嗜肺军团菌调控宿主非折叠蛋白反应的研究进展

内质网作为细胞内重要的细胞器之一,参与胞内蛋白的成熟及转运,其稳态与细胞的存活及免疫反应密切相关.非折叠蛋白反应是维持内质网稳态的重要机制之一,参与细胞的天然免疫反应,在宿主细胞抵抗病原体入侵中具有重要作用.嗜肺军团菌是一种革兰氏阴性致病菌,能够感染人体肺泡巨噬细胞引起严重肺炎,即军团菌病.在入侵宿主细胞后,嗜肺军团菌通过其Ⅳ型分泌系统将330多个效应蛋白转运至宿主细胞中,干扰宿主细胞的多种细胞进程,以形成其生存和复制所需的场所——含嗜肺军团菌囊泡(Legionella-containing vacuole, LCV).LCV的形成与宿主细胞的内质网密切相关.本文主要从嗜肺军团菌的致病机制、细胞非折叠蛋白反应及其与病原体的关系、军团菌对宿主细胞的非折叠蛋白反应的调控等方面进行综述,以期为揭示病原体与内质网应激之间的关系提供参考.     

肾移植术后肺部感染的鉴别诊断

肾移植术后并肺部感染是重症监护病房患者死亡的重要原因,感染的症状及体症呈复杂多样化,变化迅速。肾移植后因长期使用免疫抑制剂,肺部感染的病原体多为混合性感染,常见的病原体如铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯氏杆菌、金黄色葡萄球菌、尤其是耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌、结核杆菌、麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒、真菌、军团菌及卡氏肺孢子虫等病原体引起的肺部感染,尤其是军团菌及卡氏肺孢子虫在免疫抑制患者中感染逐渐增加。从临床表现判断肺部感染病因的诊断较困难,病原学检查需要特殊的检查手段如肺泡灌洗及保护性样本刷取样,胸部X线表现具有一定的参考价值,尤其早期CT检查更有意义。为了明确肺部感染的病因学,患者表现、实验室检查结果及X线表现进行综合考虑是十分必要的,这有利于肺部感染的预防及控制。     

嗜肺军团菌毒力岛分子分型及其致病性研究进展

嗜肺军团菌是引起社区获得性和医院内感染性肺炎的重要病原体,中央空调冷凝塔水系统是引发军团菌病的重要传染源,在国内外时有暴发流行,病死率较高。嗜肺军团菌的致病性与其毒力岛基因组密切相关。简要概述了嗜肺军团菌毒力岛、分子分型及其致病性。     

嗜肺军团菌毒力基因、致病性及实验诊断研究进展

嗜肺军团菌是引起军团菌肺炎的重要病原体,关于军团菌感染的致病机制目前尚不十分清楚。近来研究发现,军团菌的致病性与其毒力因子和铁代谢等相关,本文对嗜肺军团菌的毒力因子及其作用。致病机制和实验室诊断方法研究进展作一综述。     

北京地区成人呼吸道感染病原体的检测分析

目的探讨北京地区成人呼吸道感染的病原学流行特点,为临床诊疗提供病原学依据。方法采用间接免疫荧光法检测人血清中8种呼吸道病原体的Ig M抗体,根据不同性别、年龄、年份和季节的病原体阳性率进行统计分析。结果 1 219例患者中呼吸道病原体阳性率为49.4%,其中甲型流感病毒阳性率最高,其他依次为嗜肺军团菌、乙型流感病毒、肺炎支原体、副流感病毒、肺炎衣原体、腺病毒和呼吸道合胞病毒;呼吸道感染患者中男性患者病原体阳性率显著高于女性患者(P0.01);不同年龄组病原体阳性率比较差异有统计学意义,以18~39岁年龄组最高,其次为40~59岁年龄组,上述两组病原体阳性率显著高于其他两个年龄组(P0.01);不同年份病原体阳性率比较差异有统计学意义,2014年显著高于2013年(P0.01);不同季节病原体的阳性率比较差异有统计学意义,春季显著高于夏季、秋季和冬季(P0.01)。结论本地区成人呼吸道感染病原体阳性率在性别、年龄、年份和季节性存在差异,病原体以甲型流感病毒和嗜肺军团菌为主。     

PCR-酶切技术快速鉴定军团菌

[目的]建立一种新型的军团菌鉴定方法,并探讨该法在鉴定环境水源和临床标本军团菌菌株中的应用价值.[方法]根据军团菌16S rRNA基因保守序列设计引物,以分离培养得到的可疑军团菌菌株作为模板,采用PCR法对模板扩增,并用限制性内切酶对PCR产物进行酶切分析,建立一种嗜肺军团菌及非嗜肺军团菌的鉴定方法.对16株嗜肺军团菌、22株非嗜肺军团菌及12株其他细菌标准菌株进行检测,验证该方法的可靠性,最后用该法检测广州地区分离的169株可疑军团菌菌株并进行基因测序.[结果]该PCR方法检测嗜肺军团菌及非嗜肺军团菌所有标准菌株均为阳性,非军团菌检测结果均为阴性;进一步的Hinf Ⅰ酶切分析可准确的区分嗜肺军团菌标准菌株;广州地区分离的169株可疑军团菌菌株经该法检测发现160株为军团菌,其中79株为嗜肺军团菌,与基因测序检测结果一致.[结论]PCR-酶切技术可快速、特异地检测军团菌及嗜肺军团菌,适用于环境水源和临床标本可疑军团菌菌株的检测.     

公共场所水环境中活嗜肺军团菌的快速检测方法

旨在建立一种基于16S rRNA前体的分子学检测方法用于快速检测活嗜肺军团菌,应用该方法与ISO标准法调查公共场所水环境中嗜肺军团菌的水平及污染现状。此研究方法的理论基础在于营养刺激后可诱导嗜肺军团菌16S rRNA前体的合成,后者可作为检测细胞活性的指标。分别应用预刺激RT-qPCR法和ISO法对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌以及非军团菌进行检测,并验证两种方法的特异性、灵敏度。应用预刺激RT-qPCR法和ISO法检测公共场所水环境中的嗜肺军团菌,比较两者结果的一致性。结果显示,预刺激时间大于3 h时,嗜肺军团菌16S rRNA前体的增长缓慢,最佳预刺激时间设置为3 h。预刺激RT-qPCR法与ISO法均能较好地检出嗜肺军团菌,特异性均为100%,预刺激法的最低检测浓度(Limit of detection,LOD)为102Cell/L,ISO标准法的LOD为104 Cell/L。预刺激法及ISO法的总阳性率分别为43.5%(30/69)和40.6%(28/69),两种方法的检出率差异无明显统计学意义(C2=0.119,P=0.730)。预刺激RT-qPCR法是一种快速有效的检测活嗜肺军团菌的方法,诊断灵敏度及特异性高,是ISO标准法潜在的替代方案。     

肺炎链球菌性肺炎诊断方法研究进展

肺炎链球菌是一种常见的细菌性肺炎的病原体,快速、准确的确定病原体是控制疾病的关键。本文就目前诊断肺炎链球菌性肺炎的免疫层析法、酶联免疫吸附法、胶乳颗粒凝集试验等研究进展作以简要综述。     

乙酰化修饰在嗜肺军团菌致病过程中的作用

乙酰化修饰是由乙酰基转移酶、去乙酰化酶介导的可逆的蛋白质翻译后修饰。其中,乙酰基转移酶将乙酰辅酶A的乙酰基团转移至底物蛋白的氨基酸残基,而乙酰基团的去除由去乙酰化酶完成。乙酰化修饰参与许多基本生物学过程的调节作用,越来越多的研究表明,蛋白质乙酰化修饰在病原菌的致病过程中具有重要作用。病原菌,如引起非典型性肺炎的嗜肺军团菌,可以通过分泌具有乙酰基转移酶活性的效应蛋白靶向宿主细胞信号通路的关键蛋白质因子,干扰宿主细胞信号通路及免疫反应。本文主要从嗜肺军团菌的致病机制、乙酰化修饰及乙酰化修饰在病原体致病过程中的调控作用进行综述,突出已知的乙酰化毒力蛋白的例子,并讨论它们如何影响与宿主的相互作用,为理解乙酰化修饰在嗜肺军团菌致病过程中的作用机制提供参考。     

辽宁省2006-2016年集中空调冷却水中嗜肺军团菌毒力岛基因组携带情况

目的 了解2006‒2016年辽宁地区集中空调冷却水中军团菌携带毒力岛基因情况及其致病性。方法 根据GenBank公布的嗜肺军团菌核苷酸序列设计和合成嗜肺军团菌种和毒力岛基因鉴定引物,采用PCR法对2006‒2016年辽宁省各大公共场所委托及抽样检测中分离到的军团菌,进行了毒力岛基因组检测,并与血清型进行比较分析,其中嗜肺军团菌15株、非嗜肺军团菌8株。结果 标准菌株ATCC（33152）12个毒力岛基因全阳性;9株LP1型嗜肺军团菌分别检出9~11个毒力岛基因,6株LP2-14型嗜肺军团菌分别检出6~9个毒力岛基因,8株非嗜肺军团菌分别检出2~11个毒力岛基因。结论 辽宁地区军团菌广泛存在公共环境集中空调冷却系统中,以LP1型嗜肺军团菌居多,LP2-14型嗜肺军团菌与非嗜肺军团菌也普遍存在,而且所测菌株均携带毒力岛基因,是细菌感染性肺炎的重要隐患病源之一。     

一个细菌的致命之旅——嗜肺军团菌分泌系统及效应蛋白的研究进展

嗜肺军团菌是引起军团菌肺炎以及庞蒂亚克热的革兰氏阴性胞内病原细菌,嗜肺军团菌侵染宿主的主要特点是可以通过其IVB型毒力分泌系统,向宿主细胞内分泌超过150种的底物效应蛋白。通过这些效应蛋白的作用,嗜肺军团菌能够调整宿主细胞的胞内运输途径,改变内外环境来伪装自己的吞噬泡,干扰宿主的细胞周期,抑制宿主细胞的凋亡,从而有效逃避宿主细胞的防御功能,创造出理想的胞内增殖环境。最后,效应蛋白还可以帮助军团菌从宿主细胞中逃逸。目前,嗜肺军团菌已经成为"病原菌-宿主相互作用"的重要研究模型,其毒力分泌系统及其底物效应蛋白的功能也成为细胞微生物学的研究热点。对嗜肺军团菌分泌系统及效应蛋白的研究不仅能够帮助阐明病原细菌的致病机理,还有助于推动对宿主免疫机制的更深层次的研究。文章主要针对嗜肺军团菌的毒力分泌系统,尤其是IVB型分泌系统的结构和功能,以及底物效应蛋白的研究进展进行了综述,向读者展示出一个小小的细菌所拥有的那令人惊叹的、如此狡猾的生存策略和它精致的杀伤武器。     

用聚合酶链反应（PCR）检测支气管肺泡灌洗（BAL）液中的嗜肺军团杆菌

本文研究了由嗜肺军团杆菌的巨噬细胞感染性增效子（ｍｉｐ）基因设计的一对引物,用ＰＣＲ扩增嗜肺军团杆菌３、５、７、８血清型的４个标准菌株的特异ＤＮＡ序列,研究了用该引物扩增ＢＡＬ液中嗜肺军团菌特异ＤＮＡ序列的方法、灵敏度及特异性。结果表明：用上述引物扩增嗜肺军团菌４个标准菌株的ＤＮＡ,均可得到２０７ｂｐ的特异扩增产物,ＢＡＬ液中的军团菌经离心及裂解液裂解后,可直接进行ＤＮＡ扩增,当ＢＡＬ与液中军团菌量为２×１０３ＣＦＵ／ｍｌ时,即可检测出特异扩增带（电泳法）,除军团菌外,其它受试细菌均无此特异性扩增,用本法对４２例临床非典型肺炎患者的ＢＡＬ液进行嗜肺军团菌的检测,在４２份嗜肺军团菌培养均为阴性的ＢＡＬ液中,其中一例ＰＣＲ检测军团菌为阳性。本研究提示：用ＰＣＲ检测ＢＡＬ液中的军团菌是可行的,并有快速、灵敏、特异之忧点。     

石家庄市儿童呼吸道感染病原体IgM抗体结果分析

目的分析石家庄市儿童呼吸道感染病原体的流行特点,为临床预防和治疗呼吸道感染提供病原学依据。方法纳入就诊于儿科的呼吸道感染患儿936例,运用间接免疫荧光法检测儿童血清的八种呼吸道病原体的IgM型抗体。根据不同季节、不同年龄和不同性别分组,分析其病原体阳性率和感染类型。结果 936例患儿血清标本中,检出病原体IgM抗体共424例,阳性率为45.30%。其中肺炎支原体阳性率(28.63%)最高,其次依次为流感病毒B型、呼吸道合胞病毒、流感病毒A型、肺炎衣原体、腺病毒、副流感病毒,未检出嗜肺军团菌。不同季节病原体的阳性率有差异,冬季的病原体阳性率(50.33%)显著高于夏、秋季的阳性率(33.71%和41.46%),差异均有统计学意义;不同年龄组中,婴儿组病原体阳性率(16.05%)显著低于其他3个年龄组,差异均有统计学意义;检出病原体的424例阳性患儿中,单一病原体感染类型者为290例(30.98%),混合感染者134例(14.32%);全部936例患儿中,男童病原体阳性率(42.33%)显著低于女童阳性率(52.29%);病原体混合感染类型中以肺炎支原体和流感病毒B型混合感染最常见,其中婴儿组混合感染病原体检出率均显著低于幼儿组、学龄前组和学龄组。结论肺炎支原体全年在儿童呼吸道感染中占主要地位。年龄和性别是石家庄市儿童呼吸道病原体感染的特异性因素,冬季为呼吸道病原体感染高峰期。     

1964例围产期孕妇阴道分泌物常见病原体分析

目的探讨围产期孕妇阴道分泌物常见病原体的感染状况,减少不良妊娠的发生。方法假丝酵母菌(C)、滴虫(T)检测采用涂片法,细菌性阴道炎(BV)检测采用唾液酸酶法,淋球菌(NG)检测采用平板培养法,解脲支原体(UU)检测采用人工培养法,沙眼衣原体(CT)检测采用乳胶免疫层析法。结果 1 964例围产期孕妇中病原体感染者共360例,占总人数的18.33%(C 9.41%、T 0.46%、BV 6.36%、NG 0.00%、UU 4.53%、CT 1.73%)。其中单一病原体感染者为281例,占总人数的14.31%;两种或两种以上病原体感染者为79人,占总人数的4.02%。结论抚顺地区围产期孕妇阴道分泌物病原体构成复杂,病原体主要以假丝酵母菌和细菌性阴道炎为主,其次是解脲支原体,部分孕妇可同时感染多种病原体。     

聚合酶链反应-酶切分型鉴定广州地区环境水源军团菌

【目的】探讨聚合酶链反应-酶切分型在快速鉴定环境水源军团菌方面的应用价值,并了解广州地区环境水源军团菌的分布状况。【方法】对广州地区采集的44份环境水样,作军团菌分离培养,再对分离菌株进行16Sr DNA PCR-酶切分型鉴定、16S rDNA基因测序和mip基因测序鉴定。【结果】在广州地区环境水源分离的112株军团菌,经聚合酶链反应-酶切分型鉴定、16S rDNA基因测序和mip基因测序鉴定,检出嗜肺军团菌66株,非嗜肺军团菌46株,其中菲氏军团菌20株,戈氏军团菌17株,橡树岭军团菌7株,长滩军团菌2株。【结论】聚合酶链反应-酶切分型检测环境水源军团菌是一种简便、快速、特异的鉴定方法;在广州地区环境水源中普遍存在军团菌,主要是嗜肺军团菌,其次是菲氏军团菌,戈氏军团菌,橡树岭军团菌和长滩军团菌。     

DC-SIGN受体及其信号通路在病原体感染中的作用

树突细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子(DC-SIGN)首先是在DC表面发现的II型跨膜凝集素受体,能够与细胞间黏附因子2(ICAM-2)和ICAM-3结合,并能识别结合富含甘露糖的碳水化合物和含岩藻糖的多糖结构(如Lex,Ley,Lea及Leb)等病原相关分子模式,一方面可以通过受体介导的内吞、摄取、处理、提呈可溶性抗原,诱发机体对病原体的免疫应答;另一方面DC-SIGN诱发的信号通路能下调宿主免疫应答,导致病原体扩散、传播、免疫抑制和持续性感染。近年来,人们通过对许多病原体的免疫逃逸现象进行的大量研究工作,发现DC-SIGN与病毒的糖蛋白、细菌和真菌的荚膜多糖(CPS)等结合,使病原体藏匿于DC细胞而逃避溶酶体的降解,促进病原体传播实现免疫逃逸。     

自噬作用:机体抵御病原入侵的第2道防线

机体的固有免疫系统和获得性免疫系统可有效地抵御病原体的入侵,其中固有免疫系统的皮肤和黏膜屏障是机体抵御病原体入侵的第1道防线,由吞噬细胞、NK细胞等介导的吞噬和杀伤作用构成了机体固有免疫的第2道防线。最近自噬体及自噬现象的研究发现,自噬作用参与了机体对病原体入侵的免疫防御过程,是主要的机体抵御病原入侵的第2道防线。     

抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的制备及双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法的建立

目的：制备针对嗜肺军团茵血清8型的单克隆抗体,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法：用甲醛灭活的嗜肺军团菌血清8型菌免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法。结果：研制出8株能特异性分泌抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,Ig类型分别为IgM（2株）、IgG,（1株）和IgG,（5株）;利用IgG1型单抗6G10与6C7配对,建立了双抗夹心ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度为2．6×10^5cfu／mL,除与金黄色葡萄球菌有微弱的交叉反应外,与14株其他血清型嗜肺军团菌、17株非嗜肺军团菌及11株非军团菌均无交叉反应,具有较高的特异性。结论：制备了具有高特异性和亲和力的抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,并建立了双抗夹心EUSA检测方法。     

γ干扰素对麻风病患者细胞因子产生的调节

γ干扰素对麻风病患者细胞因子产生的调节入侵的病原体受到机体非特异免疫及特异免疫的作用。非特异免疫组成复杂，其中包括单核巨噬细胞的作用，特异免疫则主要由Ｔ细胞和Ｂ细胞发挥作用。对于胞内病原体而言，Ｔ细胞释放的细胞因子决定着免疫应答的特征。ＴＨ１细胞产生...     

卡他莫拉菌实时荧光PCR检测方法的建立

[目的]建立基于SYBR GreenⅠ染料法的卡他莫拉菌实时荧光PCR检测方法。[方法]选取卡他莫拉菌两个的基因(uspA1和copB)设计特异性引物;提取卡他莫拉菌、嗜肺军团菌等11种呼吸道病原体的DNA,通过常规PCR和实时荧光PCR对引物的特异性进行验证;以卡他莫拉菌DNA为模板进行实时荧光PCR,获取扩增曲线、标准曲线、熔解曲线和熔解峰图,并判断检测方法的灵敏度;进行重复性试验,评估检测方法的组内和组间重复性;通过模拟临床样本,对检测方法的灵敏度进行验证。[结果]共设计出3对引物,对嗜肺军团菌等10种呼吸道病原体具有特异性;对卡他莫拉菌的最低检出浓度为1.0×10^(3)cfu/mL;组内和组间最大变异系数分别为1.78%、1.89%;模拟的临床试验结果与预期相符。[结论]成功建立了卡他莫拉菌的实时荧光PCR检测方法,与10种常见的呼吸道病原体无交叉反应,且重复性变异系数小于2%,模拟临床试验灵敏度结果达到1.0×10^(3)cfu/mL。