利用基因重组技术培育抗病毒甘薯

日本《农业技术》,１９９９年５４卷４期第７Ｎ～１１Ｎ页报道：甘薯带状粗皮病严重危害甘薯,向甘薯导入ＳＰＦＭＶ－Ｓ病毒外壳蛋白质基因,可以培育带状粗皮病抗性甘薯。向植物导入基因的方法,一是利用农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）,在质粒上对夹于２５ｂｐ的Ｔ－ＤＮＡ两末端序列的目的基因编入植物染色体;二是使用电激、聚乙二醇（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、粒子枪等直接导入。对于甘薯基因重组的研究情况概要如下。１　向甘薯导入ＳＰＦＭＶ－Ｓ外壳蛋白质基因１．１　甘薯基因重组方法。一是Ａｇｒｏｂａ…     

表达新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒及其免？…

将将城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８株融合蛋白基因导入鸡痘病毒（ＦＰＶ）插入载体ｐＥＧＦ１１７５－１的Ｐ７．５启动子下游,得到转移载体ｐＦＧ１１７５－１重组质粒。采用脂质体转染技术,将该质粒转染ＦＰＶ２８２Ｅ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）。,经过多次蓝斑筛选纯化,获稳定的重组病毒ｒＦＰＶ－ＮＤＦ。间接免疫荧光试验表明,ｒＦＰＶ－ＮＤＦ感染的ＣＥＦ中表达了ＮＤＶ的融合蛋白。用ｒＦＰＶ－ＮＤＦ免疫的ＳＦ     

几种扩血管多肽对bFGF促血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的和方法：研究肾上腺髓质素（Ａｄｍ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）及Ｃ－型心房利太（ＣＮＰ）对碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）促血管平滑细胞（ＶＳＭＣ）增殖作用的影响及其机制。结果：孵育２４ｈ后,ｂＦＧＦ刺激ＶＳＭＣ增殖较对照组增加２．１倍（Ｐ〈０．０１）,细胞内蛋白磷酸化程度增加１．４倍（Ｐ〈０．０１）,ＰＫＣ及ＭＡＰＫ活性分别增加１．５和２．５倍（Ｐ〈０．０１０;Ａｄｍ．ＣＧＲＰｔ ＣＮＰ     

表达新城疫病毒F48E8株血凝素—神经氨酸酶的重组鸡痘病毒的构建 …

在克隆和鉴定新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８株血凝素－神经氨酸酶（ＨＮ）基因的基础上,应用分子克隆技术将ＨＮ基因导入鸡痘病毒插入载体ｐＦＧ１１７５－１中启动子Ｐ７．５的下游,得到携带ＮＤＶ－ＨＮ基因的质粒ｐＦＧＨＮ１１７５－１。将此质粒ｐＦＧＨＮ１１７５－１以脂质体转染中国鸡痘病毒疫苗株２８２Ｅ４株感染３￣４ｈ的鸡胚成纤维细胞,采用蓝斑筛选方法纯化３次,得到稳定的重组鸡痘病毒。用ＮＤＶ－ＨＮ基因特异     

内皮细胞基因的切应力反应元件

内皮细胞与血流直接接触,血流产生的血管壁切应力直接调节内皮细胞基因的表达,其调节机制就是通过切应力反应元件调节基因的转录。切应力反应元件有кＢ位点、ＴＲＥ（ＡＰ－１）位点、Ｅｇｒ－１位点和Ｓｐ１位点。相关的基因有：ＰＤＧＦ－Ｂ、（人、猫、鼠）、ｔＰＡ（人、猫、鼠）、ＴＧＦ－β１（人、鼠）、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－１（人）、ｅｃ－ＮＯＳ（人）、ｃ－ｆｏｓ（人）、ＩＣＡＭ－１（人）、ＭＣＰ－１（人）、Ｖ     

动脉平滑肌细胞sis／PDGF－B链的表达和调控

介绍平滑肌细胞ｓｉｓ／ＰＤＧＦ－Ｂ链表达和调控的进展。ｃ－ｓｉｓ原癌基因是ＰＤＧＦ－Ｂ的同源基因,将外源的ＰＤＧＦ基因导入哺乳类细胞是研究ＰＤＧＦ功能和调控的重要手段。内皮素、ＩＬ、ＴＮＦ、血管紧张素Ⅱ和蛋白激酶Ｃ可调节ｓｉｓ基因的表达。ｓｕｒａｍｉｎ和新霉素（ｎｅｏｍｙｃｉｎ）的人工合成为拮抗ＰＤＧＦ效应提供广阔的前景。ｃ－ｓｉｓ可通过激活ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ等原癌基因而促进细胞增殖。     

花的调节基因的开放和关闭

在动物和植物的生长过程中,调节基因决定细胞的最终发展方向。目前,许多调节基因的表达方式已经在时间和空间上被确定下来,比如在研究花的结构基因时所涉及到的花的调节基因。现在已经明确的花的结构基因有ＬＦＹ基因（ＬＥＡＦＹ基因）、ＡＰ１基因（ＡＰＥＴＡＬＡ１基因）和ＡＧ基因（ＡＧＡＭＯＵＳ基因）。其中,ＬＦＹ基因和ＡＰ１基因决定花的分生组织;ＡＧ基因负责控制雄蕊和心皮。那么,这些结构基因是如何受调节基因的控制？环境因素（比如日照时间）又是如何影响花的结构基因和调节基因的表达？目前已有两项研究对以上问题提…     

人基因使猪减少脂肪

美国农业部（ＵＳＤＡ）（Ｂｅｌｔｓｖｉｌｅ,ＭＤ）的研究者采用ＧｅｎｅｍｅｄｉｃｉｎｅＩｎｃ．’ｓ（ＴｈｅＷｏｏｄｌａｎｄｓ,ＴＺ）公司的胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）基因培育出体脂减少的猪。此项研究将ＩＧＦ－１转基因猪与导入生长激素（ＧＨ）基...     

丝瓜的三聚体G蛋白的初步研究

根据拟南芥（ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｈｌｉａｎａ）ＧＰＡ１的保守区段Ａ设计一对特异引物（５′ｃｔｇｇｇｇａａｔｃｔｇｇａａａａｔｃ３′,５′ｃａｃａｇｃｔｇｔａｃａｃｃｔｃａａａｃ３′）通过ＰＣＲ从丝瓜核基因组中扩增植物的三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因,获得了２个片段（ＬＦＧ１,ＬＦＧ２）,并已克隆和测序（已在ＥＭＢＬ数据库中登记,登记号为：ｙ１５２７０,ｙ１５２７１）．序列分析表明ＬＦＧ１和ＬＦＧ２分别由１５１５ｂｐ和７３２ｂｐ构成,都含有三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因的保守区段Ａ,但也都含有内含子．根据片段的大小及ＰＣＲ的特性,ＬＦＧ１可能是丝瓜三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因上的片段．     

畲族Gc、PGM1、AcP_1、6-ΡGD、ADA和AK1的遗传多态性

对畲族血浆组特异性成分（Ｇｃ）、红细胞磷酸葡萄糖变位酶１（ＰＧＭ１）、酸性磷酸酶（ＡｃＰ１）、６－磷酸葡萄糖酸脱氢酶（６－ＰＧＤ）、腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）、腺苷酸激酶（ＡＫ１）的遗传多态性进行了研究。Ｇｃ与ＰＧＭ１是用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦分析的,ＡｃＰ１、６－ＰＧＤ、ＡＤＡ及ＡＫ１是用淀粉凝胶电泳分析的。各基因座的基因频率分别为Ｇｃ＊１Ｆ０．４７２２、Ｇｃ＊１Ｓ０．２４２１、Ｇｃ＊２０．２７３８;ＰＧＭ１＊１Ａ０．５３５７、ＰＧＭ１＊１Ｂ０．１６２７、ＰＧＭ１＊２Ａ０．１５８７、ＰＧＭ１＊２Ｂ０．１４２９;ＡｃＰ＊１Ａ０．１８２５、ＡｃＰ１＊Ｂ０．８１７５;６－ＰＧＤ＊Ａ０．９６８３、６－ＰＧＤ＊Ｂ０．０２７８;ＡＤＡ＊１０．９８８１、ＡＤＡ＊２０．０１１９;ＡＫ１＊１１．００００。畲族Ｇｃ、ＰＧＭ１、ＡｃＰ１、６－ＰＧＤ和ＡＤＡ基因为多态,而ＡＫ１基因为单态。发现１例带有６－ＰＧＤ＊Ｒ和３例带有Ｇｃ＊１Ａ２变异等位基因的个体,其中Ｇｃ＊１Ａ２基因频率为０．０１１９,达到多态水平。     

Studies on Pattern of Producing Transgenic Fish I.Production and Detection of All fish TRansgenic Common Carp With cMT sGH Gene

转基因鱼工作的开展被用于水产科学基础与应用研究的各个领域。应用方面的一项重要研究就是利用转生长激素基因来提高鱼的增长速度。需要解决两个问题：一是转基因鱼所使用的基因元件;二是外源基因的高整和率与高表达。已有许多报道认为：不同种动物的生长激素不一定相互促进生长。我们通过显微注射,将鲤鱼金属硫蛋白启动子（ｃＭＴ）与大马哈鱼生长激素基因（ｓＧＨ）的融合基因（ｃＭＴｓＧＨ）导入鲤鱼单细胞后期的早期胚胎,构建了全鱼转基因鲤鱼。通过斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结合ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ,对外源ｓＧＨ的整和进行了精确的检测和分析。实验选取性成熟鲤鱼,收集卵子和精子,湿法受精获得受精卵。经过基因注射,孵化后的鱼苗放入水族箱。待鱼苗平游,提取总ＤＮＡ进行检测。以ＰｓｔＩ酶切质粒ｐｃＭＴｃＧＨ（Ｆｉｇ．４）分离３．４ＫｂｓＧＨ片段,用随机引物标记,作为杂交探针。同时,设计并合成ｓＧＨ基因的ＰＣＲ特异引物。Ｆｉｇ．１的斑点杂交结果与Ｆｉｇ．２的ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ结果相比较（Ｔａｂｌｅ１）,说明斑点杂交存在着高的假阳性。而ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ将ＰＣＲ的快速、方便与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ的准确性相结合,排除了Ｐ     

畲族Ge,PGM1,AcP1,6—PGD,ADA和AK1的遗传多态性

对畲族血浆组特异性成分、红细胞磷酸葡萄糖变位酶１（ＰＧＭ１）、酶性磷酸酶（ＡｃＰ１）、６－磷酸葡萄糖酸氢酶（６－ＰＧＤ）、腺苷脱氨酶（ＡＤＡ０、腺苷酸激酶（ＡＫ１）的遗传多态性进行了研究。Ｇｃ与ＰＧＭ１是用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚集分析的,ＡｃＰ１、６－ＰＧＤ、ＡＤＡ及ＡＤ１是用淀粉凝胶电泳分析的。各基因座的基因频率分别为Ｇｃ１Ｆ０．４７２２、Ｇｅ１Ｓ０．２４２１、Ｇｃ２０．２７３８;ＰＧＭ１１Ａ     

亮叶水青冈（Fagus lucida）种群遗传多样性初步研究

本文利用凝胶电泳法研究亮叶水青冈（Ｆａｇｕｓｌｕｃｉｄａ）种内遗传多样性。所测定的酶系统包括：过氧化物酶（ＰＸ１和ＰＸ２）、磷酸葡萄糖脱氢酶（ＰＧＤ）、谷氨酸草酰乙酸转氨酶（ＧＯＴ１和ＧＯＴ２）、异柠檬酸脱氢酶（ＩＤＨ）、甲基荼醌还原酶（ＭＮＲ）、葡萄糖磷酸变位酶（ＰＧＭ１和ＰＧＭ２）,苹果酸脱氨酶（ＭＤＨ２）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）和磷酸果糖升构酶（ＰＧＩ）９种酶系统１１个基因位点。测定和分析了亮叶水青冈２地理种群的等位基因频率,固定指致,基因多祥性和遗传距离,为进一步研究水青冈的遗传变异和种内种间关系提供了科学依据。     

直接注射质粒DNA表达人G-CSF的研究(英文)

转基因动物研究发展至今,对于所构建的表达载体有效性如何,一直缺乏一个验证体系。由于转基因动物的建立较为繁琐复杂,投资大,因而直接用转基因动物去验证所用元件是不明智的。为此,我们采用小鼠乳清酸蛋白（ＷＡＰ）基因（２．６Ｋｂ）为调控序列,人ＧＣＳＦ基因组基因为目的片段,将ＷＡＰ笫一内含子置于ＧＣＳＦ基因５’端,构建成转基因动物乳腺表达载体ｐＩＮＧＧ（Ｆｉｇ．１）。将表达质粒直接注射到怀孕小鼠乳腺。于分婉第８天取乳汁进行ＥＬＩＳＡ检测。在泌乳期小鼠乳汁中检测出人ＧＣＳＦ,表达量达１５３２ｎｇ／ｍＬ（Ｔａｂｌｅ１）。具有一定应用前景。实验中发现：增加注射次数可以提供转染效率,但最佳注射次数仍需摸索。另外,如果换用复制型载体,整合与表达效率有可能大大提高。     

中国人白细胞介素-12 cDNA基因的克隆及序列分析与比较

为研究中国人ＩＬ－１２的基因特征,采用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）从中国人脐带血单核细胞中分别克隆了Ｐ３５、Ｐ４０两亚基ｃＤＮＡ基因,包括完整的前体蛋白编码序列,其中Ｐ３５ ｃＤＮＡ编码２１９个氨基酸的多肽,Ｐ４０ ｃＤＮＡ编码３２８个氨基酸的多肽,与国外序列（ＮＫＳＦ、ＣＬＭＦ）比较结果发现：所克隆序列Ｐ３５同ＮＫＳＦ相比,第４４ａａ密友子由ＧＴＣ（Ｖａｌ）→ＧＴＧ（Ｖａｌ）,但未改     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响,结果显示,ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ,２５５４１±６４２１,Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０,Ｐ＜０．０５）;抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达;显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性,推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机     

外源GUS基因在PEG介导的花椰菜原生质体中的瞬间表达

为了将外源基因导入花椰菜原生质体获昨转基因植株,本文研究了ＰＥＧ介导的外源基因在花椰菜一上胚轴原生质体中的瞬间表达。（１）２０％ＰＥＧ将质粒ｐＢＩ２２１导入原生质体后ＧＵＳ表达比１３％ＰＥＧ导入的高,但易造成原生体损伤。（２）热激处理增强表达,但在随后的培养过程中易造成原生质体降解。（３）原生质体状况对表达有重要影响,５ｄ龄下胚轴原生质体比８ｄ龄的表达强。（４）不同质粒及启动子表达强度不同,质粒ｐ     

缺氧诱导因子1和红细胞生成素3‘—增强子调节内皮细胞？…

目的和方法：将红细胞生成素（ＥＰＯ）３＇－增强子野生片断及点突变片断借脂质体主人脐静脉内皮细胞株ＥＣＶ－３０４,用半定量ＲＴ－ＰＣＲ测定正常秘缺氧诱导因子－１（ＨＩＦ－１）诱导剂氧化钴（ＣｏＣｌ２）作用下培养６ｈ的细胞环氧合酶２（ＣＯＸ－２）和血栓素合酶（ＴＸＳ）的ｍＲＮＡ。结果：ＨＩＦ－１诱导剂ＣｏＣｌ２可放ＣＯＸ－２和ＴＸＳ基因转明显增强２,向细胞导入野生ＥＰＯ３＇增强子片断可阻断ＣｏＣｌ２诱     

衰老细胞转录因子AP1／CREB结合活性对EGF的可诱导性下降

转录因子与ＤＮＡ的结合是基因转录的关键环节,通过迁移性法分析季转录因子ＡＰ１、ｃＤＡＭＰ反应元件结合蛋白（ＣＲＥＢ）、糖皮质激素反应元件（ＧＲＥ）结合蛋白在衰老细胞中的结合活性,结果表明,ＡＰ１与ＣＲＥＢ的结合活性在衰老细胞中对表皮生长因子（ＥＧＦ）的反应性低于年轻细胞;而ＧＲＥ结合蛋白的结合活性在衰老细胞中对ＥＧＦ的反应性无明显变化,这提示ＥＧＦ不能有效刺激衰老细胞增殖可能与其转录因子结合活性的     

外源GUS基因在PEG介导的花椰菜原生质体中的瞬间表达

为了将外源基因导入花椰菜原生质体获得转基因植株,本文研究了ＰＥＧ介导的外源基因在花椰菜下胚轴原生质体中的瞬间表达。（１）２０％ＰＥＧ将质粒ｐＢＩ２２１导入原生质体后ＧＵＳ表达比１３％ＰＥＧ导入的高,但易造成原生质体损伤。（２）热激处理增强表达,但在随后的培养过程中易造成原生质体降解。（３）原生质体状况对表达有重要影响,５ｄ龄下胚轴原生质体比８ｄ龄的表达强。（４）不同质粒及启动子表达强度不同。质粒ｐＫＩＷＩ１０１比ｐＢＩ２２１表达强３倍左右。