利用组织和细胞培养筛选作物耐盐突变体的研究

利用组织和细胞培养筛选作物耐盐突变体的研究王仑山王鸣刚王亚馥（兰州大学生物系,兰州７３００００）ＴＨＥＳＥＬＥＣＴＩＯＮＯＦＮａＣｌ┐ＴＯＬＥＲＡＮＴＭＵＴＡＮＴＳＢＹＴＩＳＳＵＥＡＮＤＣＥＬＬＣＵＬＴＵＲＥＩＮＰＬＡＮＴＷａｎｇＬｕｎ－ｓｈａｎＷ...     

利用组织培养研究植物耐盐机理与筛选耐盐突变体的进展

概要介绍近年来利用组织培养研究植物耐盐的机理,培养的细胞与整株植物之间耐盐的相关性,列举国内外从17种植物筛选出的耐盐细胞系及其再生植株的研究结果,讨论了选择细胞的耐盐性在再生植株表达的问题,并展望这项研究工作的前景。     

拟南芥耐盐突变体stg2的筛选

采取在高盐平板上萌发的方法,对一个雌激素诱导激活型拟南芥突变体库进行了耐盐突变体的筛选,最终得到了2株稳定的耐盐突变体。本文中对其中的一株耐盐突变体,命名为stg2(salt tolerance during germination 2),进行了研究。遗传实验表明它的耐盐特性是受雌激素诱导的,是功能获得型的耐盐突变体。本实验中还探讨了stg2突变体的筛选过程及耐盐生理特点。     

枸杞耐盐突变体的筛选及生理生化分析

用不同剂量60Coγ对以枸杞叶为外植体诱导出的愈伤组织进行辐射处理,并将恢复增殖的愈伤组织采用逐步提高盐浓度的方法,直到筛选出耐1%的愈伤组织变异体,通过对其生理生化的分析表明:变异体在不同盐浓度胁迫下干、鲜重增长均高于对照组;MDA含量和质膜透性、O-·2与H2O2含量都低于对照组;抗氧化酶SOD、POD、CAT活性均高于对照组;对可溶性蛋白SDS电泳结果表明:耐盐变异体有22条蛋白带,而对照组有21条蛋白带,其中31.3kD、21.0kD、18.5kD带为耐盐变异体所特有,而74.1kD、52.1kD带为对照组所特有,并且73.7kD、67.9kD的蛋白耐盐变异体含量高于对照组.     

园艺植物耐盐细胞突变体的筛选和鉴定

本文介绍了园艺植物耐盐细胞突变体获得途径及其耐盐性鉴定的研究进展。     

耐盐突变体小麦后代耐盐稳定性分析研究

以卫星搭载小麦种子为原始材料,利用其幼穗、幼胚诱导的愈伤组织进行耐盐突变体的筛选,对耐盐愈伤组织再生植株后代进行耐盐稳定性生理生化特性分析。结果表明：(1)耐盐系后代在土壤高盐浓度条件下,游离脯氨酸含量稳定增加,且高于对照系;(2)耐盐系再生植株后代保持较高的K^ ／Na^ 比;(3)与对照相比,种子醇溶蛋白电泳带谱中的b2,b3,b5,b7带为耐盐系所特有,b8带消失;(4)耐盐系再生植株后代可溶蛋白电泳带为26条,而对照系为23条蛋白带。其中98kD、75kD、52kD、49kD和32kD为耐盐系的特有蛋白带。而38kD和35kD蛋白带为对照系所特有。     

‘巴斗’杏再生体系的建立与耐盐突变体的筛选

以‘巴斗’杏试管苗茎段为外植体,研究其再生体系的建立以及在含不同浓度NaCl培养基上诱导耐盐愈伤组织,筛选耐盐突变体。结果显示：茎段在MS＋6-BA1．5mg·L^-1＋IBA0．5mg·L^-1培养基上诱导愈伤组织效果最好,芽的分化率可达88％;将出芽愈伤组织块接种到附加IBA0．5mg·L^-1＋KT2．0mg·L^-1的MS分化培养基上效果最佳,芽的分化系数最高为12．7;较理想的生根培养基为MS＋NAA0．1mg·L^-1。＋IBA0．2mg·L^-1,生根率在46．3％以上;在含0．8％NaCl的愈伤组织诱导培养基中,连续继代筛选2代,转入不含NaCl的分化培养基中,分化出了完整植株。经继代培养筛选,测定发现获得的耐盐植株比正常培养植株的游离脯氨酸含量高。     

小麦耐盐突变体的分子生物学鉴定

利用Ｆ１花药培养、ＥＭＳ诱变和耐盐性反复筛选后已稳定９ 代的小麦耐盐突变体ＲＨ８７０６－ ４９、Ｈ８７０６－ ３４、Ｈ８７０６－ ４４、Ｈ８７０６－ ４８、Ｈ８７０６－ ５７ 及其亲本濮农３６６５、百农３０３９ 为材料,用生化标记（醇溶蛋白）及分子标记（ＲＡＰＤ）分析了各材料间的差异,发现突变体与亲本相比,不仅发生了蛋白质水平的变异,而且也在ＤＮＡ 水平上证明了突变的发生,从而为耐盐突变体的真实性提供了有力的证据,排除了盐适应的可能性; 经用２１８ 个引物对５ 个突变体之间的多态性进行ＲＡＰＤ分析,结果表明,它们之间的差异很小,其遗传背景相似,因而它们是一系列耐盐性不同的近似等位基因系     

小麦耐盐突变体的RAPD分析

以冀麦２４和其耐盐的一代８９０１－１７为材料,用ＲＡＰＤ技术对其进行比较分析研究。在的用的２１５个引物中有５１个扩增出多态性,既有量的差异又有质的差异,初步断定此５１个引物扩增出的多态性与突变有关,为进一步用ＢＳＡ方法细筛出与耐盐突变体紧密连锁的ＲＡＰＤ分子标记下打下基础,同时,还分析了影响ＲＡＰＤ扩增结果的因素。     

小麦耐盐突变体的分子生物学鉴定

利用F1花药培养、EMS诱变和耐盐性反复筛选后已稳定9代的小麦耐盐突变体RH8706-49、H8706-34、H8706-44、H8706-48、H8706-57及其亲本濮农3665、百农3039为材料,用生化标记（醇溶蛋白）及分子标记（RAPD）分析了各材料间的差异,发现突变体与亲本相比,不仅发生了蛋白质水平的变异,而且也在DNA水平上证明了突变的发生,从而为耐盐突变体的真实性提供了有力的证据,排除了盐适应的可能性; 经用218 个引物对5个突变体之间的多态性进行RAPD分析,结果表明,它们之间的差异很小,其遗传背景相似,因而它们是一系列耐盐性不同的近似等位基因系。 Abstract:　In this paper, 5 wheat salt tolerant mutants（H8706-34、H8706-44、H8706-48、RH8706-49、H8706-57）derived from anther culture、EMS induction and salt tolerance selection and their parents （Punong3665、Bainong3039）were used as materials, all the mutants have inherited stably for 9 generations. Differences were revealed between the mutants and their parents using chemical marker（gliadin）and molecular marker（RAPD）, the results showed that compared with the parents, the mutants varied not only on the protein level,but also on the DNA level,which supplied hard evidence of the truth of the mutants and ruled out the possibility of salt adaptation. RAPD analysis were conducted among the 5 mutants by 218 primers,which proved they were a series of near isogenic lines of different salt tolerance because of their little difference and similar genetic background.     

植物组织与细胞培养研究工作的进展及其应用

前言近年来植物组织与细胞培养的研究飞跃发展,它不但引起了国内外多种学科工作者的兴趣和重视,对生产上的作用也日益明显。有关这方面的论著甚多,本文不拟对此领域做全面的综述,只是对其发展概况及研究的主要问题择要予以介绍并谈一些个人的看法,自然有不全面和片面之处,欢迎读者提出意见和批评指正。     

拟南芥低盐敏感突变体的筛选

通过对ein3-1功能缺失型突变体种子进行EMS诱变,筛选到47株盐敏感突变体。根据对盐敏感程度的不同将其分为3类,分别为低盐超敏感突变体(low concentration of salt hyper-sensitive mutants,lsh),低盐中等敏感突变体(low con-centration of salt moderate-sensitive mutants,lsm)和低盐弱敏感突变体(lowconcentration of salt slight-sensitive mutants,lss)。以其中一株lss-3为例,进行了深入研究。根据遗传分析和生理试验表明,lss-3是以ein3-1为背景的隐性双突变体,而且具有比Col-0和ein3-1更加敏感的盐表型。三重反应表明,lss-3与ein3-1类似,表现出对ACC不敏感的表型。推测lss-3突变的基因可能与乙烯信号途径组分EIN3有关,也可能与之无关,仅是参与抗盐的一个新基因。     

人参组织与细胞培养研究的进展

人参组织培养自本世纪60年代初开展以来,吸引了越来越多的研究工作者投身于这一研究领域。究其原因,主要有两条:其一是人参作为一种极其珍贵的药用植物,有着巨大的经济效益;其二是人参自然生长缓慢,发育期长达5—7年,而且对生长环境条件要求严格,这给培育新品种和大量生产带来了困难。为此,人们把目光转向了组织培养,希望能通过细     

通过花药培养筛选水稻耐镉突变体

通过花药培养筛选出三个水稻耐镉突变体并都获得再生植株。再生植株及由根尖诱导产生的愈伤组织都保持稳定的耐镉性。突变植株的花药经再培养鉴定也具有耐镉性,从而表明所获突变体的耐镉特性是可以遗传的。在对愈伤组织耐镉机理进行的分析中发现,突变体愈伤组织中的胱氨酸和半胱氨酸的含量高于对照。将一定量的胱氨酸加到含镉的培养基中用于检查野生型愈伤组织的增殖情况,观察到胱氨酸可以降低镉对细胞的危害,表明突变体耐镉机理可能与细胞中积累有较多的胱氨酸和半胱氨酸有关。     

小麦耐盐突变体盐胁迫下的蛋白质组分析

首次采用双向电泳的方法分析1％NaCl胁迫72h的一对小麦耐盐(RH8706-49)及敏盐突变体(H8706-34)的蛋白质组。经过MALDI-TOF分析和数据库检索发现两者在H^ -ATP酶β亚基、谷氨酰胺合成酶前体、OEC33和RuBP羧化酶小亚基等5个候选蛋白存在质或量的差异。这5种蛋白均为叶绿体蛋白,它们很可能在盐胁迫下对维持叶绿体及整个细胞的功能起到重要作用。     

常夏石竹耐盐突变体渗透调节的研究

在离体培养条件下利用γ-射线作诱变剂获得耐0.5%、0.7%、1.0%NaCl的突变系,通过对稳定突变系植株叶片渗透剂含量及对渗透势贡献大小的测定表明耐盐突变体叶中K+、游离氨基酸、Na+、脯氨酸的含量高于对照,其中脯氨酸和Na+积累最明显。而叶片中可溶性糖的含量、K+/Na+低于对照。Na+对突变体植株叶片渗透势贡献最大,是最主要的渗透调节剂之一。耐盐突变体植株内存在渗透物质的再分配,叶内有吸钾排钠现象。     

小麦耐盐种质的筛选鉴定和耐盐基因的标记

通过对 40 0份材料的芽期、苗期鉴定 ,筛选出 11份耐盐性较强的普通小麦 (TriticumaestivumL .)、小麦和黑麦 (SecalecerealeL .)、小麦和延安赖草 (Leymuschinensis (Trin .)Tzvel.)杂交后代材料 ,其中耐盐性突出的材料有 :普通小麦品种“红蚂蚱”、“科遗 2 6”、“希望”(Hope) ;小麦与黑麦杂交后代材料 98_46、98_113、98_131;小麦与延安赖草杂交后代材料 98_16 0、98_16 1、98_16 3。耐盐性表现最突出的材料是 98_113和 98_16 0。细胞学鉴定和原位杂交及醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (A_PAGE)分析和低分子量谷蛋白SDS_PAGE分析 ,证明 98_113是稳定的小麦 黑麦二体附加系 ,但具体附加的是黑麦的哪条染色体还不清楚 ;98_131是小麦 黑麦 1B/ 1R易位系。结合其他 1B/ 1R材料的耐盐表现 ,提出了黑麦 1R染色体短臂上存在耐盐基因的可能性。对 (98_16 0×BanacakaMska)F2 代分离群体苗期抗盐鉴定分析 ,表明在这一杂交组合中的耐盐性状可能由一个主效基因控制。应用SSR标记技术 ,筛选到了与 98_16 0耐盐性状连锁的SSR标记WMS6 7和WMS2 13,它们与耐盐基因的遗传距离分别为 13.9cM (centMorgan)和 31.0cM。结合小麦SSR图谱分析 ,将该主效抗性基因定位在 5BL上。