γ-多聚谷氨酸的生物合成及其相关基因

综述了γ 多聚谷氨酸 (γ PGA)的研究进展。γ PGA是一种高分子可降解生物材料 ,目前 ,高产菌株的产量为 5 4 45～ 5 8 0 8g L ,多用E 培养基 ,发酵温度为 37℃ ,影响产率的因素为碳源、NaCl浓度、通气量和金属离子。用超滤和乙醇沉淀的方法提取分离纯化γ PGA。讨论了γ PGA生物合成机制及其相关基因的克隆、定位和功能。最后简述了γ PGA的应用与展望。     

发酵法生产γ-亚麻酸的研究进展

γ-亚麻酸是一种人体必需的多不饱和脂肪酸,具有多种重要的生理功能。最初γ-亚麻酸主要来源于植物种子油,如黑醋栗、月见草和琉璃苣等的种子油。但是从植物中提取γ-亚麻酸受到诸多因素的限制,远不能满足市场需求,采用微生物发酵法生产γ-亚麻酸具有广阔的应用前景。本文综述了目前发酵生产γ-亚麻酸的菌株,对其代谢途径进行了分析,重点总结了国内外有关菌种选育及发酵调控方面的研究,并探讨了今后的研究方向。     

转基因高γ-亚麻酸大豆油抗肿瘤作用的研究

γ-亚麻酸(GLA)是人体和动物饮食中具有营养作用的重要的多烯不饱和脂肪酸,在大多数油料作物种子中不含有GLA,而含有其前体物亚油酸。△⁶-脂肪酸脱氢酶可将亚油酸转化为γ-亚麻酸,为了能够在传统的油料作物大豆中产生GLA,将从深黄被孢霉中克隆的△⁶-脂肪酸脱氢酶基因,与植物表达载体pBIl21连接,构建了重组质粒pBIM16,采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统,成功地将该基因导入到栽培大豆吉林47品种中,获得一批转基因植株。经PCR检测和Southern杂交分析,证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组中。通过气相色谱(GC)对大豆种子进行脂肪酸成分分析,结果表明,产生了GLA,其含量最高可达36．585％。将高GLA的转基因大豆油口服给药,结果表明,其对小鼠S180肉瘤、肝癌H22和Ehrlich癌实体型的抑瘤率分别为32．63％、31．91％和34．34％。其肿瘤抑制率均>30％,与对照组比较有显著差异(p<0．01),表现初步的抗肿瘤作用。     

一种α-环糊精葡萄糖基转移酶的纯化及性质研究

本文报道了一种主要转化产物是α-环糊精的环糊精葡萄糖基转移酶的纯化、酶学性质和转化特性。将发酵上清液通过硫酸铵分级沉淀、疏水柱层析和离子交换层析获得表观电泳纯的酶蛋白。纯酶的分子量约为75KDa,等电点5.3。最适反应温度为50℃,最适反应pH为6。对可溶性淀粉的Km值和Vmax分别是50mg/ml和6.07 mg/ml/min。色氨酸残基为酶活力的必需基团。酶的N末端序列为-SPDTSVDNKV-。Ca2+、Zn2+、Fe3+、Cu2+、Fe2+、Ag+对酶活力有强烈抑制作用。纯酶催化转化条件试验表明,廉价的马铃薯淀粉是酶催化制备α-CD的适宜底物,最佳转化条件为：酶量200u/g淀粉,温度40℃,反应时间24h,总转化率达41%,其中α-环糊精占总转化产物的78%。因此,该酶不仅表现出特殊的酶学特性,而且有较好的产业化开发前景。     

蓖麻蚕γ-谷氨酰转肽酶的研究

L-γ-谷氨酰转肽酶(γ-GTP)广泛分布在蓖麻蚕Philosamia cynthia ricinI的中肠、马氏管、后丝腺、脂肪体、体壁等组织中;并存在于蚕个体发育中的各个阶段。酶活力以马氏管、中肠为最大。在五龄蚕前中期各组织均显示γ-GTP最大活力。在脂肪体和表皮组织中,蛹形成时又分别出现γ-GTP活力峰。昆虫生长发育必需的10种氨基酸均是蚕各组织γ-GTP酶促反应的受体。这些结果表明,γ-GTP作为L-γ-谷氨酰循环中一个关键酶,在蓖麻蚕体内对氨基酸的吸收和转运起着重要作用。     

富γ-氨基丁酸（GABA）金川发芽红糙米制备工艺研究

γ-氨基丁酸（GABA）是一种天然存在非蛋白质的氨基酸,具有多种特殊的生理功能,在发芽糙米中含量较高。本实验以金川红糙米为原料,以GABA含量为研究对象,通过正交实验得到富集GABA的最佳红糙米发芽工艺条件为：浸泡温度为25 ℃,浸泡时间2 h,发芽时间为48 h,发芽温度40 ℃,CaCl2溶液浓度为1 mg/ml,纤维素酶溶液浓度为0.64 mg/ml,谷氨酸溶液浓度为1.5 mmol/L。此时GABA含量可达到46.3436 mg/100 g,其结果约为发芽前的2倍。     

一种检测新型生物高分子材料聚γ-谷氨酸的新方法

通过聚γ-谷氨酸（γ-PGA）与氯化十六烷基吡啶（CPC）的乙酸钠水溶液反应形成混悬液,采用分光光度计于波长680nm处比浊,研究γ-PGA浓度与吸收度之间的线性关系,并研究本方法测定γ-PGA的稳定性、重现性和回收率。在一定pH值和离子强度下,γ-PGA在12.5~50μg/ml范围内与CPC的乙酸钠水溶液生成的混悬液在波长680nm处的吸收度与其浓度呈线性关系,R2=0.9939.本方法在2h内吸收度保持稳定(RSD=0.154%,n=10 ),CPC法测定浓度为5,10和 40μg/ml时的平均回收率分别为86%,77%和99.75%,RSD分别为0.14%,0.23%和0.025%应用比浊法测定γ-PGA的含量方便、简洁、重现性好,可用于γ-PGA浓度的检测。     

冬虫夏草固态培养菌丝中纤溶酶的纯化和酶学性质

【背景】血栓性疾病发病率逐年递增,发病人群呈现低龄化趋势,严重地影响着人们的身心健康。因此研发高效、安全、特异性强的溶栓药物具有重要的意义,是血栓性疾病预防与治疗研究领域的热点。【目的】对冬虫夏草菌丝固态培养过程中产生的纤溶酶进行分离纯化,并对纯化的纤溶酶进行酶学性质分析。【方法】通过硫酸铵盐析、阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶过滤色谱分离纯化虫草纤溶酶。采用Bradford法测定样品中总蛋白质浓度,纤维蛋白平板法测定纤溶酶活性,Native-PAGE检测纯度,SDS-PAGE测定相对分子量。【结果】在固态培养中冬虫夏草菌丝可以产生至少两种纤溶酶,分别命名为OSP-1和OSP-2。纯化后OSP-1比活力达到4186.25U/mg,纯化倍数为41.69倍。OSP-1由两个亚基构成,相对分子量分别为27.60k D和23.83k D,是一种丝氨蛋白酶。酶学性质分析表明,该酶最适作用温度为40°C,最适pH为4.0。Cu2+可促进OSP-1酶活,而Zn2+会抑制酶活。除了具有较高的纤溶酶活性,OSP-1还可发挥激活纤维蛋白酶原的作用。在水解纤维蛋白原的过程中,该酶可依次降解γ、Aα、Bβ链。【结论】研究发现的OSP-1具有开发成新型溶栓药物的潜力。     

人类食管癌γ-谷氨酰转肽酶性质的研究

 从人类食管癌组织、正常食管粘膜、以及正常肾脏组织部分提纯γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT),分析比较其生物化学及免疫化学性质,结果如下:(1)人类正常食管粘膜癌变后,γ-GT活性升高。(2)食管癌γ-GT的酶动力学性质(Km及最适pH)与正常组织相同。(3)4—20％线性梯度PAGE分析,食管癌γ-GT呈现100kD左右及380kD左右两个分子群,前者活性较高。正常食管粘膜γ-GT中,缺少100kD左右分子群,此分子群可能在癌变中有重要意义。(4)食管癌组织γ-GT,与正常组织γ-GT的抗原性相同。(5)食管癌γ-GT富含D-甘露糖、D-葡萄糖及N-乙酰-氨基葡萄糖,分子中的糖结构高度不均一,其与100kD左右分子群的关系,值得深入研究。     

人工培养冬虫夏草研究

冬虫夏草 [Cordycepssinensis (Berk .)Sacc .]是名贵中药和珍稀滋补品 ,是由其无性型中国被毛孢 (Hir sutellasinensisX .J .Liu ,Y .L .Guo ,Y .X .Yu&W .Zeng)侵染蝠蛾属 (Hepialusspp .)幼虫形成的菌虫复合体 ,分布在我国青海、西藏、四川、云南和甘肃等地的海拨 35 0 0～ 5 0 0 0m高寒灌丛草甸。自 1980年至今持续进行冬虫夏草的人工培养研究 ,分离获得了冬虫夏草的无性型菌株 ,经鉴定为中国被毛孢新种 ,并对其进行了一系列培养试验 :在培养基上能产生子座 ;低海拔环境下规模化室内饲养寄主昆虫成功 ,人工条件下 1年可完成寄主昆虫一个生活周期 ,且幼虫个体大 ;室内人工培养冬虫夏草取得成功。     

冬虫夏草活性成分研究进展

本文系统综述了冬虫夏草Cordyceps sinensis的主要化学组成和药理学作用研究进展,重点对冬虫夏草多糖、核苷、肽类和甾醇的研究成果进行了总结,同时也针对有关冬虫夏草的一些问题进行了客观评述,为深入研究其有效成分与虫草相关新药物研发提供了依据和思路.     

冬虫夏草及人工虫草菌丝体的氨基酸营养

本文研究了天然虫草菌与人工虫草菌的氨基酸含量。结果表明,天然虫草菌、人工虫草菌的总氨基酸含量稍有差异,但中性、酸性、碱性氨基酸和必需氨基酸在总氨基酸中所占百分比的高低基本一致。     

人工培殖冬虫夏草D-甘露醇的含量测定

采用水提回流离心的方法,提取分离人工培殖冬虫夏草中D-甘露醇,用高碘酸钠与甘露醇反应产生黄色的3,5-二乙酰-1,4-脱氢二甲基吡啶,在波长412 nm处测定其最大吸收.甘露醇浓度在10～50 mg/L之间时,与吸光值(OD412)有良好线性关系,线性方程为C=79.172x-0.0713,相关系数r=0.9999.人工培殖冬虫夏草中D-甘露醇的含量分别为89.64 mg/g(2005年)、91.86 mg/g(2006年)、94.71 mg/g(2007年)、98.98 mg/g(2008年)、97.50 mg/g(2009年)、94.71 mg/g(野生)和96.84 mg/g(野生).人工培殖冬虫夏草与野生冬虫夏草D-甘露醇的含量基本相同.     

冬虫夏草无性型—中国被毛孢固态发酵条件的初步研究

采用以麦角甾醇含量为指标间接测定固态发酵产物生物量的方法,对冬虫夏草无性型—中国被毛孢的固态发酵条件进行了研究。正交试验结果表明固态发酵最佳培养基组成为：大米5g,玉米粉2g,蚕蛹粉1g,麸皮2g;单因素试验结果表明：当培养温度20℃、料水比1：1.5、料层厚度2cm、无光照时对菌体生长较为有利。发酵条件优化后,菌丝体中麦角甾醇的含量可达0.5911mg/g,比优化前提高了38.6%。     

冬虫夏草分子遗传的研究进展

冬虫夏草是一种名贵的药用真菌,由于其多功能的药用价值而成为各国研究的热点。本文对冬虫夏草遗传多样性、冬虫夏草系统发生、冬虫夏草的酶和文库的研究做了综述,并对冬虫夏草的研究做了展望。     

冬虫夏草的研究进展

冬虫夏草是著名的传统中药,具有多种药用功效。综述了近几年国内外冬虫夏草在无性型的确证、液体发酵、活性成分分离分析、药理学等方面的研究进展。     

冬虫夏草菌药理功能研究进展

名贵药用菌冬虫夏草有十分广泛的药理活性 ,可用于高血糖、高血脂、呼吸系统疾病和肾衰的治疗。近来的研究显示冬虫夏草可用于自体免疫系统疾病和癌症的治疗。冬虫夏草的研究正在迅速取得许多新进展。     

亚香棒虫草菌丝体金属硫蛋白的提纯及性质

【目的】探讨锌离子诱导亚香棒虫草(Cordyceps hawkesii)菌丝体金属硫蛋白的产生及性质。【方法】亚香棒虫草菌丝体以18 g/L Zn2+在10 L发酵罐中诱导培养64 h后收集菌丝体,产率为每升发酵液收集12.2 g菌丝体(干重),细胞破碎取上清液通过2次凝胶柱层析,冷冻干燥得到亚香棒虫草菌丝体金属硫蛋白纯品。利用考马斯亮蓝法(Bradford法)进行含量测定,用银饱和分析法结合原子吸收光谱(AAS)测定MT含量,用Ellman’s方法和火焰原子吸收法分别测得巯基含量和结合锌原子数,用电喷雾质谱仪测得分子量,全自动氨基酸分析仪测氨基酸组成。通过对羟基自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除率试验探讨亚香棒虫草金属硫蛋白的抗氧化活性。【结果】发酵终点金属硫蛋白产量为15.3 mg/g菌丝体湿重。金属硫蛋白的分子量为7 680 Da,每分子蛋白质含有18个巯基、结合4个Zn原子。氨基酸组成分析结果显示,每分子蛋白质共含60个氨基酸,其中含有15个半胱氨酸,且含有组氨酸和芳香族氨基酸。亚香棒虫草金属硫蛋白的抗氧化活性稍强于谷胱甘肽,弱于动物金属硫蛋白。【结论】亚香棒虫草在Zn2+胁迫下能够大量合成金属硫蛋白,且其金属硫蛋白的性质与哺乳动物金属硫蛋白有相似性。