风疹病毒核酸检测在风疹消除阶段应用的必要性

风疹是由风疹病毒(Rubella virus,RV)引起的一种以发热、出疹为主要表现的急性呼吸道传染病,孕早期感染RV可引起先天性风疹综合征(Congenital rubella syndrome,CRS)。风疹是疫苗可预防性传染病,2008年我国将风疹疫苗纳入国家扩大免疫规划,通过连续10年免疫规划的实施,风疹发病率迅速下降,2014～2017年已接近风疹消除的目标(风疹发病率为0.8/10万～0.12/10万)。加强对风疹可疑病例的报告和实验室鉴别诊断,对隔离传染源、指导疫苗使用以及阻断RV传播具有重要的作用。《麻疹和风疹病毒感染实验室诊断手册》要求在风疹暴发流行阶段,只针对每起暴发采集5～10份血标本,检测风疹IgM是风疹病例确诊的金标准;而在消除风疹和CRS阶段要求对每一例散发疑似病例采集血清标本和鼻咽拭子,分别进行IgM抗体和RV核酸的检测。本文对我国在消除风疹和CRS阶段将RV核酸检测应用于风疹病例早期诊断的必要性进行了阐述。     

风疹疫苗在中国广州暴发风疹过程中的有效性

正WHO推荐使用风疹疫苗预防风疹和先天性风疹综合征(CRS)。在全球使用的大部分批准上市的风疹疫苗是以RA27/3株为基础的疫苗,估算具有95%~100%的有效率。与此不同,中国使用BRD-Ⅱ株为基础的风疹疫苗,已经进行了少数几项现场研究,旨在估计中国风疹疫苗的疫苗有效性。在2014年3月17日在广州的一所中学暴发了风疹,作者对之进行调查以期了解暴发的原因,并用这项调查评估了中国风疹疫苗的有效性。     

严重急性呼吸道感染病例中人冠状病毒OC43基因特征分析

人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)是导致人呼吸道感染的重要病原之一。为了从分子水平上探讨严重急性呼吸道感染(Severe acute respiratory infection,SARI)病例中HCoV-OC43的基因特征,本研究应用实时荧光定量(Real-time)PCR方法对2019年河南省374份SARI病例样本进行HCoV-OC43核酸筛查,并对核酸检测阳性样本进行棘突蛋白(Spike,S)、RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)和核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N)三个靶基因扩增和序列测定。结合从GenBank数据库筛选的国内外42条代表序列和本研究所获得的S、RdRp和N三个靶基因全长序列构建基因亲缘性关系树,对本研究所获得的HCoV-OC43样本进行基因型别鉴定和基因特征分析,并对HCoV-OC43重要抗原S蛋白进行氨基酸位点变异分析。结果显示:在374份SARI病例样本中共检测出15份HCoV-OC43核酸阳性样本(15/374,4.01%),并在4份临床样本中获得S、RdRp和N基因全长序列。通过构建基因亲缘性关系树,结果显示有3株属于G基因型,1株属于H基因型。S蛋白氨基酸位点变异分析结果提示,2019年G基因型流行株(包括本研究的3株和美国株USA/MN306041/SC0810/2019)有特异性的3个氨基酸位点变异:L272P、P516S和S902A。2019年H基因型流行株(包括本研究的1株和美国株USA/MN306043/SC0841/2019)特异的氨基酸位点变异为N484D。本研究通过对2019年河南省流行的HCoV-OC43进行基因型别鉴定与基因特征分析,为我国HCoV-OC43的分子变异变迁研究提供了基线数据。     

ARIMA乘积季节模型在河南省风疹疫情预测中的应用

目的建立自回归求和移动平均(ARIMA)乘积季节模型,探讨其在河南省风疹发病趋势预测应用中的可行性。方法收集河南省2004—2013年报告的各月风疹病例数,建立ARIMA乘积季节模型,用2014年1—12月报告的风疹病例数,验证模型预测效果。结果河南省2004—2013年报告的风疹病例数呈现明显的季节效应,2009年前呈现逐年增多的趋势,2009年后呈现逐年减少的趋势;模型ARIMA(1,0,0)(0,1,1)12能较好的拟合既往的风疹病例数,且对2014年1—12月份风疹病例数的预测值与实际值基本吻合。结论 ARIMA乘积季节模型对河南省风疹发病趋势的预测具有可行性。     

不同狂犬病毒株抗原反应性的比较研究

应用ELISA法对285份免疫前及健康人血清和742份以不同毒株制备的狂犬病疫苗(aG株、CaG株、CTN株,PM株)全程免疫后人群的血清标本进行抗狂犬病毒抗体的检测。结果显示CTN株病毒抗原对不同毒株狂犬病疫苗免疫后血清的抗体阳性检出率均能达到90％以上,且与SNT效价的相关性较好;而aG株抗原对除aG株以外其它毒株狂犬病疫苗免疫后血清的阳性检出率仅为50％左右。因此不同毒株狂犬病毒抗原的反应性存在明显差异,选用纯度高、活性好的CTN株病毒或两株病毒以不同比例混合作为ELISA检测用抗原,测定疫苗免疫后人群的抗体水平,可获得满意的结果。     

免疫接种后对脑膜炎球菌的交叉反应调理素

<正>健康志愿者用目前流行于挪威的奈氏脑膜炎球菌(三族株,44/76株,B∶15∶P1.7株/16株)制备的外膜泡囊菌苗免疫后,对其血清的调理活性进行了检测,已证实在免疫后血清存在下,三族株及不同血清群,血清型和血清亚型的未定型菌株的吞噬作用都有明显的增加。用鲁米诺强化化学发光法测定表明在三族株和未定型脑膜炎球菌的吞噬作用期间,接种者的血清亦能引起白细胞氧化代谢的明显增强。但并未见到与不同血清群二族(2a型)脑膜炎球菌株的交叉反应性血清调理素有所增加,其提     

风疹减毒活疫苗主种子批毒种(松叶株)的安全性和免疫原性检测

评价兰州生物制品研究所用风疹病毒松叶株主种子批毒种制备的冻干风疹减毒活疫苗的安全性和免疫原性。采用自身对照、开放性的免疫原性临床观察试验,对100名8～10月龄筛选后符合条件的健康易感儿童,皮下接种1剂风疹减毒活疫苗,观察其免疫后的局部和全身反应并采集每个受试者免前和免后35d的血清标本,检测风疹HI抗体,计算阳转率和几何平均滴度。试验中所有受试者在系统观察期内均未观察到注射部位局部的不良反应;总的发热率为5%,且均为轻度发热;有1例在观察期内出现腹泻和咳嗽并持续5d,发生率为1%,属中度全身反应;血清风疹病毒抗体(HI)阳转率为100%,GMT为1:638.7±1.7。该疫苗与国内、外其它种类的风疹疫苗一样具有良好的安全性和免疫原性。     

冻干风疹活疫苗生产工艺研究

文报告了冻干风疹减毒活疫苗生产工艺及疫苗研制结果。在对日本化学血清疗法研究所疫苗生产株—松叶株全面检定的基础上,通过对原代兔肾细胞培养条件及病毒培养条件的试验优化,建立了疫苗生产工艺并制备出了冻干风疹活疫苗制剂,稳定性试验表明其安全有效、质量稳定可靠,而且其生产工艺切实可行、投入产出率高。     

肛周脓肿和肛瘘患者的病原菌分布及其与血清MMP-2、IL-17A水平的相关性

目的分析肛周脓肿与肛瘘患者的病原菌分布及其与血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、白细胞介素-17A(IL-17A)的相关性。方法收集2017年3月至2019年11月在我院收治的肛周脓肿和肛瘘患者共69例,分为肛周脓肿组(n=23)、肛瘘病程90 d组(n=20)、肛瘘病程90～180 d组(n=17)、肛瘘病程180 d组(n=9)。收集患者脓液或瘘管分泌物进行细菌培养,同时采集血清标本检测MMP-2、IL-17A水平,分析病原菌分布与MMP-2、IL-17A表达的相关性。结果 69份标本中有66份标本培养出细菌,阳性率为95.65%(66/69)。共分离出68株细菌,其中有2份标本出现2种细菌同时生长,混合感染率为3.03%,其余64份标本均为单一细菌生长。68株细菌中革兰阴性菌58株(85.29%),革兰阳性菌8株(11.76%),真菌2株(2.94%)。各组患者血清MMP-2、IL-17A阳性率比较差异有统计学意义(均P0.05)。单一病原菌感染患者血清MMP-2、IL-17阳性率差异无统计学意义(均P0.05)。血清MMP-2与IL-17A水平呈正相关(r=0.325,P=0.009)。结论肛周脓肿与肛瘘患者以单一病原菌感染为主。患者血清MMP-2与IL-17A水平呈正相关。     

2020年广州市荔湾区健康人群麻疹、风疹和水痘的IgG抗体水平监测分析

目的了解广州市荔湾区2020年健康人群的麻疹、风疹和水痘IgG抗体水平,为本地制定免疫规划策略提供科学依据。方法采用分层随机抽样方法确定被调查对象,采集血液标本共238份,进行麻疹、风疹和水痘的IgG抗体水平监测并进行分析。结果 ELISA检测血清样本共238份,麻疹、风疹和水痘IgG抗体阳性率分别为97.06%、92.02%和79.41%,抗体几何平均浓度(geometric mean concentration, GMC)分别为1 204.65、43.38和290.38 mIU/mL。男女性别比为1.02∶1,麻疹、风疹和水痘IgG抗体阳性率差异无统计学意义(P0.05)。2～4岁组麻疹IgG阳性率最低,不同年龄组阳性率差异有统计学意义(χ~2=48.158,P0.05);0～1岁组的风疹IgG抗体阳性率最低,不同年龄组抗体阳性率差异有统计学意义(χ~2=36.980,P0.05);0～1岁组水痘IgG抗体阳性率非常低,不同年龄组抗体阳性率差异有统计学意义(χ~2=30.832,P0.05)。接种麻疹疫苗≥2剂次的人群IgG抗体阳性率为95.10%,不同免疫史差异无统计学意义(P=0.448,P0.05);接种风疹疫苗0剂次的人群IgG抗体阳性率最低,不同免疫史差异无统计学意义(P=0.020,P0.05);接种水痘减毒活疫苗0剂次的人群IgG抗体阳性率最低,接种2剂次的阳性率最高,不同免疫史差异有统计学意义(P=0.010,P0.05)。结论本区麻疹、风疹IgG抗体均维持在较高水平并有所提高;水痘IgG抗体水平较低,存在暴发、流行的可能。应加强麻疹、风疹免疫接种和查漏补种工作;有针对性地宣传水痘减毒活疫苗并推广接种;还须积极开展麻疹、风疹和水痘IgG抗体水平监测。     

新肝炎病毒TTV在各类高危人群中的感染状况和分子流行病学研究

目的观察新肝炎病毒TTV在各类高危人群中的感染状况、基因分型及其在肝病发生和发展过程中的作用。方法在日本株TTVORF1保守区设计了两对套式引物,采用巢式聚合酶链反应扩增血清TTVDNA,并对产物进行分子克隆和部分基因序列分析。结果在非甲-戊型和非庚型肝炎病人、血清HBsAg阳性的肝炎病人、正常献血员、肝炎肝硬化病人、原发性肝癌病人、静脉内吸毒者和女性与男性性乱者中,血清TTVDNA阳性率分别为43.2％(16/37)、28.8％(15/52)、9.3％(4/43)、51.9％(14/27)、38.5％(5/13)、35.0％(14/40)、17.3％(8/45)和18.8％(3/16)。其中非甲-戊型和非庚型肝炎病人、血清HBsAg阳性肝炎病人的ALT平均为(472士276)u·L-1和(385士218)u·L-1;肝炎肝硬化病人TTVDNA阳性率显著高于HBsAg阳性肝炎病人。同时,从非甲-戊型和非庚型肝炎病人、血清HBsAg阳性肝炎病人、正常献血员、静脉内吸毒者和女性性乱者中,分别获得6份TTVDNAORF1克隆,其基因序列与日本株TTVORF1部分基因核苷酸序列同源性为97％～99％,均属于TTV1a型。结论TTV感染和ALT升高存在一定的关系;我国各类高危人群感染TTV以1a型为主,TTV基因型与疾病发生和传播方式关系不大。国内首次报导性传播的TTVDNA基因型。     

降血脂细菌的筛选(摘要)

肠道正常菌群对脂质代谢的作用,早已引起注意。降脂细菌的研究,国外仅见河合康雄的报告;国内蔡海江等对来自外环境的一株特殊的假单胞菌16Zu的研究表明,该株系非受体性吸附甘油三酯等血脂,必须直接同血接触才起作用。为了选出有降脂作用的正常菌,探讨肠球菌对血脂的作用,我们用体外试验(In Vitro tests)筛选降脂菌株,结果如下: 一、菌株的分离与初步鉴定:1.健康人粪标本115份,有107份分离并初步鉴定出肠球菌(112株),分离率为93.0％。2.从62份牛乳标本分离出肠球菌及乳链球菌等链球菌共50株。3.从奶牛肛试标本19份分离出肠球菌18株。二、体外对血脂的作用:1.试管法:用混合人血清加菌37℃水浴作用30分钟后离心,取上清用Abbott VP超级自动生化分析仪酶法检测总胆固醇(TC)与甘油三酯(TG)。结果:人株59株中,对TC与/与或TG有吸附作用者5株(占8.5％);牛(乳)株44株,对TC与/或TG有吸附作用者6株(13.6％),两类菌株无显著差别(P>0.05)。另外,人株44.1～49.2％的菌     

2020年我国风疹流行病学和病毒基因特征分析

为了解2020年我国风疹流行病学特征以及流行风疹病毒(Rubella virus,RV)的基因特征,本研究收集整理全国麻疹/风疹监测信息报告管理系统中2020年中国风疹发病数据,分析其流行病学特征;同时,依托全国麻疹/风疹实验室网络获得RV分离株,经鉴定后扩增并测定阳性RV分离株的靶基因序列——E1基因的739个核苷酸片段,并与WHO推荐的基因型参考株序列以及已发表的基因亚型参考株序列进行比对确定基因型和亚型,同时与我国2000-2019年间流行的RV进行亲缘性关系分析.结果显示,2020年中国风疹报告发病率为0.18/10万,继2018-2019年风疹的复发和暴发后出现大幅下降,发病人群年龄组主要为10-29岁无免疫史的青少年和成人;2020年我国RV流行的主要基因亚型为1E-L2与2B-L2c,为2018-2019年间检测到的境外输入性病毒.因此,在实施有效的风疹疫苗免疫后,我国本土流行的病毒逐渐被阻断,然而由于我国风疹易感人群的累积和输入性病毒的持续传播导致了我国近些年风疹疫情的回升.鉴于此,我国应根据现状制定更加切实有效的风疹疫苗免疫策略,消除青少年和成年人中的易感人群;同时应进一步加强风疹流行病学和病毒学监测,从而科学地阻断输入病毒的传播.     

用生物素—亲和素酶染色法检测流行性出血热病人血清抗体

目前,生物素—亲和素系统在微生物方面的应用主要局限于ELISA法。我们用生物素一亲和素酶染色法(BAPS)检测流行性出血热(EHF)患者血清抗体,获得满意结果。 用BAPS法检测10份EHF患者的抗体及滴度,用兔抗76-118血清作为已知阳性对照,同时以20份非EHF患者血清为阴性对照。首先分别将感染了流行性出血热病毒陈株、A9株、R22株的Verc-E6细胞固定于含12个憎水漆圈的载玻片上,于此三种抗原片上分别滴加上述待检血清,37℃湿盒30分钟,PBS-     

2001～2011年上海市风疹病毒分子流行病学研究

本研究对2001～2011年本实验室保存的血清标本检测结果为麻疹IgM阴性,风疹IgM阳性病例相对应的咽拭子标本进行风疹病毒（Rubella virus,RV）分离,用RT-PCR方法对细胞培养产物鉴定后扩增病毒E1基因,扩增产物用于核苷酸序列测定,并进行分子流行病学分析。结果表明,60份咽拭子标本共分离到31株RV,获得27株RV的739nt（nt8 731～nt9 469）核苷酸序列,系统同源性分析表明,27株RV分离株分别属于两个不同的基因型,除分离自2011年的11009株、11052株和11106株为2B基因型外,其他分离株均为1E基因型。27株RV分离株大部分的核苷酸突变为无义突变,氨基酸序列高度保守。24株1E基因型分离株中大部分毒株氨基酸序列完全一致,自2001年以来可能有来自同一传播链的RV在持续传播。本研究首次监测到2B基因型RV2011年开始在上海流行,经GenBank核苷酸序列比对发现,其与越南、日本、阿根廷等国家近几年的RV分离株核苷酸序列同源性达99%。由于以前对风疹的监测较少,尚不能证明其来源。     

四川省部分疫区流行性出血热病原学及流行病学研究

本文报道四川省流行性出血热(EHF)疫医鼠类带毒调查、病毒分离鉴定及抗原性分析结果,由7份EHF抗原阳性鼠肺标本及9份急性期患者血清中各分离到EHF病毒5株。由鼠类分离的5株病毒包括褐家鼠2株,黄胸鼠1株,四川短尾(鼠勾)鼱1株以及中麝(鼠勾)1株。经IFA、ELISA及单克隆抗体的抗原测定,证明所有毒株均属野鼠型、抗原性与76—118株及A_9株接近,但由短尾(鼠勾)及中麝(鼠勾)分离的毒株的抗原性有明显差异。     

南方食品中沙门氏菌污染调查及分型

摘要:【目的】系统调查我国南方代表性地区食品中沙门氏菌污染情况,并对分离株进行血清分型和肠杆菌基因间重复共有序列聚合酶链式反应(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Polymerase Chain Reaction,ERIC-PCR)分型研究,为溯源和控制食品中沙门氏菌的污染提供数据。【方法】采用定性法和最大可能数(Most Probable Number,MPN)法对七大类食品(肉与肉制品、水产品、速冻食品、熟食、蔬菜、乳制品和食用菌)中的沙门氏菌进行检测。利用血清分型和分子分型确定南方沙门氏菌血清型的分布和优势血清型,研究分离株的遗传多样性。【结果】从400份食品样品共检出75 份沙门氏菌阳性样品,污染率为18.8%(75/400)。其中,97.3%(73/75)的阳性样品污染水平均低于10 MPN/g。对93株分离株进行血清分型,分属9个群、29种血清型。优势血清型为德尔卑沙门氏菌(Salmonella Derby)和鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)。利用ERIC-PCR对96株沙门氏菌(包括93株分离株和3株标准株)进行分型研究发现,在相似系数为0.75时可分为15个聚类簇,56种型别,分离株的基因型别呈现多样性。【结论】南 方食品中沙门氏菌的污染率较高,但污染水平低。S. Derby和S. Typhimurium为优势血清型。初步建立了沙门氏菌ERIC-PCR指纹图谱数据库,南方食品中沙门氏菌的血清型和基因型呈现多样性。     

我国流行性乙型脑炎病毒毒力和抗原性的研究

流行性乙型脑炎(乙脑)病毒的毒力,多与毒株的大小空斑数的比例有关;同株内大斑小斑的特征各异。60年代和80年代的乙脑毒株,其毒力无明显差异。单克隆抗体(McAb)51～8对15株乙脑病毒的中和指数(log10)为:6.05～6.25者3株,5.08～5.67者5株,4.0～4.67者4株,1.95～3.83者3株。这种差别与毒株的分离年份和地区无关。多克隆抗体(PcAb)的中和指数(log10):5.0～5.33者11株,4.0～4.73者4株。可见McAb能较好地反映乙脑毒株的抗原性差别。文中讨论了毒力检查和McAb抗原分析的流行病学和免疫学意义。     

抗甲型肝炎病毒单克隆抗体(抗-HAV McAb)的研究

应用细胞融合技术成功地建立了3株持续高效分泌抗-HAV McAb的杂交瘤细胞株(AG_3,AD_2和AE_8株),所得腹水中的抗-HAV滴度达1:128000～1:1024000。这3株McAb都能与粪便提取HAV和细胞培养HAV反应,且这种反应均能被甲肝病人恢复期血清阻断。这些McAb作用于HAV的不同抗原位点,其中AE_8 McAb具有中和HAV感染性的能性。这些McAb作包被抗体检测HAV时,所测的HAV滴度较人抗体作包被时测得的滴度高2～8倍。将AE_8 McAb标记酶后,用以检测Abbott药盒标化的50份甲肝IgM血清,49份结果一致,符合率98％。     

ELISA法检测疫苗中牛血清残留量的适用性研究

为了验证ELISA法对病毒性疫苗中残余牛血清蛋白检测的适用性,用牛血清蛋白ELISA测定法与牛血清白蛋白ELISA测定法、牛血清IgG-ELISA测定法对麻疹疫苗、风疹疫苗、腮腺炎疫苗洗涤前病毒培养液、洗涤后病毒收获液以及多种成品疫苗中的残余牛血清蛋白含量进行了测定。结果显示,麻疹疫苗、风疹疫苗、腮腺炎疫苗洗涤前病毒培养液中牛血清白蛋白含量依次为IgG含量的70.5倍、65倍、84.3倍,洗涤后病毒收获液中两者比值分别为4.2、1.8和8.1;牛血清白蛋白ELISA法和牛血清蛋白ELISA法均能检测出疫苗中牛血清白蛋白,但前者测不出牛血清IgG,而后者可准确检测牛血清IgG。牛血清蛋白ELISA测定法可同时检测牛血清白蛋白和牛血清IgG,更适用于疫苗残余牛血清蛋白含量的测定。