人雄激素受体部分N端区cDNA片段在大肠杆菌中的克隆及表达

N端区是甾体激素受体氨基酸序列差别最大的区域,决定了甾体激素受体抗原的特异性,是制备特异性抗甾体激素受体抗体的首选部位。以前,由于雄激素受体(hAR)纯化的困难,hAR抗体主要是从部分患前列腺癌病人血液中存在的hAR自身抗体纯化获得,利用这种方法制备的hAR抗体不但量少,而且来源也非常有限。 hAR cDNA克隆成功后,利用基因重组技     

核受体及核受体病

核受体为一类配体依赖性的转录调节蛋白,它们在一级结构及基因结构上具有同源性,属于核受体家族或甾体激素受体超家族。核受体异常或核受体病将导致靶细胞对相应激素的抵抗,在临床上产生激素不敏感或抵抗症。近年来,核受体病的分子缺陷及突变本质已得到初步揭示。     

甾体激素对基因表达的调节作用

甾体激素调控基因表达是通过与激素受体结合,将受体转化激活,提高其与基因特定序列相结合的能力而诱导或阻抑靶细胞内特异基因的转录。与激素-受体复合物特异结合的DNA序列相当短,其作用类似基因转录的增强子,它可能与其它各种因素配合产生激素调节效应。     

甾体激素受体的提纯倍数与其纯度的关系

甾体激素受体是一类具有特殊生理功能的蛋白质。存在于生物体内的各种甾体激素受体,各自接受其专一性甾体激素的信息,例如雌激素受体只能与雌激素相结合,与孕激素等其它甾体激素不能结合。同时,这种受体的含量,极为稀少,据估计,靶细胞(受体含量最多的组织)匀浆内的受体只占总蛋白的十万分之一。因此,若不经过十万倍的提纯,就不能得到单一组分的纯受体,这和酶要经上千倍的纯化相     

神经活性甾体对神经元的作用

神经活性甾体是指神经组织中具有活性的甾体激素,根据甾体激素的作用机制可分为三类：（1）通过细胞表面离子通道型受体介导产生效应,这些受体包括GABAA受体,NMDA受体等。（2）通过G蛋白偶联的膜受体指导第二信使反应,再通过DNA结合蛋白,调节基因表达产生效应,（3）通过细胞内受体介导调控基因的表达产生效应,甾体激素的这些效应尤其是对离子通道型受体和G蛋白偶联型受体的调节作用,已引起重视。     

甾体激素的调节基因表达作用

由于对甾体激素受体的结构、结构与功能关系及HRE进行了许多研究,人们对甾体激素受体和HRE及多种转录因子相互作用调节基因表达的过程在分子水平上有了更深入的了解,因而对甾体激素调节基因表达的机制有了进一步的认识,本文综述了这方面的研究进展。     

甾体激素受体的提纯倍数与其纯度的关系

甾体激素受体是一类具有特殊生理功能的蛋白质.存在于生物体内的各种甾体激素受体,各自接受其专一性甾体激素的信息,例如雌激素受体只能与雌激素相结合,与孕激素等其它甾体激素不能结合.同时,这种受体的含量,极为稀少,据估计,靶细胞(受体含量最多的组织)匀浆内的受体只占总蛋白的十万分之一.因此,若不经过十万倍的提纯,就不能得到单一组分的纯受体,这和酶要经上千倍的纯化相比,受体的提纯就显得更加艰巨. 以上所指千倍万倍,就是生化分离技术中     

甾体激素的作用机制及其受体的结构和功能

本文介绍了甾体激素作用机制的研究进展,以及受体参与作用的模式。甾体激素受体的核内定位,是一个重要的突破。对于受体Domain结构的研究及其与靶基因HRE相互作用,则是近年来更深入的发展。另一方面,细胞内专一性染色质组份接受了受体携带的大部分激素信息,也成为研究甾体激素调控机制的一个不可忽视的方面。     

激素在细胞内的作用机理(续)

(二)类固醇激素作用原理 (作用于细胞核的激素) 1.甾体激素的受体细胞对甾体激素的反应依赖于被称作受体(receptor)的蛋白质分子的存在。由激素和受体形成的复合物作用于细胞的基因物质。由内分泌器官所分泌的激素可以影响远距离的无明显关系的组织的细胞,在这些起调节     

神经活性甾体激素的快速中枢效应

过去认为甾体激素只能由神经系统外的内分泌组织产生。甾体激素的作用原理为经典的基因作用机制。近年来的研究发现脑组织也能产生神经源性的神经甾体激素,而且神经细胞膜表面存在甾体激素结合位点。神经活性甾体激素和脑源性神经甾体激素可通过调制配基门控离子通道受体、Ｇ蛋白耦联受体产生快速中枢效应。     

昆虫鞣化激素及其受体研究进展

昆虫通过多种激素调控蜕皮过程,以完成生长发育。鞣化激素与其受体结合,调节昆虫表皮发育及鞣化、翅的伸展和成熟、肌肉收缩、卵子边缘细胞的迁移等,对昆虫的生长发育具有重要作用。鞣化激素由两个亚基(BURS和PBURS)构成,主要在胸腹神经节中合成,两个亚基在结构及其进化上较为保守,氨基酸序列中均含有11个半胱氨酸残基,在某些特定的组织中具有独立的生物学活性。鞣化激素受体为G蛋白偶联受体(G protein coupled receptor,GPCR)亚家族成员,富含亮氨酸重复序列,被命名为d LGR2。LGR2的C端区域(含多个丝氨酸残基)和N端区域(富含亮氨酸重复结构域)对于其行使正常功能具有重要作用。鞣化激素释放至血淋巴中与LGR2结合,激活c AMP/PKA信号,使酪氨酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase,TH)磷酸化,磷酸化的TH将酪氨酸(Tyrosine)羟化为多巴(DOPA),进而引起表皮的黑化和硬化过程。另外,昆虫鞣化激素亚基形成的同源二聚体可激活转录因子Relish,调控免疫反应。本文结合近年来该领域研究成果,对鞣化激素及其受体的分子结构特性和时空表达进行分析,同时,对其在翅的延展和成熟、表皮黑化和硬化以及免疫等方面的功能研究进展进行综述,为深入认识昆虫鞣化激素及其受体作用机制提供参考。     

人EEN蛋白的结构预测和功能分析

采用基于神经网络的算法预测了我们自行克隆的新的白血病相关蛋白ＥＥＮ（ｅｘｔｒａ ｅｌｅｖｅｎｎｉｎｅｔｅｅｎ, ＥＥＮ）全长分子的二级结构,结果表明：ＥＥＮ 蛋白可能有三个结构域,Ｎ 端由三段α螺旋和短β折叠组成,中间为四段α螺旋组成的四螺旋结构,Ｃ端为ＳＨ３结构域,类似于在受体酪氨酸激酶信号传导途径中起重要作用的ＳＥＭ－５／ＧＲＢ２ Ｃ端ＳＨ３结构域;利用同源蛋白结构模拟的方法,模拟了ＥＥＮ ＳＨ３结构域的三维结构,结果表明：ＥＥＮ ＳＨ３结构域与ＳＥＭ－５／ＧＲＢ２ ＳＨ３结构域具有相近的结构,构成脯氨酸结合区的氨基酸非常保守．上述结果提示：ＥＥＮ 蛋白可能为新的信号蛋白,可能涉及新的信号传导途径或新的信号传导旁路,ＳＨ３结构域是其功能区域．     

雌激素受体的结构与功能

人的雌激素受体根据其氨基酸顺序的保守性可以分成6个区,其中最富于保守性的是DNA结合区和激素结合区。DNA结合区负责与专一的DNA顺序结合。激素结合区不仅能与配体(雌激素)结合,参与形成二聚体,而且具有激活靶基因转录活动等重要动能。雌激素受体蛋白-激素复合物可以被认为是一个受配体诱导的转录因子,它与具有增强子功能的DNA顺序结合后调节靶基因的转录活动。     

不同靶器官的糖皮质激素细胞受体的功能相同吗?

近年来发现,大鼠的胸腺、肾、白脂肪及肝等不同靶组织的皮质激素受体具有相同的生物学功能:1)不同靶组织结合的活性相同2)与其它甾体激素如孕酮、睾丸酮、雌二醇、地塞米松的竞争抑制物的亲和性以及与这些甾体激素的结合情况也彼此相同。然而,不同的靶细胞对同一种皮质激素却表现出不同效应,例如地塞米松能刺激肾细胞合成磷酸烯醇丙酮酸羰激酶,但激素对脂肪细胞中的该酶的合成有抑制作用,这可能反映了激素对不同靶细胞的作用除通过与受体的结合外,还有其它的作用途径     

欧洲型舞毒蛾气味受体基因OrCo的克隆及序列分析

【目的】克隆欧洲型舞毒蛾Lymantria dispar Linnaeus的OrCo气味受体基因,并分析其序列特征,为进一步研究舞毒蛾嗅觉机制提供有益参考。【方法】本研究利用RT-PCR和RACE方法,克隆获得欧洲型舞毒蛾OrCo受体基因cDNA全长序列,将该基因命名为LdisOrCo,在GenBank中的登录号为KF482409。【结果】序列分析结果显示,LdisOrCo开放阅读框全长为1 311 bp,编码436个氨基酸,序列中有7个跨膜区和高度保守的C端区域。序列联配分析表明,LdisOrCo基因的氨基酸序列与近缘种灰翅夜蛾(Spodoptera littoralis Or83b)的同源性高达89%,与鞘翅目台湾黑金龟(Holotrichia plumbea Or83b)同源性高达64%,与已经报道的其他昆虫的嗅觉受体同源性都在60%以上,特别是在C端几乎完全一致。【结论】嗅觉受体OrCo(Olfactory receptor coreceptor)在不同昆虫体内高度保守,克隆欧洲型舞毒蛾OrCo基因可以为进一步研究舞毒蛾气味受体的功能,OrCo基因的进化以及揭秘嗅觉机制奠定基础。     

甾体激素对神经元作用的新机制

甾体激素作用的核机制长期以来人们普遍认为甾体激素通过如下机制发挥作用:甾体激素与其在细胞浆内的受体结合形成激素受体复合物,该复合物活化后,转位到细胞核内,与核蛋白和 DNA 上的特定接受位点结合,抑制特异的基因组,加快某些特异 DNA 的转录速率。最近有资料表明,雌激素及孕激素等甾体的受体位于细胞核内,而糖皮质激素受体在胞浆及胞核内均存在。甾体激素作用的这种基因机制被认为同样适用于神经组织。     

Exendin-4的研究进展

Exendin-4是从希拉毒蜥唾液中分离的一种多肽激素,由39个氨基酸残基组成,与胰高血糖素样肽1（GLP-1）有53%的同源性.Exendin-4具有高度的组织特异性,仅在希拉毒蜥的唾液腺中表达.Exendin-4首先翻洋成N端多余45个氨基酸残基的前体,然后在激素原转化酶催化下分解产生具有生物活性的Exendin-4.Exendin-4的N端是一段不规则卷曲,第7～28氨基酸残基形成α螺旋,C端是不规则亲水片段.Exendin-4的受体是G蛋白,N端是激活受体信号转导途径的关键区域,中间部位和C端是受体结合域.Exendin-4与GLP-1类似,可提高胰岛素基因的转录水平,刺激胰岛素的释放,从而控制血糖浓度,但GLP-1的半衰期2分钟,Exendin-4半衰期却长达9.57小时,因而在治疗Ⅱ型糖尿病方面具有广阔的前景.     

人雄激素受体激素结合区cDNA片段在大肠杆菌中的克隆、表达及其活性检测

人雄激素受体(hAR)为甾体激素受体超家族的成员之一,由一条多肽链组成,分三个功能区:N端区、DNA结合区和激素结合区。C端的激素结合区,是与雄激素结合并介导其发挥生物学效应的关键区域,在目前导致男性两性畸形的主要疾病雄激素抵抗症的研究中发现,该区域内的基因突变是导致雄激素与hAR结合异常的主要原因,但这种由基因突变引起的结合异常的分子机制尚不清楚。根据由hARcDNA推演的氨基酸序列分析表明,hAR分子中不存在二硫键,且氨基酸残基上无糖基化修饰。 以前,由于hAR在组织中含量极低且极易     

田鼠婚配制度的神经内分泌基础

作为繁殖行为的一种表现形式,婚配制度是通过长期进化而形成的,具有种属特异性及可遗传性。因此,不同的婚配制度具有不同的生理基础。这种生理基础由3级结构组成：神经直接启动并维持繁殖行为;激素或通过诱导特异神经通路的发育或直接激活神经传导影响繁殖行为;基因则可能是通过调节激素的代谢和作用方式来控制与繁殖行为相关的神经系统。田鼠脑中涉及婚配制度的区域集中在视前区中部（MPOA）,腹被盖区（VTA）,膈部及纹状体端部。起作用的激素主要是催产素（OT）和后叶加压素（AVP）。导致田鼠形成不同婚配制度的最终原因可能是这两种激素受体基因上的差异。受体基因调控区的启动子序列存在变异,导致脑中受体基因在表达区域上的差异,进而使激素激活不同的神经通路,产生不同的繁殖行为及婚配制度。     

截短型细胞毒素Gelonin的分子构象和生物活性

为了探索免疫络合物中具杀伤靶细胞的毒素,gelonin的结构与功能的关系,根据化学合成的gelonin基因序列和3维分子构象设计了N端区Gly,Leu,Asp和/或C端区Asp,Lys,Asp,Pro,Lys缺失的gelonin. 以重组质粒pE gel为模板,在相应引物存在下,用PCR法获得5′端区和/或3′端区碱基序列缺失的gelonin基因片段. 经克隆、表达和纯化得到3种截短型gelonin（G-N3、G-C5、G-N3C5）. CD谱和荧光谱表明,完整型gelonin（G-O）与截短型gelonin的分子构象有明显的差异.它们的构象变化与类DNase活性和抑制肿瘤细胞生长的能力均为G-O≥ G-N3＞G C5＞G-N3C5. 结果再一次证明了具有α+β型结构蛋白,gelonin的构象与生物活性的一致性.