北京地区成人呼吸道感染病人中人偏肺病毒感染情况的初步分析

目的:了解北京地区成人呼吸道感染患者中人偏肺病毒(hMPV)的感染情况、流行分布和临床表现特点。方法:采集2010年5月至2011年4月北京地区成人呼吸道感染患者鼻咽拭子标本413份,利用巢式PCR法进行hMPV筛查,对PCR阳性片段进行核酸序列测定,确定hMPV感染基因型别;同时,分析hMPV感染的流行病学特点,并对感染阳性患者进行临床表现的初步分析。结果:413份鼻咽拭子标本中检出hMPV阳性4份(0.97%),分别存在于2010年8月、10月和2011年2月、4月,其中1例合并鼻病毒感染;感染患者临床表现主要是发热、鼻塞、流涕、头痛、咳嗽,有1例出现呕吐和腹泻;hMPV阳性片段系统进化分析发现这4例感染中的3例为B2型,1例为A2b型。结论:北京地区成人呼吸道感染患者中存在hMPV感染,其基因型为B2和A2b型。     

新型人冠状病毒HCoV—NL63和HCoV-HKU1的研究进展

多年来,人们公认的人冠状病毒包括HCoV-229E和HCoV-0C43等2株。但2002-2003年,由一种新型人冠状病毒SARS-CoV所引发的全球范围的严重急性呼吸综合征（SARS）的流行,使多国蒙受巨大损失,由此,冠状病毒又成为研究的焦点。随着分子生物学技术的发展,2004-2005年,又发现了2种新型人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1。在此,就这2种病毒的发现、流行情况,及其与疾病的相关性做一简要综述。     

中国内陆发现HCoV-HKU1感染及N和S蛋白基因序列及进化分析

了解冠状病毒HKU1在我国大陆地区的感染情况及N基因和S基因的编码特征。采用RT-PCR的方法对2005年10月~2006年1月收集的260例急性呼吸道感染的住院儿童鼻咽抽吸物(NPA)进行了冠状病毒HKU1基因检测。将PCR阳性产物测序,并将所测序列在GenBank中进行比较分析。260份样本中共检测到2份冠状病毒HKU1阳性,阳性率为0.77%(2/260),且该2例冠状病毒HKU1阳性患者临床均表现为肺炎症状。扩增其中一株病毒N和S全基因,并进行测序,与GenBank中的冠状病毒HKU1参考株及冠状病毒科其它成员进行序列同源性和进化树分析,并对N和S蛋白的结构与功能进行了初步的预测分析。由此表明我国大陆地区存在冠状病毒HKU1感染,且可能与儿童下呼吸道感染存在相关性。     

西藏地区儿童急性呼吸道感染中呼吸道合胞病毒的初步研究

本研究为了解西藏地区儿童急性呼吸道感染中呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)及基因型别。首先采用直接免疫荧光法检测2011年4～7月西藏自治区人民医院儿科病房因急性呼吸道感染住院患儿的鼻咽分泌物标本中7种常见的呼吸道病毒及人类偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)的抗原。然后对RSV抗原阳性的标本分别提取RNA,用逆转录-巢式聚合酶链反应法(Nest-PCR)确定RSV型别,同时用实时荧光PCR(Real-Time PCR)方法进行验证。再通过对G蛋白基因PCR扩增产物序列测定确定RSV的基因型。通过与GenBank中不同地区RSV分离株的G蛋白基因序列比对,了解西藏地区RSV G蛋白的结构特点及变异情况。结果表明,从167例标本中检测出呼吸道病毒抗原阳性的为65例,总阳性率为38.9%(65/167),其中RSV 45例,占阳性标本的69.2%(45/65),对其中42例RSV阳性标本进行了PCR分型,其中40例为A亚型,2例为B亚型。对7株A亚型RSV G蛋白基因PCR产物测序结果显示,全部为GA2基因型。西藏RSV与RSV原型株A2株核苷酸的同源性为90.7%～91.8%,氨基酸的同源性只有86.5%～87.2%。氨基酸的变异主要集中在胞外区一个高度保守序列的两端。7株西藏A亚型RSV G蛋白的核苷酸序列与GenBank中不同的RSV分离株相比同源性为90.7%～91.8%。西藏地区2011年春季小儿急性呼吸道感染的病毒病原主要为呼吸道合胞病毒,A亚型是2011年西藏地区的流行优势型别,其G蛋白胞外区基因具有较高的变异性。     

人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用比较

分别设计HCoV-NL63和HCoV-HKU1特异的引物与荧光标记探针,并合成含靶基因的模板RNA,建立常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR方法,对其灵敏性、特异性和可重复性以及用于临床样本的适用性等进行平行比较评价.结果表明:这两种方法皆可对HCoV-NL63或HCoV-HKU1进行特异性诊断,其中荧光定量RT-PCR方法检测灵敏度均可达10拷贝/25μL反应体积,不同批次重复检测结果间的变异系数均小于5%.上述方法应用于158份临床鼻咽拭子标本,其中荧光定量RT-PCR方法检出6份HCoV-NL63阳性标本,5份HCoV-HKU1阳性标本,而常规RT-PCR方法则分别检出HCoV-NL63阳性与HCoV-HKU1阳性各3份.对常规RT-PCR方法获得的阳性样品进行序列分析证实上述方法的可靠性.本实验成功建立了可用于临床标本检测的人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法,并初步证实荧光定量RT-PCR检测方法检出率明显高于常规RT-PCR方法,这为开展HCoV-NL63和HCoV-HKU1的流行监测及临床早期诊断提供了有效技术手段.     

北京地区急性呼吸道感染儿童中人鼻病毒感染状况研究

为了解北京地区急性呼吸道感染儿童中人鼻病毒(HRV)-A、B、C型(尤其是HRV-C)的感染状况及分子生物学特征,本研究收集了2011年1月至12月急性呼吸道感染患儿呼吸道标本703例,采用半巢式PCR方法同时进行HRV-A、B、C检测,并对HRV阳性标本进行VP4/VP2衣壳蛋白编码区基因序列测定及进化树分析。结果显示703例标本中共有54例HRV检测阳性,总阳性检出率为7.7%(54/703);HRV感染的儿童中年龄在5岁以下的占94.4%(51/54);HRV检出率在毛细支气管炎患儿中最高(23.1%),其次是哮喘(20.0%)、肺炎(11.0%)、急性支气管炎(4.3%)、急性上呼吸道感染(4.1%)患儿;序列分析表明54例HRV检测阳性标本中25例为HRV-A(46.3%,25/54),8例为HRV-B(14.8%,8/54),21例为HRV-C(38.9%,21/54);HRV同一基因型内各核苷酸序列同源性为70.0%～100.0%,不同基因型间核苷酸序列同源性为55.5%～65.8%。上述结果提示,HRV是引起北京地区儿童急性呼吸道感染(尤其是下呼吸道感染)重要的病毒病原之一;HRV-C阳性检出率与HRV-A相近,较HRV-B高;HRV各个基因型间具有较高变异性。     

重症急性呼吸道感染患儿中人鼻病毒分型检测及流行病学分析

目的:调查重症急性呼吸道感染患儿中人鼻病毒(HRV)的感染情况,初步了解不同型别HRV流行病学和临床特点。方法:收集2008年5月至2010年3月北京儿童医院重症急性呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物样本259份,采用巢式PCR法,先用鼻病毒5′UTR引物筛查样本中该病毒总的感染情况,再用针对VP4-VP2区域的引物对阳性样本进行分型检测;同时对阳性样本进行其他常见呼吸道病毒共感染检测与流行病学及临床特点分析。结果:259例样本中,5′UTR初筛HRV阳性89例(34.4%),与其他常见呼吸道病毒存在共感染54例(60.7%);可通过VP4-VP2分型测序确定39例HRV-A(48.1%)、4例HRV-B(4.9%)、38例HRV-C(46.9%);HRV-A感染率最高的季节分布是秋季;HRV-A和HRV-C型感染者在临床特点上无明显差别。结论:HRV是儿童重症急性呼吸道感染的重要病原之一,新发现的HRV-C基因型感染率与HRV-A相似,但HRV在儿童重症急性呼吸道感染中的病原学意义还须进一步确认。     

2011年甘肃地区急性呼吸道感染儿童患者中鼻病毒感染规律的研究

探讨人鼻病毒(Human rhinovirus,HRV)在甘肃地区急性呼吸道感染儿童患者中的流行特征。2011年1月至12月,从甘肃地区急性呼吸道感染儿童患者中采集咽拭子标本286份,用多重PCR方法对常见呼吸道病毒性病原体进行筛查。多重PCR结果中HRV阳性的标本再用nested-PCR分别扩增HRV的VP1和VP4/VP2结合区基因片段,阳性结果进行序列测定和基因分析。286份咽拭子标本中,27份标本多重PCR检测结果显示为HRV阳性,检出率为9.44%。本研究中,HRV感染病例的平均年龄为3岁,其中,1岁以内儿童感染比例最高,占总阳性数的44.4%(12/27);在27例HRV阳性病例中,男性占16例(16/185,8.64%),女性占11例(11/101,10.89%),两者无显著性差异;HRV感染的高峰出现在5月份(6/27,22.2%);从HRV感染的疾病构成看,普通感冒的比例最高,占12.24%(12/98);其次为肺炎,占8.50%(13/153);剩余2病例均为支气管炎。基因序列特征分析发现:A组HRV是甘肃地区2011年的优势流行基因型,占阳性病例的84.62%(22/26),其次为C组HRV,占11.54%(3/26),B组HRV仅发现1例。HRV感染在2011年甘肃地区全年均可发生,主要感染以1岁以内儿童。A组HRV是该地区2011年急性呼吸道感染儿童患者中的主要流行基因型,并存在多个基因型和多个HRV血清型共同流行的特点。     

小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌耐药性和基因型研究

目的探讨临海地区小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌产超β-内酰胺酶（ESBLs和AmpC酶）的耐药性及耐药基因型分布情况。方法采用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按CLSI推荐的确证试验检测ESBLs和K-B纸片法测定药敏结果;采用头孢西丁纸片扩散法筛选产AmpC酶阳性菌株,采用PCR检测AmpC酶基因,并对产物进行测序分析基因型。结果113株肺炎克雷伯杆菌ESBLs和AmpC酶总检测率分别为29．20％和18．58％,其中单产ESBLs、单产AmpC酶和同产AmpC酶＋ESBLs检出率分别为23．01％、12．39％和6．19％;AmpC酶阳性菌株的耐药基因型：16株为DHA-1型,5株为ACT-1型。药敏试验：所分离的肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南全部敏感,对喹诺酮类耐药率很低,对大多β-内酰胺类抗生素耐药率较高,并且产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同产ES-BLS和AmpC酶菌株中更为严重。结论临海地区小儿呼吸道分离的肺炎克雷伯杆菌产ESBLs和AmpC酶检出率较高;AmpC酶以DHA-1基因型流行为主,产酶株呈现出高度多重耐药性。     

肺癌患者呼吸道病原菌感染的回顾性分析

目的：了解肺癌患者呼吸道感染的病原菌及其耐药特点,方法：对我院2000年1月-2002年1月肺癌患者痰标本所分离细菌进行回顾性分析。结果：肺癌病人呼吸道感染以G-菌为主占54.5%,其次是真菌21.9%及G 菌14.1%,G-菌中以沙雷菌属(32.2%),大肠埃希菌和铜绿假单胞菌(9.7%)为主,在大肠埃希菌中,产超广谱β-内酰胺酶株(ESBLS)占40.6%,真菌以白色假丝酵母菌(87.8%)为主,G 球菌中以凝固酶阴性葡萄球菌为主(76.9%),耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)占63.6%,所分离细菌除对舒普生,特治星,亚胺培南及万古霉素耐药率较低外,常用抗生素显示较高的耐药率,结论:肺癌患者呼吸道感染的病原菌以G-菌为主,而真菌为G 菌亦不容忽视,且大多数病原菌耐药率较高,临床合理,规范使用抗生素是当务之急.     

反复呼吸道感染患者的微生态学分析

冬季是呼吸道反复感染的多发季节。我们对反复发生呼吸道感染病人口咽粘膜菌群的定植进行了分析。结果表明,正常组需氧菌群密度为４．１１３５±０．０８８４,厌氧菌群密度为４．４１０１±０．３５８６１;患者需氧菌群密度为４．５２９０±０．００８６,厌氧菌群密度为４．８７１８±０．３４２４。反复呼吸道感染患者需氧菌和厌氧菌的含量均不于正常对照组（Ｐ＜０．０５）。１８例病人分离出两种以上需氧菌,奈瑟氏菌和肺炎链球菌检出率较高,分别为３８．７％和２２．６％;厌氧菌以韦荣氏球菌和消化链球菌为多见,检出率分别为３２．２％和５８．１％。有７例病人分离出白色念珠菌。４例病人分离出绿脓杆菌,明显表现出微生态失调。药敏结果表明,不同菌株对抗生素均有一定的耐药性存在。     

北京地区呼吸道合胞病毒分离株G蛋白基因遗传变异特性研究

为了解北京地区人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus,HRSV）的遗传变异和分子流行病学特征,首次对北京地区2003～2004年63株HRSV分离株进行了G基因3’末端的第2个高度变异区的序列测定,并进行了基因分型和遗传变异的分析。使用不同的型特异性引物对GPA—F1和GPB-F1分别扩增A、B血清型HRSVG基因3’末端核苷酸序列,特异性扩增产物和随后的序列测定结果均显示,北京地区2003～2004年63株HRSV毒株中,96．8％（61／63）为A血清型,3．2％（2／63）为B血清型,说明北京地区在2003～2004年间存在HRSVA、B血清型共循环,但以A血清型病毒为主。分别对北京流行的A和B血清型病毒进行了基因亲缘性关系分析,结果提示,61株北京A血清型分离株全部为GA2基因型;2株B血清型分离株为GB3基因型。由此看来,GA2基因型是北京地区2003～2004年的优势流行基因型。北京61株GA2分离株之问核苷酸和氨基酸同源性分别在87．8％～100％和77．9％～100％之间;2株B血清型分离株之间核苷酸和氨基酸同源性分别为94．7％和88．1％。这说明在2003年和2004年有很多个不同的GA2基因型HRSV毒株在北京地区共循环,北京地区的HRSV流行存在着许多由不同病毒株引起的传播链。B血清型分离株Beijing04-11于G基因3’末端含有一个60个碱基的重复序列,这是HRSV多聚酶易于重复复制限定序列的一个极端的例子,有可能是HRSV逃逸免疫压力而不断进化的一种方式。该研究首次对北京地区2003年和2004年流行的HRSV进行了基因分型和遗传变异的研究,对于了解北京HRSV流行株的基因特征具有重要意义,可以为北京乃至中国疫苗株的选择提供参考依据,从而指导HRSV的免疫预防控制。     

晚期肿瘤患者下呼吸道感染临床分析

目的：探讨晚期肿瘤患者下呼吸道感染的细菌学分类情况及抗生素耐药性特点。方法：采用回顾性调查107例晚期肿瘤患者并下呼吸道感染痰菌分离的病原菌并分析其特点,药敏试验采用K—B纸片法。结果：137株病原菌,G杆菌67株(48．9％)．G^ 球菌44株(32．1%),真菌26株(19．0％)。主要致病细菌依次为铜绿假单胞菌19．7％．金黄色葡萄球菌13．9％,肺炎克雷伯菌10．9％。万古霉素、新霉素、环丙沙星对G^ 球菌较敏感;环丙沙星、阿米卡星、头孢哌酮对G杆菌作用较强．其他抗菌药物对各种病原菌均呈现不同程度的耐药。结论：晚期恶性肿瘤并下呼吸道感染的病原菌多为条件致病菌,耐药率高。应加强病原菌培养及药敏监测,以指导临床科学使用抗生素。     

儿科呼吸道疾病中肺炎支原体感染的结果分析

目的探讨儿科肺炎支原体（MP）感染特点,辅助临床医师早期诊断,合理用药。方法测定我院一年来2013例儿科呼吸道疾病患儿的肺炎支原体抗体（IgM）。结果2013例呼吸道感染患儿,检出肺炎支原体抗体（IgM）阳性者769例,占38.2%,769例阳性分别表现为肺炎369例（48%）,支气管炎238例（31%）,咽炎92例（12%）,哮喘70例（9%）。其中,肺炎组与各组相比较,具有统计学意义。MP IgM感染的检出率明显高于其他各组（P〈0.01）。结论MP感染是患儿不可忽视的病原体,检测患儿血清MP抗体能够及早诊断,指导治疗。     

老年患者下呼吸道感染病原菌分布与耐药性分析

目的探讨老年患者下呼吸道感染常见病原菌分布及其耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法对本院2010年1月至2013年12月老年患者下呼吸道痰标本分离的病原菌用VITEK32全自动细菌鉴定仪进行鉴定,用K-B纸片法进行体外药敏试验,用WHONET 5.4软件进行统计学分析。结果共分离出病原菌936株,其中革兰阴性菌655株(69.98%),前四位为肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌,占比分别为24.89%、18.38%、11.97%和8.01%;革兰阳性菌196株(20.94%),前三位为金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌和肠球菌属,占比分别为10.15%、4.70%和3.10%;真菌85株(9.08%)。药敏结果显示,主要革兰阴性菌对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦和亚胺培南耐药率较低;主要革兰阳性菌对呋喃妥因、利福平、阿米卡星、替加环素、利奈唑胺和万古霉素耐药率较低。结论老年患者下呼吸道感染病原菌以革兰阴性杆菌为主,并出现多重耐药,临床应根据药敏结果合理选择抗菌药物。     

流感嗜血杆菌致恶性肿瘤患者下呼吸道感染情况与耐药性分析

目的分析流感嗜血杆菌致恶性肿瘤患者下呼吸道感染的情况与耐药状况,以便为临床合理用药提供参考和依据。方法收集2009年7月至2014年6月浙江金华广福医院住院恶性肿瘤患者下呼吸道标本,采用含有X、V因子的巧克力琼脂平板分离培养流感嗜血杆菌,应用梅里埃Vitek2-Compact全自动微生物鉴定仪鉴定菌种,药敏试验采用纸片法(K-B)进行,采用头孢硝噻吩纸片法检测β-内酰胺酶。结果共分离出流感嗜血杆菌102株,分离率为6.1%(102/1672);β-内酰胺酶阳性率为35.3%(36/102);药敏试验表明β-内酰胺酶阳性株与阴性株对氨苄西林、头孢噻肟、复方新诺明、四环素、氨曲南、氯霉素的耐药率差异有统计学意义(P0.05),多数抗菌药物对该菌仍保持良好的抗菌活性。结论从本院恶性肿瘤合并下呼吸道感染患者中分离出的流感嗜血杆菌产β-内酰胺酶阳性率高,大多数抗菌药物对该菌仍保持良好的抗菌活性,临床应重视流感嗜血杆菌感染并根据药敏试验结果合理选用抗菌药物。     

北京地区成人呼吸道感染病原体的检测分析

目的探讨北京地区成人呼吸道感染的病原学流行特点,为临床诊疗提供病原学依据。方法采用间接免疫荧光法检测人血清中8种呼吸道病原体的Ig M抗体,根据不同性别、年龄、年份和季节的病原体阳性率进行统计分析。结果 1 219例患者中呼吸道病原体阳性率为49.4%,其中甲型流感病毒阳性率最高,其他依次为嗜肺军团菌、乙型流感病毒、肺炎支原体、副流感病毒、肺炎衣原体、腺病毒和呼吸道合胞病毒;呼吸道感染患者中男性患者病原体阳性率显著高于女性患者(P0.01);不同年龄组病原体阳性率比较差异有统计学意义,以18~39岁年龄组最高,其次为40~59岁年龄组,上述两组病原体阳性率显著高于其他两个年龄组(P0.01);不同年份病原体阳性率比较差异有统计学意义,2014年显著高于2013年(P0.01);不同季节病原体的阳性率比较差异有统计学意义,春季显著高于夏季、秋季和冬季(P0.01)。结论本地区成人呼吸道感染病原体阳性率在性别、年龄、年份和季节性存在差异,病原体以甲型流感病毒和嗜肺军团菌为主。     

妇科门诊人乳头瘤病毒感染基因型分析

目的:研究通辽地区女性患者下生殖道人乳头瘤病毒(HPV)感染率和基因型分布。方法:采用凯普导流杂交法,对364例妇科就诊患者宫颈标本进行HPV基因分型检测。结果:HPV基因检测总阳性率为17.03%(62/364),阳性患者中单一感染率为70.97%(44/62),多重感染率为29.03%(18/62);共检出16种HPV亚型,包括高危型12型,低危型4型,感染以HPV31、HPV18、HPV16三种亚型最多见,所占比例分别为13.09%、11.90%、10.71%。结论:通辽地区妇科门诊女性患者HPV感染以HPV31、HPV18、HPV16三型较为多见,常见感染亚型总体符合亚洲人群分布规律,但又具有独特的地区分布特点。     

老年患者下呼吸道感染原因分析及防治

目的:分析引起老年患者院内下呼吸道感染的原因,制定相应预防措施,以控制院内感染的发生,提高医疗安全.方法:通过病例查找,回顾性分析我院112例老年患者住院过程中发生院内下呼吸道感染的相关因素,包括发病时间、发病率、住院时间、基础疾病、治疗措施、病原菌分布等数据.结果:本组老年患者院内下呼吸道感染发生率为7.6％,明显高于同期院内感染发生率(1.6％);住院时间长(平均45± 5.9 d);均有两种或两种以上基础疾病,其中以恶性肿瘤(53％)、慢性阻塞性肺病(48％)、脑血管疾病(43％)多见;均接授多种治疗措施,其中使用7天以上抗生素(53％)、雾化吸入(48％)、留置尿管(43％)、使用糖皮质激素(41％)为多;病原菌中以革兰阴性菌(54.0％)为主要致病菌,革兰阳性球菌(23.9％)、真菌(22.1％)、二重感染(19.0％)也常见.结论:老年患者容易发生院内下呼吸道感染,针对各种因素处理,可有效预防其发生.