农业上的应用

生物防治组织与原生质体培养932031启动子对杆状病弃介导的甚因在受纳和非受纳昆虫组饱系中农达的形响一英〕/Morris,T.D.一,J .Virol一1992,65(12)一7397~7405〔译自DBA,1995,12(i),93一00265〕 在宜组杆状病毒(首藉银纹夜蛾核多角体病毒)侵染7种昆虫细胸系期间,试验了代表早、晚和极晚期启动子的3种病毒启动子和昆虫启动子(果蝇hsp7。启动子(HP”表达的瞬时形式和相对强度。结果表明,极晚期启动子活性主要受受纳细胞限制。在非受纳细胞中,晚期启动子的表达不象受纳细胞那样高,但比病毒早期启动子的表达要高。来自病毒衍生HP的非受纳…     

生物防治

924473从摇瓶到发酵镶:大规模昆虫细胞培养的挑战〔会,英〕/Belisle,B.W.…f In Vitro一1992,25(s),Pt.2。一43A〔译自DBA,1092,11 (11),92一06235〕 棒状病毒作为生防因子,要满足市场要求,还需克服成本高的问题。采用经调整的市售无血清培养基,研究了在5个鳞翅目细胞系中小规模、大规模生产胞外及包含体LdMNPV(舞毒蛾核多角体病毒)和AcMNPv(首稿银纹夜蛾核多角体病毒)。采用AeMNPV和草地夜蛾(S,o己。尹tera fr。夕玄-尹”己a) Sfg细胞作为模型系统,培养细胞,规模为100ml~401。细胞密度和存活率达到相当于所报道的含血清培养基的…     

疫苗

920931生物技术在研制动物皮苗中的应用〔英〕/Redm。-nd,M J.…了Genet。Eng.Bioteehnol。-1991,11(1)一14一21〔译自DBA,1991,10 (15),91一08572〕 本文综述了应用生物技术生产动物疫苗。讨论的题目有:工程疫苗(即经修饰的减毒重组活疫苗或重组的载体活疫苗如痘苗病毒载体或鼠伤寒沙门菌载体),亚单位重组疫苗(原核系统如大肠杆菌表达的蛋白)、和真核系统(如酿酒酵母菌表达的乙型肝炎病毒、CHO细胞表达的单纯疙疹病毒、携带首落银纹夜蛾核型多角体病毒载体的草地夜蛾昆虫细胞表达的流感病毒或人轮状病毒)表达的蛋白;合成肤疫苗;疫苗配…     

激素和活性多肽

920941使用杆状病毒载体在昆虫细胞内台成的人绒毛膜促性腺激素a亚单位具生物学活性〔英〕/Nakhai,B.…厂FEBS Lett一1991,253(i)一104~x08仁译自DBA,1992,10(15),91一08562」 用HCGa亚基的编码cDNA置换核多角体病毒基因,构建了首落银纹夜蛾核型多角体病毒重组载体vAc一a一hCG。草地夜蛾Sfg病毒感染的细胞约分泌11.3声ga一HCG/2。。万细胞·Inl,这些a-HCG在电泳移动力、免疫反应性以及与声亚基的生物反应性上均与天然激素相同。分泌到培养基中的a一HCG占vAc一a一hCG感染昆虫细胞所合成的HCG总量的20~30%。超量产生如“一HCG…     

生物防治

920202连续昆虫细胞生物反应器生产杆状病毒或盆组衍生物〔会,英〕/van Lier,F.L.J.一2 Ann.N .Y.Acad.Sci一2992,613一253~100〔译自DBA,1991,10(9),91一05063」 叙述了杆状病毒的分子生物学,以及如何生产用于昆虫生防的重组杆状病毒。此为连续操作系统,其中两个相连反应器的第一个用于培养昆虫细胞,在第二个反应器中,非封闭形首蓓银纹夜蛾(A“to夕ra夕无acal‘for。￡ca.)核多角体病毒 (AoNPV)侵染昆虫细胞。细胞裂解前完成侵染周期。在剪切力最小的饱罩塔中反应,此模型用于气提式生物反应器。4周后,在上述二步反应器中,草地夜蛾(…     

蓖麻蚕核型多角体病毒DNA转染四种昆虫细胞系的研究

用蓖麻蚕核型多角体病毒(PcrNPV)DNA转染草地贪夜蛾(SF)、家蚕(Bm)、斜纹夜蛾(SL)和菜粉蝶(Pr)四种昆虫细胞系,结果表明,PcrNPV DNA能在SF细胞内复制增殖并形成多角体,Pr细胞系对PcrNPV DNA转染不敏感;Bm和SL细胞出现病变症状,但在电镜下未观察到病毒粒子或多角体。     

动物细胞培养及单克隆抗体

.,J一,J沪.J”‘舌尹.刁7.’试J、~宁.护理J.合忠‘J产奋「下,924392用杆状病毒表达载体生产分离的异型户半乳箱普酶多肚仁英〕/Lieari,P.…/Biotechnol.B ioeng一1092,39(9)一932~944〔译自DBA,1992,11(11),92一06397〕 在草地夜蛾连续细胞系IPL一Sfg中表达首藉银纹夜蛾核多角体病毒(AcMNPV),生产分离的异型户半乳糖普酶蛋白。在pol了hedrin启动子调控下,重组AeMNPV编码 polyhedrin一BG的融合蛋白。该启动子由转移载体质粒pAo36。和设计的360-lac构建。病毒侵染细胞后培养96小时,培养物经BG免疫沉淀放射自显影显示,有几条比B…     

医药其它

922949在特定杆状病毒表达系统中生产具生物学活性的跳胺化eeeropin〔英〕/Andersons,H.…2 Bioe-liem.J一1091,250,Pt.1一219~224〔译自DB-A,1992,11(3),92一01388〕 构建了表达质粒pVL941一22一ceoA,其中含有:组织血纤维蛋白溶酶原激活子(t一PA)的信号肤、从金黄色葡萄球菌蛋白一A(22)衍生的合成性抗体结合部分、编码cecropin一A天然部分的合成片段(附加C末端甘氨酸密码子)。将此融合基因转入首着银纹夜蛾核多角体病毒载体基因组,再用重组病毒感染草地贪夜蛾Sfg细胞。对从细胞培养基获取的蛋白进行SDS一PAGE和blotting检测。采…     

斜纹夜蛾核多角体病毒抑制苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒诱导的斜纹夜蛾细胞凋亡

野生型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)感染斜纹夜蛾(Spodoptera litura)细胞系Sl-zsu-1,可引起典型的细胞凋亡;但可以在草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞Sf-9中复制并形成多角体.比较了AcMNPV p35基因在病毒感染两种细胞的复制和转录情况,认为p35在非受纳细胞中及时有效的表达能阻止细胞发生凋亡;共感染实验结果表明,斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus, SpltMNPV)可以抑制AcMNPV诱导的细胞凋亡并可帮助病毒进行复制,推测SpltMNPV基因组中与p35同源的p49基因挽救了细胞的自杀行为.     

以柞蚕NPV为载体在柞蚕蛹体内表达外源基因获得成功

辽宁省农科院大连生物技术研究所张春发等人利用柞蚕核型多角体病毒(ApNpV)组建成转移载体,并以此载体携带外源基因(人白细胞介素-4、DE糖蛋白)在草地贪夜蛾Sf9昆虫细胞、柞蚕卵巢细胞以及柞蚕蛹活体中表达成功。实验表明,表达产物的确以非融合蛋白形式出现,从而建立了柞蚕NpV载体—柞蚕蛹活体宿主表达系统。这是继菌苜蓿纹夜蛾核多角体病毒(AcNpV)—Sf9细胞载体表达系统和家蚕核多角体病毒(BmNpV)——家蚕幼虫载体表达系统以后又一个昆虫杆状病毒载体达表系统。由于该系统是利用柞蚕蛹活体为宿主     

生物防治

922568 开发表达昆虫专性神经毒素的杆状病毒用作生防剂的潜力[英]/McCutchen,B.F.…∥Bio/Technology.-1991,9(9).-848～852E译自DBA,1991,10(25),91-14753] 将编码蝎子Androctonus australis昆虫专性毒素(AaIT)的DNA片段插入苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核多角体病毒(AcNPV)转移载体质粒pAcUW2 p10启动子下游和核多角体基因上游处。用该质粒DNA和核多     

杆状病毒凋亡抑制基因

杆状病毒(baculoviruses)感染昆虫细胞会引发细胞凋亡,然而病毒为了确保自身的复制和繁殖会抑制宿主细胞的凋亡.杆状病毒在长期进化过程中获得了凋亡抑制基因,如苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica MNPV, AcMNPV)中的p35基因,棉铃虫核型多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus, HaSNPV)基因组中的IAP基因家族,以及莲纹夜蛾核形多角体病毒(Spodoptera littoralis multicapsid nucleopolyhedrovirus, SpliMNPV)的p49基因等.尽管这些基因都具有抑制细胞凋亡的功能,但是作用途径和方式却各有差异.对杆状病毒3种抗凋亡基因的结构和功能作一简单的介绍和评述.     

苜蓿丫纹夜蛾杆状病毒在四个异源连续细胞系内的传代复制

本文比较了苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(AcNPV)在贪食夜蛾IPLB-SF-21AE细胞及其克隆株IPLB-SF-21AEC细胞,棉铃虫SIE-HAH-806细胞和粘虫SIE-MSH-805细胞系内长期连续传代复制的情况,每代病毒复制的历程为7天,观察指标是,细胞内形成多角体的百分率,游离病毒粒子的TCID50,对幼虫活体感染性,以及受感染后细胞超微结构的变化,结果证实,AcNPV在异源IPLB-SF-21AE昆虫细胞系内连续复制至50代次后,依然具有正常的形态和感染性,这为在离体下长期有效地复制杆状病毒提供了可能,我们还发现,在离体系统内增殖的病毒,其正常形态和感染性的维持与选用敏感细胞的种类有关。     

斜纹夜蛾spli caspase-1部分基因的克隆与分析

紫外线、芹菜夜蛾核型多角体病毒(sfMNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)都可诱导斜纹夜蛾(Spodoptera littoralis)SL-1细胞凋亡,这说明在SL-1细胞中Caspase表达活性高,本实验从莲纹夜蛾(Spodoptera littoralis)和草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)序列出发,根据其中保守性高的序列设计引物,提取SL-1细胞中的总RNA,并进行逆转录和PCR扩增,获得了一条419bp的cDNA。     

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒fp25k基因的改造及用于稳定转化Sf9昆虫细胞系

【目的】苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)在昆虫细胞中连续传代以后,会出现从多多角体表型到少多角体表型的转变,这种转变与一个编码25 kDa蛋白的基因（few polyhedra, fp25k）突变失活有关。杆状病毒的fp25k基因突变后产生的包涵体（多角体）衍生病毒粒子变少而出芽型病毒粒子增加,会降低外源基因在杆状病毒表达系统中的表达。本研究拟改造fp25k并构建能持续表达FP25K蛋白的转基因昆虫细胞,以克服杆状病毒, fp25k基因易突变导致的表达系统缺陷。【方法】本实验通过改造杆状病毒, fp25k基因在细胞传代过程中容易产生突变的位点,得到 mfp25k,并将mfp25k构建到pIZT/V5-His载体上,重组载体转染Sf9细胞,通过Zeocin抗性筛选逐步淘汰未成功转化的Sf9细胞。【结果】成功改造AcMNPV的, fp25k基因的TTAA位点,得到pIZT-mfp25k重组载体。重组载体成功转染Sf9细胞,通过Zeocin抗性筛选后获得基因组中带有mfp25k的Sf9-mfp25k稳定的转基因细胞系。用AcMNPV的fp25k突变型病毒AcP2感染转基因Sf9-mfp25k昆虫细胞系与正常Sf9细胞,发现转基因Sf9-mfp25k昆虫细胞系表达的FP25K蛋白可弥补病毒, fp25k基因突变的缺陷。【结论】建立的Sf9-mfp25k转基因昆虫细胞系通过细胞表达FP25K蛋白,可以弥补因杆状病毒fp25k基因突变产生的缺陷。研究结果为构建稳定的杆状病毒 昆虫细胞表达系统提供了新途径。     

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒在几株昆虫细胞内增殖的研究

本文对苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Ac NPV)在几个新建昆虫细胞系内的蜡殖过程作了比较。其中SIE—MSH一805、SIE—HAH一806和IPLB—SF一21AF．C细胞在病毒感染96小时后,细胞上清液中的未埋入型病毒(xov)含量可达到高峰;测定TCID,。分别为1．5 x107／ml,1·0。10’／ml和1．0×10‘／tul。病毒感染120小时后,90％以上的细胞形成完整的多角体。据此认为,上述三个细胞系是目前国内较为理想的离体系统,可供用来增殖Ac NPV。     

生物防治

941136全长和平截的苏云金芽抱杆菌晶体蛋白基因在杆状病毒中的表达及重组病毒的致病性〔英〕/Ri-beiro,B。M。…了J。Invertebr。Pathol。-1993,62(2)一121〔译自DBA,1993,12(22),93一12837〕 构建了分别含全长苏云金芽抱杆菌kurstakiDH一1亚种晶体蛋白cryIA(b)基因(质粒pAc-Btm)、该菌kurstaki HD一73亚种eryIA(e)基因(pAeBt73)、和eryIA(b)基因5尹平截形 (pAeBts)、3了平截形(pAeBt3)及5尹/3尹平截形(P AoBts/3)‘基因的重组转移载体。用之与重组杆状病毒AoRPS一刀一gal或野生型首蓓银纹夜蛾核多角体病毒DNA一道共转染草…     

一株高水平表达重组蛋白昆虫细胞系的建立

报道了一株来自粉纹夜蛾Trichoplusiani脂肪体的传代细胞系 ,在辅以 5%胎牛血清的商品无血清培养基Excell 4 0 0中 ,细胞群体倍增时间为 2 2 9h ,最高密度可达 2 2× 10 6 mL ,该细胞对苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋型多角体病毒 (AcMNPV)极为敏感 ,增殖AcMNPV多角体平均每个细胞达86个 ,表达由AcMNPV构建的重组蛋白的水平较高 ,β 半乳糖苷酶的表达水平为 ( 2 2 5 5± 13 4 )IU mL ;碱性磷酸酶的表达水平为 ( 4 7± 0 61)IU mL ,是一株高水平表达重组蛋白的传代细胞系 ,命名为HNU Tn FB1。     

两株棉铃虫胚胎新细胞系的建立及其对杆状病毒侵染的反应

昆虫细胞系的建立在病毒学和昆虫学等领域的研究和应用中发挥着重要的作用。本研究由棉铃虫Helicoverpa armigera胚胎组织建立了两株细胞系, 分别命名为QB-Ha-E-1和QB-Ha-E-5, 在含10％胎牛血清的TNM-FH培养基中已传代60余代。两株细胞系均以圆形和短梭形细胞为主。DAF鉴定结果表明, 两株细胞系均来源于棉铃虫胚胎, 其扩增谱带与其他几种昆虫细胞系明显不同; QB-Ha-E-1和QB-Ha-E-5的第30代细胞群体倍增时间分别为63.7 h和66.9 h。两株细胞系均能被棉铃虫核型多角体病毒（HaSNPV）感染, 4 d的感染率分别为86.6％和56.5％, 对甘蓝夜蛾Mamestra brassicae核型多角体病毒（MbNPV）7 d的感染率均为15％左右, 但对苜蓿银纹夜蛾Autographa californica核型多角体病毒（AcMNPV）侵染的反应不同。DAPI染色和基因组DNA电泳结果表明, AcMNPV可诱导QB-Ha-E-5细胞发生凋亡, 极少数细胞内可形成多角体, 但不能诱导QB-Ha-E-1细胞发生凋亡, 其感染率为55.3％; 两株细胞系均可被1.25 μg/mL的放线菌素D诱导发生凋亡。两株细胞系具有相同的遗传背景, 但对AcMNPV侵染的反应不同, 可作为昆虫病毒和细胞之间相互关系以及细胞凋亡机制研究的理想材料。     

利用双杂交系统对SeNPV泛素与抗细胞凋亡蛋白相互作用的研究

本文报道利用酵母双杂交系统研究甜菜夜蛾核多角体病毒(SeNPV)的泛素(Ubiqutin)与抗细胞凋亡蛋白(IAP2, IAP3)相互作用的结果.使用Clontech 公司的MACHMAKER GAL4 Two-hybrid system 3,以病毒ubiquitin基因与酵母GAL4的DNA结合域重组表达"诱饵"蛋白,以病毒iap2或iap3基因与DNA活化域重组表达"猎物"蛋白,在低严谨型筛选培养基上均得到阳性克隆.这一结果表明,甜菜夜蛾核多角体病毒泛素与IAP2或IAP3在体外能进行相互作用,这种作用利用了酵母内源性E1和E2.SeNPV的抗细胞凋亡蛋白(IAPs)可能是泛素-蛋白酶水解途径(UPP)中的泛素连接酶(E3),或者是泛素依赖性蛋白水解酶的靶底物.