荔枝果皮多酚氧化酶的研究

本文报告在荔枝果皮中有多酚氧化酶存在,但荔枝果皮提取液在经煮沸后仍有部分的氧化对苯二酚的活性。在 pH4.0—6.8范围内,酶活性以在 pH6.8中为最强。此酶对邻苯二酚及对苯二酚均起氧化作用,但不能氧化间苯二酚及一元酚(对-甲酚和酪氨酸)。故从基质特异性来看,荔枝果皮的多酚氧化酶与漆酶相类似。抑制剂如硫脲及二乙胺基二硫代甲酸钠对荔枝果皮多酚氧化酶具有特殊的作用。硫脲对白蜡子荔枝果皮多酚氧化酶只呈暂时的抑制作用,以后抑制作用逐渐消失并转为促进作用,抑制时间及促进程度随浓度而异。硫脲对淮枝荔枝果皮多酚氧化酶则不呈抑制而只呈促进作用。低浓度(0.2mu)的二乙胺基二硫代甲酸钠对荔枝果皮多酚氧化酶呈抑制作用,但高浓度(2,4mM)则有强烈的促进作用。     

新疆沙枣叶提取物对春尺蠖多酚氧化酶的抑制作用

多酚氧化酶在昆虫的变态发育和免疫防御中起着非常重要的作用,可作为害虫控制的一个重要作用靶标。采用40%饱和度硫酸铵沉淀和Sephadex G-100凝胶过滤等步骤,对产自于乌鲁木齐的春尺蠖幼虫多酚氧化酶进行分离,并研究其酶学性质。结果表明:多酚氧化酶的比酶活为617.21 U/mg,是粗酶液的6.06倍;该酶对焦性没食子酸、邻苯二酚和L-多巴的K_m值分别为6.45、1.11和1.3 mmol/L;在pH 6.5、25℃时,多酚氧化酶活性最高;当温度高于45℃时,随着保温时间的延长,酶活力下降明显。采用中压色谱和C18反相制备型色谱技术对尖果沙枣叶乙醇提取物进行分离,得到6个化合物,鉴定了其中2个化合物;将这2个化合物用于多酚氧化酶的抑制实验,结果表明分离到的化合物6和化合物7均显示出抑制活性,IC_(50)值约为0.125 mg/mL。     

菜青虫不同虫态及虫龄的多酚氧化酶性质比较

初步比较了菜青虫Pieris rapae (L.)不同虫态及虫龄的多酚氧化酶(polyphenol oxidase)的性质。结果表明,不同虫态及虫龄的多酚氧化酶活力有很大的不同,其中以5龄幼虫酶活力最高,蛹酶活力最低。酶活力大小依次为： 5龄幼虫> 预蛹>4龄幼虫>3龄幼虫>蛹。以邻苯二酚为底物,研究了pH对多酚氧化酶活力的影响,结果表明酶催化底物氧化均有一个最适pH区域,不同虫态及虫龄的多酚氧化酶最适pH基本相同,其值为7.0±0.2 。不同虫态及虫龄的多酚氧化酶催化底物氧化的最适温度有很大的差异。3龄、4龄、5龄幼虫、预蛹和蛹的多酚氧化酶活力的最适温度分别为36.0±0.5℃、38.5±1.0℃、43.0±1.0℃、45.5±1.0℃和50.0±1.5℃,说明蛹期的多酚氧化酶活力的最适温度较高。进一步比较催化底物氧化反应的活化能,测得3龄、4龄、5龄幼虫、预蛹和蛹的多酚氧化酶活化能分别为：4 3.10±0.28、36.50±0.27、25.79±0.32、30.10±0.21和58.88±0.39 kJ/mol 。通过测定不同虫态及虫龄的多酚氧化酶催化邻苯二酚和L-多巴氧化反应的动力学特征参数,比较了不同虫期的酶对底物的亲和力。     

尿黑酸氧化酶的多种分子形式

大白鼠肝脏尿黑酸氧化酶经丙酮,硫酸铵等步骤处理,再经过平板淀粉电泳的分离,此活力可以提高1000倍。利用平板淀粉电泳技术,由大白鼠肝脏中分离出三个具有尿黑酸氧化酶活力的酶蛋白。其中一个在电泳过程中移向正极,该部分酶制剂对反应系统中亚铁离子的要求比较严格,对尿黑酸的米氏常数等于1.4×10~(-3)M,高浓度底物有明显的抑制作用。第二个尿黑酸氧化酶亦趋向正极,但速度较慢,活力较低。第三个尿黑酸氧化酶的电泳位置接近负极端点,即使在没有任何辅因子参加的系统中亦具有一定水平的酶活力。后两个尿黑酸氧化酶对底物的米氏常数均为5.0×10~(-4)M,高浓度底物没有抑制现象发生。证明三个尿黑酸氧化酶催化同一个反应,而彼此的性质有区别,是一个具有多种分子形式的同工酶。本文对尿黑酸的自氧化以及影响自氧化的各种因子进行了分析讨论。     

有机酸对马铃薯多酚氧化酶活性的影响（简报）

苹果酸、柠檬酸、抗坏血酸和半胱氨酸中苹果酸-抗坏血酸混合物对马铃薯多酚氧化酶有显著的抑制作用。一定含量的有机酸是保持果蔬品质和防止酶促褐变的重要因素。     

烟草愈伤组织多酚氧化酶研究

柳叶烟草愈伤组织中多酚氧化酶氧化邻苯二酚的活性明显高于氧化对苯二酚的活性。当以邻苯二酚为底物时,烟草愈伤组织多酚氧化酶分别在pH 5.6和pH 7.4有两个活性高峰。KCN、Dieca和m-CLAM对烟草愈伤组织多酚氧化酶活性都有明显抑制效应。根据凝胶电泳分析,继代培养愈伤组织多酚氧化酶同工酶有5条酶带,而巳分化出芽原基的愈伤组织和新分化长出的小叶都有7—8条酶带。继代培养的愈伤组织多酚氧化酶主要存在于除去线粒体的上清液中,线粒体部分也可测出酶活性。继代培养愈伤组织在接种后18天内,多酚氧化酶活性无重大改变。在此期间,Dieca对呼吸的抑制效应也变化不大。分化组织多酚氧化酶活性显著高于继代培养愈伤组织,在芽原基形成后,酶活性明显升高;此时Dieca对呼吸的抑制也由32%上升到47%。     

烟草多酚氧化酶的分离与固定化技术研究

多酚氧化酶属于氧化还原酶类,国际酶学委员会推荐名为儿茶酚氧化酶（ＥＣ１．１０．３．１ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ,ＰＰＯ）．该酶与食品工业、三废处理、医药卫生关系较为密切,因而研究较多．如近年来鸭梨［１］、蘑菇［２］、香蕉果肉组织［３］、荔枝果皮［４］等等中的多酚氧化酶均有研究报道．目前研究用固定化多酚氧化酶检测废水中酚类物质含量,进行环境检测;及其从工业废水中除去酚类,达到治理三废的目的．Ｍｏｓｂａｃｎ［５］（１９７６）研制成多酚氧化酶固定化酶柱,与氧电极检测器组合联用,可检测水中２０…     

植物多酚氧化酶的研究进展

多酚氧化酶(polyphenol oxidase, PPO)是一类普遍存在于植物、真菌和昆虫质体中,由核基因编码, 能与铜相结合的金属蛋白酶。它能分别催化单酚羟基和二羟基酚氧化为O-二酚和O-醌。植物多酚氧化酶是许多果蔬等农产品酶促褐变的主要原因, 同时它在植物的光合作用、抗病虫害、生长发育以及花色的形成中起一定作用。本文综述了植物多酚氧化酶在细胞学、分子遗传学及其生产应用等方面的研究进展。     

植物多酚氧化酶的研究进展

多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)是一类普遍存在于植物、真菌和昆虫质体中,由核基因编码,能与铜相结合的金属蛋白酶.它能分别催化单酚羟基和二羟基酚氧化为O-二酚和O-醌.植物多酚氧化酶是许多果蔬等农产品酶促褐变的主要原因,同时它在植物的光合作用、抗病虫害、生长发育以及花色的形成中起一定作用.本文综述了植物多酚氧化酶在细胞学、分子遗传学及其生产应用等方面的研究进展.     

高寒灌丛生长季根际和非根际土壤多酚氧化酶和过氧化氢酶活性对增温的响应

研究青藏高原东部窄叶鲜卑花高寒灌丛生长季根际和非根际土壤多酚氧化酶和过氧化氢酶活性对增温(1.3 ℃)的响应,分析全球气候变暖对高寒灌丛根际土壤生态过程的影响.结果表明:生长季中期根际和非根际土壤多酚氧化酶活性显著高于生长季初期和末期;而土壤过氧化氢酶活性在非根际土壤中随生长季节逐步提高,在根际土壤中没有表现出明显的季节变化.在非根际土壤中,增温使生长季末期土壤多酚氧化酶活性和生长季中期土壤过氧化氢酶活性显著提高17.5%和2.2%,而在其他时期对2种土壤酶活性没有显著影响.而在根际土壤中,增温仅在生长季初期使土壤多酚氧化酶和过氧化氢酶活性显著提高6.5%和1.3%.在整个生长季,土壤多酚氧化酶活性均表现为正根际效应,土壤过氧化氢酶活性的根际效应不明显,而增温仅在生长季末期使土壤多酚氧化酶活性的根际效应显著降低15.2%.这表明,未来气候变暖背景下青藏高原东部高寒灌丛生态系统根际与非根际土壤多酚氧化酶和过氧化氢酶活性将发生不同的变化,进而影响高寒灌丛根际土壤生态过程.     

棘托竹荪子实体多酚氧化酶特性及其抑制剂的研究

以邻苯二酚为底物采用分光光度法对棘托竹荪(Dictyophora echinovolvata)子实体多酚氧化酶的酶学特性和不同抑制剂对多酚氧化酶活性的影响进行了研究。结果表明,棘托竹荪子实体多酚氧化酶的最适反应pH为8.0,最适反应温度为45℃,高温短时处理能显著抑制多酚氧化酶的活性;L-半胱氨酸(L-Cys)、氯化钠(NaCl)、维生素C(Vc)和柠檬酸(C6H8O7)等对多酚氧化酶均有抑制作用。经正交实验筛选的抑制剂组合(5.0 g/L L-Cys、20.0 g/L NaCl、1.5 g/L Vc、10.0 g/L C6H8O7)可以完全抑制多酚氧化酶的活性。     

香灰菌黑色素对真菌生长及多酚氧化酶活性的影响

以PDB培养的香灰菌丝体为材料,提取、纯化香灰菌黑色素,并测定香灰菌黑色素对六种真菌生长及对其胞外多酚氧化酶活性的影响.结果表明:香灰菌黑色素对六种真菌的生长没有抑制作用,而对其多酚氧化酶活力有明显的诱导作用.在不同的香灰菌黑色素浓度范围内,六种真菌胞外多酚氧化酶最大酶活的出现时间不同.     

刚竹叶提取物对斜纹夜蛾酚氧化酶抑制作用研究

采用酶标仪法测定了刚竹叶提取物对斜纹夜蛾酚氧化酶(PO)活性的影响。结果表明:6种不同溶剂(极性大小:去离子水乙醇丙酮乙酸乙酯氯仿石油醚)获得的竹叶提取物均对PO表现为抑制作用(三氯甲烷提取物在0-300 mg/L范围内,对PO表现为激活作用),且随提取物浓度的升高,抑制作用有逐渐增强的趋势。丙酮提取物对PO的抑制效果最显著(IC50为550 mg/L),其次为乙酸乙酯提取物和乙醇提取物(IC50分别为575 mg/L和700 mg/L);丙酮提取物对斜纹夜蛾酚氧化酶的抑制效果属于可逆过程,抑制类型为非竞争性抑制,抑制常数Ki为158.2 mg/L。     

多酚氧化酶抑制剂对蝴蝶兰叶外植体褐变的影响

将多酚氧化酶(PPO)抑制剂添加到酶反应液中,抗坏血酸和半胱氨酸在0.5mmol/L就完全抑制蝴蝶兰PPO活性。300mg/L柠檬酸和100~200mg/L亚硫酸氢钠分别添加到培养基中,可使蝴蝶兰外植体褐变程度降低;采用抑制剂浸泡处理外植体,对外植体褐变抑制效果最好的为50mg/L抗坏血酸,外植体在褐变发生前PPO活性低于对照。     

一种改进的烟草多酚氧化酶Ⅱ纯化方法

目的:选择不同的分离、纯化步骤并比对分析,筛选出纯化烟草中多酚氧化酶(PPO)的优化组合方案。方法:采用分段盐析、DEAE-SepharoseFastflow和SephadexG-150柱层析纯化PPO,通过测定和比较酶活性筛选最佳条件。结果:确定了最佳盐析浓度(40%)和柱层析条件,SDS-PAGE、FPLC以及动力学常数的检测结果表明,纯化出的蛋白质相对分子质量为42000,Km为1.2mmol/L,得到了纯化91倍的烟草多酚氧化酶Ⅱ。结论:优化方案减少了有机溶剂分级沉淀、阳离子交换层析等步骤,使纯化过程大大缩短。     

丹参多酚氧化酶基因的克隆及表达分析

前期研究发现多酚氧化酶(PPO)能正向调控丹酚酸B合成,该研究运用RACE技术,从丹参毛状根中克隆到多酚氧化酶基因(SmPPO,GenBank登录号为KF712274)全长序列,其cDNA全长1 930bp,开放阅读框为1 770bp,编码589个氨基酸。将SmPPO与管状花目其它4个物种进行氨基酸序列比对,在N端类囊体转移结构域中发现都存在2个N-豆蔻酰化位点。在丹参毛状根培养液中加入不同诱导因子,利用实时荧光定量PCR检测,发现该基因在酵母提取物处理中表达量显著上调,但在银离子、抗坏血酸和L-半胱氨酸处理中表达受到明显抑制。运用HPLC技术同步检测毛状根中丹酚酸B含量,显示出与基因表达相同的变化趋势。研究表明,丹参中多酚氧化酶基因(SmPPO)对丹酚酸B的合成具有正向调控作用。     

不同条件下荔枝多酚氧化酶活性的分析(英)

经硫酸铵盐析和ＳｅｐｈａｄｅｓＧ－１００,Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析分别纯化后,得到了电泳均一的荔枝多酚氧化酶,荔枝多酚氧化酶在ＳＤＳ和ＣＡＴＢ存在下测得的酶活性略有降低,但在ＴｒｉｔｏｎＸ－１００下活性有所增加,丁酸等短链的脂肪酸对酶活性起抑制作用,而亚油酸等长链的不饱和脂肪酸则起促进作用,另外,荔枝多酚氧化酶活性还明显受ＦｅＳＯ４和ＳｎＣｌ２所抑制,但能补Ｃａ     

响应面优化丙酮粉法提取金银花多酚氧化酶

对丙酮粉法提取金银花多酚氧化酶的工艺进行研究,结果表明,缓冲液p H、料液比、提取时间对PPO比活力影响显著。缓冲液p H与料液比交互作用极其显著,回归模型拟合性良好(R2=99.31%);影响显著顺序为:静置时间缓冲液p H值料液比;最优化工艺参数为:缓冲液p H7.5,料液比为1∶120,提取时间为14.5 min。在此条件下,酶比活力为137.389 U/mg。     

氯仿中毒对大鼠肝脏酪氨酸氧化酶系的影响

氯仿中毒动物肝內酪氨酸氧化酶系活力高于正?哉斩锏乃健B确麓矸亲ㄒ恍缘匾鹈富盍Φ恼T导升高。中毒动物对底物誘导沒有反应。預先注射維生素B_(12)的中毒动物肝脏丙酮粉提取液氧化酪氨酸的能力降低,单独注射B_(12)亦导致同样的結果,但不甚明显。綜合預先注射甲硫氨酸的实驗結果,指出氯仿中毒和四氯化碳中毒引起肝脏損伤的机制各有不同。以2,6-二氯酚靛酚代替反应系統中的抗坏血酸分析完整酪氨酸氧化酶系的誘导生成,长期注射甲硫氨酸使上述酶系活力提高。长期注射維生素B_(12)对底物誘导有刺激作用。     

猕猴桃中的多酚氧化酶

近年来,弥猴桃(Actinidia chinensis Planch)在澳大利亚,意大利,日本,新西兰和美国发展很快。但是,有25％的弥猴桃因个头和形状等原因不能作为鲜果出售,只能加工为其它产品。氧化酶会催化两种反应,甲酚酶会催化一元酚的氧化,如酪氨酸与0—甲酚,结果,在原位置上形成一个羟基群。过去,关于弥猴挑中的多酚氧化酶特性无文献报导。美国科研人员注意到,在氧化环境里,弥猴桃产品由于酶的作用而变为褐色。他们对此进行研究,以