霍乱肠毒素B亚单位在转基因番茄中表达的研究

将霍乱肠毒素B亚单位（CT－B）基因及内质网引导序列（SEKDEL）克隆到质粒pRTL2和pBI121中,分别构建植物双元表达载体pBI-CTB和pBI-CTBK,CT-B基因由Ca35S启动子控制表达。采用叶盘法经根癌农杆菌介导转化番茄（金丰1号,Jinfeng1)各表达载体得到一批转基因植株。经PCR和Southern blot分析表明CT－B基因整合到了番茄基因组中;ELISA和Western blot分析表明pBI-CTB和pBI-CTBK的转基因植株能够有效表达CT－B多肽,分别占番茄叶片可溶性蛋白的0.055%和0.084%。     

含霍乱肠毒素B亚单位基因植物表达载体的构建

构建含CTB基因的植物双元表达载体,采用高保真PCR方法调出CTB基因,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到含植物表达调控原件的载体上,采用冻融法和电击法,将含CTB的植物表达载体转入根癌农杆菌中,通过一系列分子克隆的方法获得含CTB基因的植物双元表达载体pBI-CTB和pBI-CTBK,并经酶切证实。     

植物基因的特异表达与调控

许多基因的表达调节是在转录水平上进行的。基因特异表达的顺式和反式作用因子的研究为探讨基因表达调节机制积累了必要的资料,对基因表达精细的细胞定位具有重要的理论意义和应用意义。     

霍乱毒素B亚基基因上游序列对B亚基表达水平的影响

本研究通过缺失突变和移码突变研究了ｃｔｘ Ｂ基因上游Ａ基因部分序列对ｃｔｘＢ表达水平的影响,结果表明：（１）将霍乱毒素操纵子ＸｂａＩ－ＥｃｏＲｉ片段克隆至ｐＵＣ１９,构建的质粒ｐＵＣ１９ＣＴＢ中Ａ亚基的部分序列不能翻译,该质粒转化大肠菌后的ＣＴＢ的表达产量为３０μｇ／μｌ;（２）在质粒ｐＵＣ１９ＣＴＢ的ＸｂａＩ位点引入移码突变,构建质粒ｐＭＣ０２Ｃ,使Ａ亚基基因部分序列能够翻译至自然的终止密码,Ｂ     

AB5肠毒素A、B亚基比例表达调控机理的研究

霍乱毒素（ＣＴ）及大肠杆菌势不稳定甩的毒素（ＬＴ）的Ｂ亚基基因的表达水平是Ａ亚基的５￣７倍,研究发现Ａ基因内部存在着１个８０ｂｐ长的翻译控区,含有３个翻译起始序列（ＴＩＲ）,其第２个翻译起始序列的终止密码与第３个翻译起始序列的起始序列的起始密码重叠,因而形成翻译偶联,继续翻译至Ａ基因的终止密码。将ＴＩＲ３的超始密码ＡＴＧ突变为ＡＴＣ后ＴＩＲ２及ＴＩＲ３失去功能,这时下游报告基因（类似于ｃｔｘＡ、Ｂ     

高等植物叶绿体基因的表达与调控

高等植物叶绿体基因的表达不仅在转录、转录后及转译等不同水平上受到多层次的调控,而且还因发育阶段、环境因素（尤其是光）等的不同而有所差别。除此之外,核基因组与质体基因组之间还存在着广泛的信息交流,它们相互作用、彼此影响,从而实现协同表达。本文仅就这些方面的研究进展作一简要的评述。     

含霍乱肠毒素B亚单位基因植物表达载体的构建策略

采用高保真PCR方法调出CTB基因,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到含植物表达调控原件的载体上,采用冻融法和电击法,将含CTB的植物表达载体转入根癌农杆菌中,通过一系列分子克隆的方法获得含CTB基因的植物及元素达载体pBI-CTB和pBI-CTBK,并经酶切证实,为下一步的植物转基因研究打下坚实的基础。     

霍乱毒素B亚单位基因（CtxB）的克隆及其表达

从霍乱弧菌中抽提基因组ＤＮＡ,用ＰＣＥＲ方法获取霍乱毒素Ｂ亚单位基因（ＣｔｘＢ）。序列分析结果表明,ＣｔｘＢ基因编码１２４个氨基酸,其中编码６２位Ｔｈｒ的密码子与文献报道有差异。将ＣｔｘＢ基因插入质粒ｐＧＥＸ－４Ｔ－２,构建ｐＧＥＸ－ＣＴＸＢ表达质粒,转化大肠相菌ＢＬ２１（ＤＥ３０,筛选表达菌株ＣＴＸＢ／ＢＬ２１。工程株经ＩＰＴＧ诱导表达,可产生大量的表达蛋白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,融合蛋白分子     

霍乱毒素A基因内部翻译调控元件具有翻译起始功能

通过大肠杆菌体外转录－体外翻译系统,证明霍乱毒素Ａ基因内部的翻译调控元件具有翻译起始功能,且其翻译起始效率较ｃｔｘＡ基因高得多,当ｃｔｘＡ的起始密码突变时,从该元件起始的翻译效率下降,说明基因内翻译起以ｃｔｘＡ翻译起始的调控。结果进一步证实了霍乱毒素Ａ、Ｂ亚工比例表达调控的翻译弱化－翻译偶联机理。     

神经肽Y的基因及其表达调控

神经肽酷氨酸是一种含３６个氨基酸残基的生物活性多肽,在体内具有收缩血管,影响激素分泌,调节生物节律及摄食行为等多种生物学功能。本从ＮＰＹ ｃＤＮＡ克隆,基因结构与功能关系以及多种因素对其基因表达的调节等方面作一综述。     

大肠杆菌热稳定肠毒素表位与霍乱毒素B亚单位的重组与表达

霍乱毒素B亚单位(CTB)是半抗原的良好载体,选择CTB基因的翻译调控元件,实现了串联重复的突变型大肠杆菌热稳定肠毒素(ST)表位与CTB的重组,在大肠杆菌中高效分泌表达,经过亲和层析获得了高纯度的重组蛋白,ELISA表明重组蛋白仍保留与神经节苷脂GMl的结合能力和CTB的免疫原性。     

成簇基因的时空表达调控

成簇基因具有不同单个基因的特性,同一簇内基因大多有类似的结构,功能以及表达模式,基因之间时空表达模式及表达量高度协调,提示同一簇基因是作为统一整体进行调节的,具有共同的调节机制。基因成簇排列是实现基因时空协调表表达的基础,是遗传信息的一种高级组织形式,具有强大的进化优势,要揭示成簇基因表达调控的基本规律,应从顺式作用元件,反式作用因子,染色质等层次,进行整体的以及多基因相互作用的研究,这些机制的阐     

植物伸展蛋白的基因及其表达的调控

植物细胞壁中存在多种伸展蛋白。它们由伸展蛋白多基因族编码。调节伸展蛋白基因表达的因素有遗传密码使用的倾向性、发育程序、机械损伤、乙烯、病原和植物抗毒素诱导剂等。     

CD59的基因结构与表达调控

ＣＤ５９基因含５个外显子,属于ＵＰＡＲ／Ｌｙ－６超家族成员。该家族基因结构保守,但它们表达蛋白质具有广泛的生物学功能,ＣＤ５９分子有组成性和诱导性表达两种表达方式,顺式作用元件及反式作用蛋白质协调作用决定着基因表达的特生。     

E—选择素基因结构功能,表达调控和构效关系

Ｅ－选择素分子为粘附分子选择素家族成员之一,其基因全长约１３ｋｂ由１４外显子和１３内含子组成,定位于人１员染色体ｑ１２〉ｑｔｅｒ区,基因及分子结构表现出多态性,表达受ＮＦ－кＢ等正调控因子和ＡＴＦａＯ等负调控因子的调控,分子内不同结构域对Ｅ－选择素粘附功能的影响有等进一步阐明。