RT—PCR检测蓝舌病毒技术的建立

蓝舌病毒 (ＢｌｕｅｔｏｎｇｕｅＶｉｒｕｓ,ＢＴＶ)是呼肠孤病毒科 (Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ)环状病毒属 (Ｏｒｂｉｖｉｒｕｓ)的代表种 ,含10个节段的双链ＲＮＡ(ｄｓＲＮＡ)作基因组。其中 ,Ｌ2节段编码ＢＴＶ型特异性抗原ＶＰ2 ,Ｌ3节段和Ｓ7节段编码群特异性抗原多肽ＶＰ3和ＶＰ7。其中 ,ＶＰ7是ＢＴＶ粒子的主要结构多肽之一 ,其编码基因序列保守。ＶＰ7具有高度的抗原性 ,能刺激被感机体产生强的群特异性免疫反应[1] 。蓝舌病毒的易感宿主是牛、羊及野生反刍动物 ,死亡率高达 6 0 %～ 70 %以上 ,并且至今仍无有效的防治措施 ,对畜牧业…     

大花蕙兰的组织培养和快速繁殖

1植物名称　大花蕙兰 (Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍｆａｂｅｒｉ )。2　材料类别　幼芽、幼根。3　培养条件　以ＶＷ和 1 2ＭＳ为基本培养基。诱导圆球茎培养基 :(1 )ＶＷ 6 ＢＡ 0 .3ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) ＫＴ 0 .3 ＮＡＡ 1 .2 ＣＭ 1 5 0ｍｌ·Ｌ-1 0 .2 %活性炭 ;(2 )ＶＷ 6 ＢＡ 0 .3 ＫＴ 0 .3 ＮＡＡ 2 .0 0 .3 %ＣＨ ＣＭ 1 5 0ｍｌ·Ｌ-1 0 .2 %活性炭。圆球茎增殖培养基 :(3 )ＶＷ 6 ＢＡ 0 .3 ＫＴ 0 .3 ＮＡＡ 0 .2 0 .2 %活性炭。壮苗生根培养基 :(4) 1 2ＭＳ ＧＡ1 .0 ＮＡＡ 0 .1 1 5 %香蕉泥 ;(5 ) 1 2ＭＳ…     

用不同方法把烟草花叶病毒RNA基因导入植物原生质体的…

应用电激法和聚乙二醇法以及脂质体协调的上述两种方法对烟草和青菜原生质体进行烟草花叶病毒ＴＭＶ－ＲＮＡ的导入试验,并应用酶标免疫技术、电镜观察、半叶接种和十无烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法对在原生质体中增殖的ＴＭＶ进行鉴定。实验证明,虽然电激法和聚乙二醇法均能有较地将处源病毒基因导入植物原生质体,但经阳离子脂质体处理后的ＴＭＶ－ＲＮＡ,其转染效率可提高１０倍以上。ＴＭＶ在原生质体转染４８小时后     

玉叶金花的组织培养和植株再生

1　植物名称　玉叶金花 (Ｍｕｓｓａｅｎｄａｐｕｂｅｓｃｅｎｓ)。2　材料类别　嫩茎、幼叶。3　培养条件　以ＭＳ为基本培养基。诱导愈伤组织附加 :( 1 )ＮＡＡ 0 .2ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＫＴ0 .2 5 6 ＢＡ 0 .1 ;( 2 )ＮＡＡ 0 .5 ＫＴ 0 .2 5 6 ＢＡ0 .1 ;( 3)ＮＡＡ 0 .5 6 ＢＡ 0 .1 ;( 4 ) 2 ,4 Ｄ 0 .2 ＫＴ0 .1。继代培养基附加 :( 5 ) 6 ＢＡ 4 ＫＴ0 .2 5 ＩＡＡ 0 .5。不定芽诱导及增殖培养基附加 :( 6)6 ＢＡ 4 ＫＴ 0 .5 ＩＡＡ 0 .1。生根培养基 :( 7)1 /2ＭＳ ＩＢＡ 0 .5。上述培养基均含 0 .7%琼脂、3%蔗…     

紫叶酢浆草的组织培养

1　植物名称　紫叶酢浆草 (Ｏｘａｌｉｓｖｉｏｌａｃｅａ)。2　材料类别　叶片、叶柄。3　培养条件　培养基有 :( 1 )ＭＳ ＮＡＡ 0 .5ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ;( 2 )ＭＳ ＩＢＡ 1 .0 ＮＡＡ 0 .5 ;( 3)ＭＳ ＩＢＡ 1 .0 ＮＡＡ 0 .5 ＫＴ 1 .0 ;( 4 )ＭＳ ＩＢＡ 0 .5 ＮＡＡ 0 .5 ＫＴ 1 .0。以上培养基含蔗糖 2 5 ｇ·Ｌ- 1 、琼脂 0 .5 %,ｐＨ 5 .8。培养温度为 2 2～ 2 5℃ ,照光 1 2ｈ·ｄ- 1 ,光照度为 2 0 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　叶柄的分化情况　取盆栽紫叶酢浆草叶片与叶柄 ,流水洗净 ,用 70 %酒精浸洗 30ｓ…     

人类疱疹病毒6型感染细胞免疫学特性研究

采用间接免疫荧光法、ＡＰＡＡＰ法及ＭＴＴ法,研究了人类疱疹病毒６型（ＨＨＶ６）中国南京地方株ＣＮ５感染细胞病毒抗原表达的形态学和动力学特征、ＣＤ抗原表达阳性细胞百分率的变化及ＰＨＡ诱导的细胞增殖反应的改变。结果显示,ＣＮ５感染脐血单个核细胞（ＣＢＭＣｓ）后８～１２ｈ即可在细胞内检出病毒抗原,至接种后４８ｈ,病毒抗原阳性细胞可达３６％;ＣＮ５感染ＣＢＭＣｓ和成人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）后可引起两者ＣＤ３阳性细胞减少、ＣＤ４阳性细胞增多,而对ＣＤ２、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ阳性细胞百分率未见明显影响;ＣＮ５感染细胞裂解液对ＰＨＡ诱导的ＰＢＭＣｓ增殖反应具有抑制作用,这种抑制作用与该裂解液的蛋白浓度之间呈一剂量依赖关系,且可被ＨＨＶ６抗血清所逆转。     

EB病毒胸苷激酶基因的定向克隆

采用异硫氰酸胍（ＧｕＳＣＮ）和硅藻从Ｂ９５－８细胞中快速抽摸板ＤＮＡ。根据ＥＢ病毒（ＥＢＶ）Ｂ９５－８株ＤＮＡ全序列及编码ＥＢＶ胸苷激酶（ＴＫ）的开放读框ＢＸＬＦ１的结构,设计合成一对引物,并在引物的５′一端分别引入ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ切点,用ＰＣＲ技术扩增出一含完整的ＥＢＶＴＫ基因的１．８４３ＫｂＤＮＡ片段,ＮｃｏＩ酶切分析鉴定,ＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ双酶切ＰＣＲ产物和载体,使目的基因定向克隆至选     

广东两株人免疫缺陷病毒的分离和鉴定

从我省两名经性途径感染艾滋病的病人中采血,分离外周血单核细胞（ＰＢＭＣｓ）,将其与正常人ＰＢＭＣｓ共培养分离人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）,３周后检测上清ＨＩＶ－１ｐ２４抗原（ＥＬＩＳＡ法）超过阈值。将共培养第四周细胞和上清分别感染Ｈ９细胞（Ｔ细胞淋巴瘤传代细胞）,一周后检测ＨＩＶ－１ ｐ２４怕,证明有病毒生长。用ＨＩＶ－１ ＥＮＶ基因引物的套式聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）证实,两株新分离的病毒     

从云南烟草上检测到的黄瓜花叶病毒亚组Ⅱ分离物*

在对云南省烟草病毒病的研究中,分离到一种直径约２６￣３０ｎｍ的球形病毒。提纯病毒进行的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ发现一条５５ｋＤ蛋白带。５５ｋＤ蛋白Ｎ－端１０个氨基酸与ＣＭＶ亚组Ⅱ的Ｑ株系外壳蛋白Ｎ－氨基酸同源性为１００％。以ＣＭＶ－Ｑ抗血清对５５ｋＤ蛋白进行了Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测,发现５５ｋＤ蛋白与ＣＭＶ Ｑ株系抗血清有血清学反应。根据已报道的ＣＭＶ亚组Ⅱ外壳蛋白基因序列合成引物,采用ＲＴ－ＰＣＲ     

蒟蒻薯的组织培养及植株再生

1　植物名称　薯 (Ｔａｃｃａｃｈａｎｔｒｉｅｒｉ) ,又名箭根薯、老虎须、黑蝴蝶等。2　材料类别　种子或茎尖。3　培养条件　种子萌发培养基 :( 1 ) 1 /2ＭＳ ;( 2 )ＭＳ。芽诱导及增殖培养基 :( 3)ＭＳ + 6 ＢＡ 3.0～5 .0ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) +ＮＡＡ 0 .3～ 0 .0 5 ;( 4 )ＭＳ+ 6 ＢＡ 2 .0～ 1 .0 +ＫＴ 2 .0～ 1 .0 +ＮＡＡ 0 .0 5。生根培养基 :( 5 )ＭＳ + 6 ＢＡ 0 .5 +ＩＢＡ 0 .3;( 6)1 /2ＭＳ +ＩＢＡ 0 .5。以上培养基均附加 0 .7%琼脂 ,ｐＨ 5 .4～ 5 .6。培养基 ( 1 )、( 2 )、( 6)的糖用量为 2 0ｇ·Ｌ- 1 ;培养…     

蚕豆萎蔫病毒—新疆番茄分离株的鉴定

在新疆番茄斑驳病株上分离出一种球状病毒,回接到番茄上产生斑驳症状。病毒粒体为２０面体,平均直径２５ｎｍ。经汁液摩擦接种可感染昆诺阿藜、苋色藜、蚕豆、番茄等１８种植物,不感染菜豆、豇豆、豌豆、六叶茄、黄瓜等。可由桃蚜传毒。在琼脂双扩散试验中,能与蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）抗血清产生明显的沉淀线,与豇豆花叶病毒（ＣｐＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）抗血清均不发生反应。纯化病毒紫外扫描呈典型的核蛋白吸收叫线,病毒衣壳蛋白由两种蛋白亚基构成,其分子量分别为４５９００和２０４００道尔顿,由１８种氨基酸约２５５个氨基酸残基组成。病毒核酸是双组份的,它们的分子量为１３２００００和２３４００００道尔顿。根据上述结果认为该病毒是蚕豆萎蔫病毒侵染番茄的一个株系。     

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)大立方形多角体突变株的分子生物学研究

利用空斑技术,从既能形成多角体又含ＴＫ酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫ中,纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫｍｔ５１３。用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＢｇｌⅡ及ＫｐｎⅠ等限制性内切酶对它做了酶切分析,并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分全序列测定结果,发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变,导致了第２５位的氨基酸密码子由ＧＧＴ变为ＧＡＴ,该位氨基酸由甘氨酸（Ｇｌｙ）变为天冬氨酸（Ａｓｐｑ）还利用ＰＣＲ技术扩增出突变了的多角体蛋白基因部分片段,并将它克隆入转移载体质粒ｐＥＶ５５,与不形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ＨＢｓＤ４ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞,结果产生同样的大立方形多角体病毒。     

不依赖甲硫氨酸的翻译起始

Ｓａｓａｋｉ等在ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ 2 0 0 0年第 4期上报道了一种不依赖甲硫氨酸的翻译起始方式[1] 。ＰＳＩＶ (Ｐｌａｕｔｉａｓｔａｌｉｉｎｔｅｓｔｉｎｅｖｉｒｕｓ)是一种昆虫ＲＮＡ病毒 ,属蟋蟀麻痹样病毒组 (Ｃｒｉｃｋｅｔｐａｒａｌｙｓｉｓ ｌｉｋｅｖｉｒｕｓｅｓ) ,为正链ＲＮＡ病毒。属于该组的还有ＤＣＶ、ＲｈＰＶ、ＨｉＰＶ等。该组病毒的理化性质与哺乳动物的小ＲＮＡ病毒 (ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｕｓ)相似 ,但基因图 1　 (Ａ)ＰＳＩＶ基因组结构 ;(Ｂ)预测的外壳蛋白编码区上游的茎环结构组织不同。…     

Nested PCR在检测牛白血病病毒前病毒中的应用

用ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ检测牛白血病病毒的前病毒形式。从牛白血病病毒基因ｇｐ５１上选择两对引物进行ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ体外扩增,产物经２％ａｇａｒｏｓｅ凝胶电泳和用生物素标记的探针鉴定,证实其特异性。结果表明该方法能从两个ＢＡＴ－ＢＬＶ细胞内检测出ＢＬＶ的前病毒ＤＮＡ形式。     

中国烟草曲叶病毒广西株的初步研究

双生病毒 (Ｇｅｍｉｎｉｖｉｒｕｓ)是一种具有孪生颗粒形态的单链环状ＤＮＡ植物病毒[1] 。根据基因组结构特征及传播介体 ,双生病毒可分为三个亚组[1] :亚组Ⅰ双生病毒全部为叶蝉传播的单组份基因组病毒 ,基因组大小在 2 .6～ 2 .8ｋｂ之间 ,其代表病毒是玉米条纹病毒 (ＭＳＶ) ;亚组Ⅱ双生病毒是单组份基因组病毒 ,基因组大小在 2 .7～ 3.0ｋｂ之间 ;亚组Ⅲ双生病毒全部为粉虱 (Ｂｅｍｉｓｉａｔａｂａｃｉ)传播 ,基因组大小为 2 .5～ 2 .8ｋｂ ,除番茄曲叶病毒ＴＬＣＶ ＡＵＳ[2 ] 等几个病毒为单组份基因组外 ,大多数亚组Ⅲ双生病病毒…     

核桃的组织培养和快速繁殖

植物名称　薄壳香核桃 (Ｊｕｇｌａｎｓｒｅｇｉａｃｖ .“ｂｏｋｅｘｉａｎｇ”)。2　材料类别　 3～ 4年生嫁接苗。。3　培养条件　培养基 :( 1 ) 1 /2ＤＫＷ ＢＡ1～ 2ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) ＩＢＡ 0 .0 1 Ｖｃ2～ 5 ;( 2 )ＤＫＷ ＢＡ2 ＮＡＡ0 .5 ＧＡ0 .5 ;(3)ＤＫＷ ＢＡ 1～ 2 ＩＢＡ 0 .0 1 ;( 4 ) 1 / 2ＤＫＷ ＩＢＡ 2 ＮＡＡ 2 ;( 5 )蛭石培养基。蔗糖浓度为 3.0 % ,琼脂浓度为 0 .6 %～ 0 .8% ,ｐＨ 5 .8,培养温度 ( 2 5± 2 )℃ ,每天光照1 2ｈ ,光照度 1 5 0 0～ 2 0 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　芽的诱导…     

条纹十二卷的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　条纹十二卷 (Ｈａｗｏｒｔｈｉａｆａｓｃｉａｔａ) ,大型和小型植株各 1种。2　材料类别　花葶。3　培养条件　启动脱分化培养基 :( 1 )改良ＭＳ ＫＴ 2ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＮＡＡ 1 ＩＢＡ 0 .5 2 0 %椰子液体胚乳 ;不定芽诱导及增殖培养基 :( 2 )改良ＭＳ 6 ＢＡ 1 ＫＴ 2 ＩＢＡ 0 .4 2 0 %椰乳 ;长期继代增殖培养基 :( 3)改良ＭＳ 6 ＢＡ 1 ＮＡＡ0 1或 ( 4 )改良ＭＳ ＫＴ 2 ＩＢＡ 0 2 ,省去椰乳 ;诱导生根培养基 :( 5) 1 /2ＭＳ(大量元素减半 ,微量元素免用 ) ＩＢＡ 0 3。上述培养基均加 3%白…     

星花绣线菊的组织培养及快速繁殖

1　植物名称　星花绣线菊 (Ｓｐｉｒａｅａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒ.ｓｔｅｌｌｅｒｉｓ)。2　材料类别　茎尖、茎段、叶片、叶柄。3　培养条件　 ( 1 )愈伤组织诱导培养基 :ＭＳ 2 ,4 Ｄ 2 .0ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＫＴ 0 .3;( 2 )愈伤组织继代培养基 :6,7 Ｖ 2 ,4 Ｄ 2 .0 ＫＴ 0 .2 5 ＮＡＡ 1 .0 ＬＨ 2 0 0 0 ;( 3)芽诱导培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 2 .0 ＮＡＡ 0 .1 ;( 4 )芽增殖培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ0 .2 5 ＮＡＡ 0 .1 ;( 5 )生根培养基 :1 /2ＭＳ 6 ＢＡ0 .2 5 ＮＡＡ 0 .5。上述培养基的蔗糖含量为 3% ,琼脂为 0 .7% ,…     

斜纹夜蛾多角体病毒包埋型病毒受体的鉴定

蔗糖密度梯度离心法提纯斜纹夜蛾核多角体病毒（＄Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｌｉｔｕｒａ　　ｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｄｒｏｖｉｒｕｓ,　ＳｐｌｔＭＮＰＶ）包埋型病毒粒子（ｐｏｌｙｈｅｄｒａ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｖｉｒｕｓ,ＰＤＶ）,以此病毒粒子作抗原,免疫家兔获得抗血清;用ＳＤＳ裂解缓冲液提取斜纹夜蛾幼虫中肠组织细胞总蛋白。采用病毒铺覆蛋白印迹技术（ＶＯＰＢＡ）,利用抗ＰＶＤ抗血清对病毒受体进行检测,结果表明斜纹夜蛾中肠细胞总蛋白中４０ｋＤ、７３ｋＤ、８５ｋＤ的三种蛋白能够结合ＰＤＶ。     

侵染新疆甜菜的两种病毒分离物的研究

在新疆甜菜的根部和叶片分离到两个球状病毒分离物。从病毒形态、生物学及物化性质等研究结果证明这两个分离物实是一种病毒。病毒粒体力２０面体,直径约２８ｎｍ,回接到甜菜上产生环斑和沿脉线纹最后形成坏死斑。此外还侵染苋色藜,昆诺阿黎,番杏,菠菜等,引起局部坏死斑。在普通烟,心叶烟,菜豆,黄瓜,蕃茄上无症状侵染,病毒致死温度为７０℃,１０分钟。体外存括期１３天以上,冻干病叶７年后仍有侵染力。通过ＰＥＧ沉淀、差速离心、琼脂糖柱层析及蔗糖梯度离心,可得到较高浓度的纯化病毒,病毒的紫外吸收最低值在２４５ｎｍ,最高值在２６０ｎｍ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,病毒外壳蛋白的分子量为２．７×１０￣４道尔顿,病毒基因组核酸为三个组份,分子量分别为３．０８ｋｂ,１．２８ｋｂ和０．８５ｋｂ。在琼脂双扩散实验中,能与番茄黑环病毒（ＴＢＲＶ）抗血清产生较弱的沉淀线,与黄瓜花叶病毒（ＣＷＶ）、烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）、烟草坏死病毒（ＴＮＶ）、香石竹环斑病毒（ＣａＲＳＶ）的抗血清不发生反应。