aac(6'''')-Ie-aph(2")-Ia基因及其转座子与HLGR肠球菌的相关性研究进展

肠球菌高耐庆大霉素(High-level gentamicin-resistant,HLGR)菌株的多重耐药性已引起人们的重视.由aac(6‘)-Ie-aph(2“)-Ia编码的双功能酶AAC(6‘)-APH(2“)是目前最重要的一种能够导致肠球菌对庆大霉素高水平耐药的氨基糖甙类钝化酶(AME).监测肠球菌属对庆大霉素高水平耐药的情况和检测其耐药基因,将为临床治疗肠球菌感染提供有力的依据.     

aac（6＇）-Ib-cr介导的喹喏酮类新耐药机制研究进展

AAC（6＇）-Ib是重要的氨基糖苷乙酰基团转移酶,其变异基因aac（6＇）-Ib-cr可同时作用于氨基糖苷类和氟喹诺酮类两类结构不同的抗生素,是引起细菌耐药性的一种重要作用机制。该文主要对aac（6＇）-Ib-cr介导的喹诺酮类新耐药机制相关研究进行综述。     

肺炎克雷伯菌耐氨基糖苷类抗生素基因aac（3）-I的改构与功能

研究氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(3)-I碱基变异与功能的关系。构建表达载体pET28a-aac(3)-I,转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),筛选到阳性克隆送测序。然后在体外对aac(3)-I基因进行易错PCR改造,筛选到一株阳性克隆测序后发现7处碱基变异,其中C272T、T373C引发了氨基酸的变异,分别对应:Ser91Phe、Tyr125His。以琼脂稀释法检测不同克隆的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。实验结果表明变异株MIC较突变前下降64倍(庆大霉素)、4倍(阿米卡星)、8倍(依替米星)。为进一步了解和阐明耐药酶AAC(3)-I与底物的作用机制打下基础。     

肠球菌肽脱甲酰基酶在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达及其活性检测

肽脱甲酰基酶 (peptidedeformylase ,PDF)存在于所有原核生物中是其生长、代谢、繁殖必不可少的关键酶 ,但不存在于人类与其他哺乳动物细胞内 ,因而被视为新一代广谱抗生素药物筛选的理想靶点。将肠球菌 (Enterococcusfaecium)肽脱甲酰基酶基因连接到高效蛋白表达载体pET 30 A( )中 ,并转入宿主大肠杆菌BL2 1 (DE3)中进行诱导表达。在该基因的诱导表达中 ,采用不同表达条件进行诱导表达 ,最终获得表达效率极高且可溶的肽脱甲酰基酶。从宿主细胞中提取分离该酶 ,并进行酶活性检测 ,诱导表达的肽脱甲酰基酶有很高的酶活性     

二脂酰甘油酰基转移酶2 (DGAT2)基因研究进展

二脂酰甘油酰基转移酶2 (Acyl CoA: Diacylgycerol Acyltransferase 2, DGAT2)是生物体内的一种非常重要的酶, 其主要机制是使二酰甘油加上脂肪酸酰基辅酶A以共价健结合形成三酰甘油。编码该酶的基因有DGAT2和DGAT1。文章综述了DGAT2基因的发现、定位、结构、生物学效应及其遗传多态性与生产性能的关系, 并对其应用前景进行了展望。     

错配修复系统hMSH2基因IVS12(-6)T>C多态及饮食习惯 与结直肠癌的易感性

目的:研究江苏省结直肠癌发病与hMSH2基因IVS12(-6)T>C多态及饮食习惯的相关性。方法:对江苏省金坛、泰兴和淮安地区近2年来新发结直肠癌患者共计108例以及配对180例健康体检者的饮食等生活习惯因素进行调查,提取外周血DNA,应用PCR-DHPLC和DNA序列分析的方法,采用病例对照研究结合现场收集的流行病学资料统计分hMSH2基因IVS12(-6)T>C与结直肠癌发病的关系。结果:hMSH2基因IVS12(-6)T>C在家族性结直肠癌患者中检出率较高,且与散发性结直肠癌病例之间差异有统计学意义(P<0.05),在喜食油炸和腌渍食物组,hMSH2基因IVS12(-6)T>CC突变与正常人群之间也存在明显的统计学差异(P<0.05)。结论:hMSH2基因IVS12(-6)T>C突变,通过遗传性和后天获得性等多重因素影响,使得该突变的携带者有更高的结直肠癌发病风险。     

重组粪肠球菌gshF基因对副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)L14抗逆性能的影响

乳酸菌作为重要的食品工业微生物,其在工业生产应用过程中会受到多种非生物胁迫。已有研究表明部分乳酸菌可以吸收培养基中或是自身合成谷胱甘肽(Glutathione,GSH),提高对各种胁迫的抵抗作用。克隆了粪肠球菌(Enterococcus faecalis)中的谷胱甘肽合成酶基因gshF,通过构建乳杆菌重组表达质粒,实现了gshF在副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)L14菌株中的异源表达。通过对重组gshF-副干酪乳杆菌阳性菌株的抗逆性性测定,结果表明在过氧化氢、酸、冻干脱水和渗透等胁迫条件下,gshF重组菌株的存活率与对照菌株相比均有显著提高。     

广义虫草类真菌来源的N~6‐(2‐羟乙基)腺苷的研究开发现状与思考

N~6-(2-羟乙基)腺苷(简称HEA)是虫草菌丝体中得到的第一个生物来源的钙离子拮抗剂,具有抑制癌细胞生长、降低炎症反应、保护肾脏、镇静、镇痛和抗惊厥等多种功效,已经成为一个研究热点。本文对HEA的菌株来源、生理功能、生物合成、提取纯化、化学合成的研究现状等方面进行了总结,对有关专利进行了评价和分析,提出从种质资源入手拓宽HEA来源,优化HEA的提取纯化方法,并深入探究其生物合成途径,为HEA的深入研究和开发应用提供指导。     

桑黄Zn(II)2Cys6锌簇蛋白转录因子及其在不同碳氮源条件下的表达

Zn(II)2Cys6锌簇蛋白转录因子（C6 zinc）在真菌次生代谢产物合成中发挥重要作用。本研究首先利用本地BLAST,从桑黄Sanghuangporus sanghuang全基因组中获得Zn(II)2Cys6锌簇蛋白转录因子编码基因,并利用生物信息学手段分析编码蛋白保守结构域、一级结构及二级结构,构建蛋白系统发育树,最后利用半定量PCR对它们在不同碳源和氮源培养条件下的表达情况进行检测。结果显示:从桑黄基因组中分析获得的11个Zn(II)2Cys6锌簇蛋白均具有Cy6型锌指基序,属于GAL4型锌簇蛋白转录因子;它们均为不稳定亲水性蛋白,具磷酸化修饰位点,糖基化修饰位点较少或没有,定位于细胞核中;其二级结构主要以无规卷曲和α螺旋为主;系统发育树分析结果显示,桑黄Zn(II)2Cys6锌簇蛋白分为2个大分支,其中Ⅰ类分支转录因子的保守结构域分布于蛋白N-端,Ⅱ类分支转录因子的保守结构域则分布于蛋白C-端;11个桑黄Zn(II)2Cys6锌簇蛋白转录因子在不同培养基培养的菌丝体中呈现差异化表达,其中,肌醇培养基和乳糖培养基能够有效促进大部分锌簇蛋白转录因子的表达;另外,基因簇分析显示桑黄锌簇蛋白SHCZ4可能是NRPS-PKS杂合基因簇体系的途经特异性转录因子。该结果将为桑黄次生代谢产物合成调控相关转录因子的研究以及潜在次生代谢相关基因簇的挖掘提供参考依据。     

异双核配合物[(PhPPy_2)_2PdCuCl_2]ClO_4(PhPPy_2为二(2-吡啶基)苯基膦)的合成与晶体结构

反式单核钯(Ⅱ)配合物[-Pd(PhPPy2)2Cl2](1)与ECu(CH3CN)4]ClO4反应得到异双核配合物[(PhPPy2)2PdCuCl2]ClO4·2CH3CN(2),其中金属离子由两个PhPPy2配体以一种新的模式所桥联。配合物2属于P21/c空间群,晶胞参数a、b、c分别为1.294 7(1)nm,0.914 2(1) nm和3.345 4(2)nm,β为99.698(1)°。2中的Pd(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)离子分别为扭曲的四面体和平面正方构型。室温下,该配合物的溶液发光。     

介质Ca~(2 )和La~(3 )对酿酒酵母生长的影响

采用正交实验研究了外加Ｃａ~(２＋)和Ｌａ~(３＋)对酿酒酵母生长的影响。结果表明：外加Ｃａ~(２＋)和Ｌａ~(３＋)对酿酒酵母的生长均有显著的影响,都呈现出低浓度时正效应和高浓度时负效应,当Ｃａ~(２＋)浓度为１ｍｍｏｌ／Ｌ及Ｌａ~(３＋)浓度为１５μｍｏｌ／Ｌ时酿酒酵母生长最好。     

Cr~(6 )污染对菱叶中矿质元素含量的影响

研究 Cr6 污染后菱浮水叶和沉水叶中 Cr、K、Mg、Fe、Mn、Zn、Cu、Mo元素的含量 ,结果显示 :Cr含量随培养浓度的上升而上升 ,K、Mg随培养浓度的上升而下降 ,Fe含量随培养浓度的上升而出现先上升后下降 ,Mn、Zn、Cu、Mo与 Cr6 的培养浓度无明显的相关关系。     

参与丝状真菌次级代谢Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白转录因子的生物信息学分析

本研究根据在GenBank中已登录的扩展青霉(Penicillium expansum)中棒曲霉素簇转录因子PePatL、棒曲霉菌(Aspergillus clavatus)中棒曲霉素簇转录因子PatL、构巢曲霉(A.nidulans)中柄曲霉素转录因子AFLR、黄曲霉(A.flavus)中黄曲霉毒素转录因子AFLR、...     

山羊减压病时血液血栓素B_2及6—酮—前列腺素F_(1α)的变化

本文报告了山羊急性减压病时血液TXB_2和6—Keto—PGF_(1α)的动态变化,22只山羊被分为两组,其中12只为实验组并被造成急性实验性减压病模型。另外10只为对照组。分别于进加压舱前和出加压舱后5min1h、2h、3h、及24h测定动物心前区Doppler气泡音并采血测血液中TXB_2、6-keto-PGF_(1α)及血小板计数。 实验结果表明,当山羊患急性减压病时,其血液中TXB_2明显升高而6-keto-PGF_(1α)明显降低。也就是说存在着TXA_2与PGI_2的失平衡。鉴于TXA_2与PGI_2平衡对维持血液内环境稳定的重要作用,笔者认为急性减压病时所存在的TXA_2与PGI_2失平衡对于减压病的发生和转归是十分重要的。     

Cu(C6H9N3O2)2Cl2对小麦的生态毒理效应

以冬小麦为实验材料,比较研究了(1)不同浓度配合物对小麦生长的影响;(2)相同浓度的CuC l2、配体C6H9N3O2和配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2对冬小麦种子萌发、苗期生长及其保护酶活性的影响。结果表明:与对照相比,(1)不同浓度新配合物对小麦生长具有不同程度的抑制作用,随着浓度的增高抑制作用逐渐增大;(2)CuC l2、配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2对小麦种子总淀粉酶活性、蛋白酶活性、萌发率、生长势、根长、株高、总生物量均具有显著的抑制作用,配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2的抑制作用小于CuC l2,而配体C6H9N3O2对上述生物学参数具有促进作用;(3)CuC l2、配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2处理引起膜脂过氧化,显著的提高了幼苗的M DA浓度,导致SOD、POD、CAT活性降低,CuC l2的抑制作用大于配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2,而配体C6H9N3O2处理对SOD、POD、CAT活性的提高有促进作用。上述结果说明C6H9N3O2对CuC l2生理胁迫具有保护作用,结合态的Cu2 (配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2)的毒性显著的降低。在此基础上探讨了配合物抑制小麦生长发育的生物学机制。     

Na~(+)、Ca~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)与HSA相互作用的~(23)(Na)-NMR研究

 本文应用~23Na-NMR波谱技术,研究了Na~(+)、Ca~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)与人体血清白蛋白(HSA)的相互作用。在实验基础上,通过引入两位快交换模型,拟合计算获得了Na~(+)与HSA相互作用的结合常数和处于结合状态Na~(+)的相关时间;实验表明Ca~(2+)能与Na~(+)竞争同HSA结合,拟合计算获得了两者与HSA相互作用结合常数的比值,棕榈酸钠能增强Ca~(2+)同Na~(+)竞争与HSA结合的能力;从实验上未能观察到Cu~(2+)、Zn~(2+)能同Na~(+)竞争与HSA相互作用的证据。     

女性2型糖尿病患者尿液细菌分布及其与血清IL-6的相关性

目的检测女性2型糖尿病(T2DM)患者尿液细菌多样性特征,分析其与白细胞介素-6(IL-6)水平的相关性。方法选择2016年1月至2019年6月于本院诊治的女性T2DM患者60例作为T2DM组。选择同期于本院行尿液细菌检测的健康女性60例作为健康组。收集两组对象尿液样本,采用细菌DNA测序法对样本内细菌16S rRNA-cDNA高可变区进行测序,比较两组对象尿液细菌分布特征。采用ELISA法测定血清IL-6水平,根据IL-6检出情况分为IL-6组和非IL-6组,比较两组对象尿液细菌的组成情况及其与IL-6的关系。结果 T2DM组患者尿液微生物多样性、Shannon指数、谱系多样性、菌种丰富度指数均低于健康组(均P0.05)。共发现35个细菌门,其中T2DM组33个,健康组35个。T2DM组患者相对丰度较多的细菌为变形菌门(50.77%)、拟杆菌门(21.62%)和厚壁菌门(14.46%)。健康组相对丰度较多的细菌为变形菌门(54.49%)、拟杆菌门(22.81%)和厚壁菌门(10.02%)。T2DM组患者尿液中绿弯菌门、硝化螺旋菌门、疣微菌门相对丰度均低于健康组(均P0.05),其他菌门差异无统计学意义(均P0.05)。共发现438个细菌属,其中T2DM组438个,健康组421个。T2DM组和健康组共有30个菌属水平差异有统计学意义(均P0.05)。IL-6组和非IL-6组患者尿液微生物多样性、Shannon指数、谱系多样性、菌种丰富度指数比较差异均无统计学意义(均P0.05)。多元回归分析显示,共有15种细菌属与血清IL-6水平有线性相关关系。结论女性T2DM患者尿液菌群紊乱且与IL-6互为影响,应关注患者尿液菌群和膀胱炎症情况。     

人乳头瘤病毒6b型(HPV-6b)的上游调控区在大肠杆菌中也具有增强子样的效应

采用痘苗病毒7.5k、11k及N2启动子,以大肠杆菌β-半乳糖苷酶(β-lac)、氯霉素乙酰基转移酶(CAT)作为标记基因,构建了大肠杆菌增强子样序列的系列检测载体。采用上述检测载体发现人乳头瘤病毒6b(Human papillomavirus type 6b,HPV-6b)上游调控区(Upstream regulating region,URR)中540bp的Sau3A-Nar Ⅰ片段,在大肠杆菌中对痘苗病毒启动子控制的CAT基因的表达有明显的增强作用,可使基因表达提高4～5倍;对β-lac基因的表达可提高3～6倍。根据这一片段的插入方向增强基因表达水平有所不同。     

一株蝉拟青霉产N~6-(2-羟乙基)腺苷静置发酵条件的研究

为了提高蝉拟青霉122菌株中N~6‐(2‐羟乙基)腺苷(HEA)的产量。采用静置液体培养方法,以HEA产量为指标,筛选得到122菌株在查氏培养基上的HEA产量优于沙氏和PD培养基;以查氏培养基为基础培养基,在26℃培养40d时,HEA产量达到最大;在黑暗条件培养优于光照条件培养;最优碳源是蔗糖和葡萄糖;最优氮源是磷酸氢二铵;最优无机盐是KH_2PO_4;最优前体物为次黄嘌呤;最适氨基酸为L‐谷氨酸。正交实验结果表明蔗糖是影响122菌株产HEA的最主要的因子,在筛选出的优化培养基上得到122菌株HEA的最大产量为(130.22±0.60)mg/L,较优化前HEA的产量提高9.73倍。