在一个非染色质性的纤维蛋白网络体系。免疫荧光染色结果说明植物细胞核基质中含有与动物NuMA多抗交叉反应的多肽。免疫印迹反应显示胡萝卜悬浮培养细胞核基质蛋白与NuMA蛋白多抗的阳性反应条带为74KD和76 KD;银杏花粉细胞只有78 KD一条阳性带。以动物核基质NuMA蛋白保守杆状区的cDNA片段作为探针,与白菜子叶总DNA进行Southern杂交的结果表明植物细胞基因组中含有动物NuMA蛋白cDNA的同源序列。