FMRP蛋白6种异构体与FXR1蛋白间的相互作用

脆性Ｘ综合征是最常见的遗传性智力低下疾病,其致病基因ＦＭＲ１存在复杂的选择剪接．ＦＭＲ１基因的功能及其选择剪接的生物学意义尚未阐明．ＦＭＲ１蛋白（ＦＭＲＰ）与脆性Ｘ相关蛋白１（ＦＸＲ１）可形成异源二聚体．采用酵母双杂交体系研究了由ＦＭＲ１第１２、１４、１５外显子不同选择剪接方式产生的６种ＦＭＲＰ异构体与ＦＸＲ１蛋白的相互作用,以期从蛋白质相互作用的角度探讨ＦＭＲ１基因选择剪接表达的生物学意义．结果表明各种异构体与ＦＸＲ１相互作用的强度随异构体蛋白肽链长度的增长而减弱．外显子１２、１４、１５的选择剪接虽然不能开关式控制ＦＭＲＰ与ＦＸＲ１的相互作用,但其Ｃ端亲水区在一定程度上影响相互作用的强弱．提示选择剪接对ＦＭＲＰ与ＦＸＲ１异源二聚体的稳定性产生影响．     

分子遗传学研究的新焦点：动态突变与脆性X综合征

近年来,对脆性位点分子生生物学的研究已取得突破性进展,脆性Ｘ综合征智力低候选基因ＦＭＲ－１已被克隆,其５＇端外显子是由一段不稳定的微随体序列ｎ组成,该ｎ重复序列拷贝数的遗传是不稳定的,其扩增长度的变化与脆性与点的表达,ＣｐＧ岛的甲基化,ＦＭＲ－１基因的功能,临床表型具有相关性,分子遗传学上把 这种独特的遗传形式称为“动态突变”。这一发现,为脆性Ｘ综合征及其它与动态突变有关的遗传病的研究提供了重要的     

降钙素的基因结构与表达调控

降钙素与降钙素基因相关肽（ＣＴ／ＣＧＲＰ）基因编码一组多肽,即降钙素（ＣＴ）、降钙素的Ｎ端肽和Ｃ端肽、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）及淀粉不溶素（Ａｍｙｌｉｎ）。ＣＴ／ＣＧＲＰ基因转录而成的ｍＲＮＡ前体,在不同组分中通过选择性加工形成ＣＴ ｍＲＮＡ或ＣＧＲＰｍＲＮＡ,再通过翻译及蛋白质加工,最后形成成熟的降钙素或降钙素基因相关肽。本简单介绍一下降钙素的基因结构及表达调控方面的研究进展。     

脆性X智力低下基因:分子遗传学和生物化学研究

脆性Ｘ综合征是最常见的遗传性智力低下疾病。该病是由于脆性Ｘ智力低下基因（ＦＭＲ１）功能丧失所致。ＦＭＲ１基因位于Ｘ染色体长臂末端,由１７个外显子组成,覆盖约３８ｋｂ,转录方向从着丝粒到端粒（ＧｅｎＢａｎｋＬ２９０７４）。分子遗传学研究和突变分析显示,...     

FMR1基因功能研究的新进展

ＦＭＲ１基因突变引起表达缺乏,导致最常见的遗传性智力低下疾病－脆性Ｘ综合征。ＦＭＲ１基因编码的蛋白与翻译过程的调控。     

一个与玉米基因表达沉默有关的cDNA片段的克隆及序列分析

利用ｃＤＮＡ－ＡＦＬＰ技术分离了一个与玉米基因表达沉默有关的ｃＤＮＡ片段,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析表明,该基因在Ｍｏ１７的苗期和雄穗生长锥伸长期都表达,但在Ｍｏ１７的苗期和雄穗生长期都表达,但在Ｍｏ１７与其亲缘关系较摈 另一亲本杂交的Ｆ１代中却表现沉默,即表现单亲沉默。同源性分析表明,该克隆片段与ＧｅｎＢａｎｋ中玉米通用调控因子（ＧＲＦ）部分区段有９８．６％的同源性,与玉米通用调控因子编码的ｍＲＮ     

鲤体长与体内元素富集数学模型

鲤体长与体内元素富集数学模型王继忠,徐小清（中国科学院水生生物研究所,武汉４３００７２）ＡＭＡＴＨＥＭＡＴＩＸＡＬＭＯＤＥＬＦＯＲＢＯＤＹＬＥＮＧＴＨＡＮＤＥＬＥＭＥＮＴＣＯＮＴＥＮＴＩＮＴＨＥＢＯＤＹＯＦＣＡＲＰ￥ＷａｎｇＪｉｚｈｏｎｇａｎｄＸｕＸ...     

海藻糖合酶基因的克隆及其植物表达载体的构建

以担子菌灰树花的菌丝体中提取总ＲＮＡ,并纯化出ｍＲＮＡ,ｍＲＮＡ经反转录合成ｃＤＮＡ第一链,以ｃＤＮＡ第一链为模板经ＰＣＲ扩增海藻糖合酶（Ｔｓａｓｅ）基因,获得一长约２．２ｋｂ的片段,把该片段连接一ｐＧＥＭ－Ｔ－ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ上进行测序,其全长共２１９９ｂｐ。随后将此片段以正向插入植物表达载体ｐＢＩ１２１的ＨｉｎｄⅢ＋Ｘｂａｌ位点构建ｐＵＢ,再把海藻糖合酶基因以正向插入载体ｐＵＢ的ＢａｍＨ     

显微注射法制备转基因小鼠模型的研究

将外源基因ＭＴ０ＬＭＰ,ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（Ｘ１）－ＬＭＰ及ＨＬＡ－ＤＲα分别注入昆明小鼠受精卵雄原核中,结果得到有这三种外源基因整合的三个转基因小鼠系,导入基因的整合率分别为８％,８０％骸６６．７％,它们的子一代及子二代（Ｆ２）基因中也均有外源基因整合,并且导入ｐＺｉｐ－ＮｅｏＳＶ９Ｘ１）－ＬＭＰ基因后经反转录聚合酶链反应,检测ｍＲＮＡ发现有该基因的表达,说明本法制备转基因小鼠是可行的。应用荧光     

大鼠FMR1同源基因cDNA的克隆、测序与选择剪接的初步分析

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从新生大鼠脑组织总ＲＮＡ扩增大鼠ＦＭＲ１同源基因的ｃＤＮＡ片段,克降至ｐＵＣ１８质粒中进行序列分析．获得从终止密码子起共１６８１ｂｐ的编码序列,尚缺少约２００ｂｐ的５′序列．所克隆的这部分大鼠ＦＭＲ１ｃＤＮＡ,不含有对应于人ＦＭＲ１基因的外显子１２及外显子１７第一和第三剪接受点之间的序列,提示大鼠ＦＭＲ１基因也有选择剪接表达．同源性分析显示,大鼠ＦＭＲ１与小鼠ＦＭＲ１基因的同源性为９７．７％,与人ＦＭＲ１基因的同源性为９４．９％;与小鼠ＦＭＲＰ（ＦＭＲ１蛋白）的氨基酸序列同源性为９８．４％,与人ＦＭＲＰ的氨基酸序列同源性为９７．９％．以大鼠ＦＭＲ１ｃＤＮＡ片段为探针检测到大鼠不同组织中ＦＭＲ１基因的选择剪接表达．上述结果为以大鼠为动物模型深入研究ＦＭＲ１基因功能奠定了基础．     

地塞米松和肺成纤维细胞对大鼠胎肺表面活性物质合成的影响

为提高ＤＥＸ对新生儿呼吸窘迫综合征（ＮＲＤＳ）的防治,本文研究了地塞米松（ＤＥＸ）促进肺表面活性物质（ＰＳ）合成的作用机制。用分离培养的２０天大鼠胚胎肺泡Ⅱ型细胞为材料,观察了单独用ＤＥＸ、用与不用ＤＥＸ刺激后的成纤维细胞条件培养液（ＤＥＸＦＣＭ、ＦＣＭ）对肺泡Ⅱ型细胞ＰＳ中磷脂合成及特异性肺表面活性物质蛋白质ＳＰＢ、ＳＰＣｍＲＮＡ表达的影响。结果表明,ＤＥＸ本身及未用ＤＥＸ刺激的ＦＣＭ对肺泡Ⅱ型细胞的上述三种指标均没有影响,而ＤＥＸ刺激后的ＤＥＸＦＣＭ使这三个指标有不同程度的增加效应。提示糖皮质激素刺激肺泡Ⅱ型细胞ＰＳ合成增加是由成纤维细胞介导的     

FⅧ基因倒位与血友病甲

最近发现ＦⅧ基因的内含子２２倒位是约半数重型血友病甲患的共同分子缺陷。由ＦⅧ基因内含子２２内的ＦⅧＡ的基因拷贝和上游约５００ｋｂ处的两个ＦⅧＡ的基因拷贝这一发生同源重组在Ｘｑ２８所引入的大片段。     

Northern Blot分析与原位杂交对大鼠腹腔巨噬细胞TNF－αmRNA检测的比较

本文比较了Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ与原位杂交对大鼠腹腔巨噬细胞（Ｍ）ＴＮＦ－αｍＲＮＡ的检测结果。对照组Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ为阴性,而原位杂交则见胞浆内有一定量ＴＮＦ－αｍＲＮＡ存在;ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）刺激组,则两种方法均显示Ｍ转录ＴＮＦ－αｍＲＮＡ明显增多。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ可对此作定量比较,而原位杂交则显示该ｍＲＮＡ在核周围相对较密。两种方法结合,可互相取长补短,以利更好、更全面地观察、分析某种基因变化。     

野生型p53基因对内皮细胞细胞间粘附分子-1表达的影响

细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）是介导白细胞与内皮细胞粘附的重要粘附分子．为研究野生型ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响,分别采用流式细胞术和ＲＴ－ＰＣＲ／ＨＰＬＣ方法测定ＩＣＡＭ－１蛋白及ｍＲＮＡ水平．静息状态的内皮细胞表面结构性地表达有少量的ＩＣＡＭ－１,在肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα,１０～１０００Ｕ／ｍｌ）诱导下,其表达呈剂量依赖性增加．将ｐ５３基因导入内皮细胞,则显著抑制ＴＮＦα诱导的内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达．ｐ５３基因的导入对静息状态内皮细胞表面结构性表达的ＩＣＡＭ－１影响较小．ｐ５３基因主要通过降低ＩＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ水平而抑制内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达,但对蛋白的抑制程度小于对ｍＲＮＡ的抑制程度．提示：ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响除转录水平控制外,还存在转录后水平的调控     

Epstein-Barr病毒BNLF-1基因的克隆及其在PA317细胞中的表达

本文报道以人Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒的潜伏膜蛋白基因ＢＮＬＦ－１作为目标基因,插入至逆转录病毒载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）的克隆位点上,由此获得重组逆转录病毒载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）－ＬＭＰ及其反义载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）－ａｎｔｉ－ＬＭＰ,通过质粒ＤＮＡ的电转染和Ｇ４１８培养基筛选,然后对１０个抗性克隆进行基因整合分析,获得６个含ＭＬＶ－ＬＴＲ／ＢＮＬＦ－１融合基因的阳性克隆,采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证明,在克隆细胞中表达了２．６ｋｂ的ｍＲＮＡ片段及相应的蛋白质分子,这是由ＢＮＬＦ－１基因的ＥＤＬ１启动子表达的产物。     

载脂蛋白A—I基因表达调控的研究进展

载脂蛋白Ａ－Ｉ是一种重要的血浆蛋白,其基因表达具有明显的组织特异性、种属特异性和发育阶段桃煨浴ＡｐｏＡ－Ｉ基因５’调控区的肝细胞特异性增强子等顺式作用元件同ＡＲＰ－１、ＨＮＦ－４、ＲＸＲａ等反式作用因子相作用,调控该基因的特异性表达。     

汉滩病毒A9株M基因片段在重组痘苗病毒中的表达及鉴定

为发展国产化肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒基因工程疫苗,选择了汉滩病毒Ａ９株Ｍ基因片段为目的基因,构建转染质粒ｐＪＳＢＡ９Ｍ。以携带Ｌａｃ基因的重组病毒为亲本,使表达载体ｐＪＳＢ－Ａ９Ｍ上的Ｍ片段与痘苗病毒内的Ｌａｃ基因重组,将Ｌａｃ置换成Ａ９Ｍ片段。用蓝白斑法筛选重组痘苗病毒,经ＰＣＲ扩增证实Ａ９Ｍ片段重组入痘苗病毒基因组内。重组痘苗病毒感染的Ｖｅｒｏ Ｅ６细胞,用抗糖蛋白单克隆抗体（ＨＣＯ２、     

mRNA差异显示技术在动物早期胚胎发育相关基因研究中的应用

动物从卵裂开始的早期胚胎发育始终伴随着ｍＲＮＡ不断的合成与降解。最初受着受精卵内母体ｍＲＮＡ的控制。当这些ｍＲＮＡ在发育过程中逐渐被降解时,有些动物（如小鼠）在比较早的时期已有新基因的转录;而有些动物（如鱼类、两栖类）迟到囊胚中期以后,合子核的基因才开始转录新的ｍＲＮＡ。ｍＲＮＡ这种有规律的代谢活动控制着细胞的分化、胚层的形成以及模式形成（ｐａｔｅｒｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）。所有这些ｍＲＮＡ水平上的变化都可以用ｍＲＮＡ差异显示法（ｍＲＮＡｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ）检测出来并进而获得与早期胚胎发育有关的基因。ｍＲＮＡ差异显示法是由Ｌｉａｎｇ和Ｐａｒｄｅｅ于１９９２年建立起来的,用于显示两种不同组织之间ｍＲＮＡ差异的方法。基于绝大多数ｍＲＮＡ有一个ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴,选用一个较特殊的３’端引物─５’Ｔ１１ＭＮ３’,其中Ｍ可以是ｄＡＴＰ,ｄＣＴＰ,ｄＧＴＰ之一,而Ｎ可以是ｄＡＴＰ,ｄＴＴＰ,ｄＣＴＰ,ｄＧＴＰ之一,进行逆转录时,１／１２的ｍＲＮＡ可被逆转录为ｃＤＮＡ。这种ｃＤＮＡ第一链被用来ＰＣＲ扩增,所使用的３’端引物与逆转录引物相同,而５’端引物为１０个碱基的一段寡核苷酸,这类任意（ａｒｂｉｔｒａｒ     

人Nmi mRNA编码区存在变异形式

Ｎｍｉ基因编码一种可与Ｍｙｃ相互作用的蛋白质．在人红白血病细胞系ＴＦ－１细胞去细胞因子ＧＭ－ＣＳＦ后８ｈ,发现ＮｍｉＲＮＡ表达水平升高．利用ＰＣＲ方法从中扩增ＮｍｉｃＤＮＡ编码区,发现除正常大小的扩增片段外,还有一比公布核酸序列小约１００～２００ｂｐ的扩增片段．序列分析表明该片段为编码区第３３７～５０９位的碱基缺失,由ＧＴＴＣＣＡＴＴＧＣＧ１１个碱基取代,形成一个开放读码框架,编码２５４个氨基酸,比野生型Ｎｍｉ编码的３０７个氨基酸少５３个氨基酸．     

重叠片段法克隆全长人肝细胞生长因子cDNA

通过重叠片段的ＲＴ－ＰＣＲ方法,从人胎盘组织克隆了人全长肝细胞生长因子ｃＤＮＡ片段（约２２００ｂｐ）,经酶切证实和测序分析都表明该片段确为人ＨＧＦｃＤＮＡ。本文所用方法解决了扩增较长目的基因片段时,由于ＲＮＡ酶及反转录酶的ＲＮＡ酶Ｈ活性和ｍＲＮＡ二级结构等多种因素的影响,使获取长片段ｃＤＮＡ难以成功的难点