番茄条斑坏死病毒的研究

从上海郊区番茄条斑坏死病果分离的棒状病毒(ToSNV)的外壳蛋白亚基的分子量小于烟草花叶病毒普通株(TMVc)和长叶车前花叶病毒(HRV),ToSNV的外壳蛋白比TMVc少10个氨基酸残基,比HRV少8个氨基酸残基,氨基酸组成中含甲硫氨酸及组氨酸。ToSNV与长叶车前花叶病毒上海分离株(HRVsh)及油菜花叶病毒(YMV_(15))有免疫交叉反应,但与TMVc却无血清学亲缘关系,而且ToSNV外壳蛋白的酶解图谱不同于TMVc。因此推测ToSNV是烟草花叶病毒组中既不同于TMVc又有别于HRVsh和YMV_(15)的一个分离株。     

长叶车前花叶病毒上海分离株(HRVsh)外壳蛋白免疫多肽的研究

长叶车前花叶病毒上海分离株(HRVsh)的外壳蛋白中含有4个甲硫氨酸残基,本文采用溴化氰裂解,并结合葡聚糖凝胶G-100柱层析、高压纸电泳及纸层析等方法,分离纯化了5个多肽片段,经~(125)I标记抗体对免疫多肽的鉴定,表明其中二段多肽与~(125)-IgG的结合能力接近完整病毒的水平,说明这二段多肽具有HRVsh的抗原专一性,决定HRVsh抗原性的抗原决定簇主要分布于这二个肽段中。 外壳蛋白的胰蛋白酶酶解肽谱及多肽氨基酸序列分析的结果,表明HRVsh和HRV标准株系间在氨基酸序列上有很大相似性,这就决定了两者密切的血清学亲缘关系。     

用互补DNA杂交技术研究中国分离的几个烟草花叶病毒组RNA序列的同源性

用互补DNA分子杂交技术研究了烟草花叶病毒组的几个中国分离物RNA序列的同源性。结果表明,杨树丛顶病毒(PV)、地黄退化病毒(DDV)、烟草花叶病毒普通株(TMVc)、番茄株(TMVts)及其突变体(TMVN_(N_(14)))可归于TMV-U_1株所代表的亚组。油菜花叶病毒15(YMV_(15))与TMV-U_1株无关,在所比较的病毒中是一独特的成员。     

用互补DNA杂交技术研究中国分离的几个烟草花叶病毒组RNA序列的同源性

用互补DNA分子杂交技术研究了烟草花叶病毒组的几个中国分离物RNA序列的同源性。结果表明,杨树丛顶病毒(PV)、地黄退化病毒(DDV)、烟草花叶病毒普通株(TMVc)、番茄株(TMVts)及其突变体(TMV_(N_(14))可归于TMV-U_1株所代表的亚组。油菜花叶病毒15(YMV_(15))与TMV-U_1株无关,在所比较的病毒中是一独特的成员。     

烟草花叶病毒几个分离物的比较研究

本文从血清学关系、外壳蛋白亚基分子量、氨基酸组成和放射性碘标记酶解肽谱等方面比较研究了广州和上海地区的烟草、茄子、辣椒、番茄上分离到的烟草花叶病毒几个分离株。试验结果指出,它们与烟草花叶病毒普通株(TMV_c),长叶车前花叶病上海株(RMV_gh)都有所不同。并对放射性碘标记酶解肽谱在病毒诊断鉴定上的应用进行了讨论。     

不同动物制备的抗血清对病毒抗原免疫反应的差异

血清学技术是病毒诊断、鉴定、分类及亲缘关系分析的重要手段。一般常用以制备抗病毒血清的动物是家兔,但也有采用其它动物的,如蛙、羊、豚鼠、鸡及小鼠等。本文比较了Balb/c小鼠、昆明种小鼠和新西兰大白兔对长叶车前花叶病毒上海分离株(RMVsh)和烟草花叶病毒普通株(TMVc)的免疫反应特征。     

长叶车前花叶病毒上海分离株外壳蛋白赖氨酸残基的修饰对感染及重组的影响

长叶车前花叶病毒上海分离株外壳蛋白中有二个赖氨酸残基。完整的病毒颗粒或外壳蛋白在pH8.5条件下,只有一个赖氨酸残基与三硝基苯磺酸反应。如果有4M尿素存在,则有两个赖氨酸残基和一个半胱氨酸巯基被修饰。三硝基苯磺酰化的HRV_(sh)病毒颗粒的感染力丧失90%以上。HRV_(sh)的外壳蛋白经三硝基苯磺酸修饰后不能与HRV_(sh)-RNA重建。这些结果清楚地表明两个赖氨酸残基中一个位于病毒颗粒表面,另一个则包在病毒颗粒中。表面那个赖氨酸残基为HRV_(sh)的感染所必需。     

长叶车前花叶病毒(HRV_(sh))外壳蛋白赖氨酸残基的修饰

我们曾报道长叶车前花叶病毒上海分离株(简称HRVsh)的外壳蛋白有二个赖氨酸残基,在PH8.5无变性剂存在的条件下,完整病毒颗粒表面的赖氨酸残基可与三硝基苯磺酸(TNPS)起反应,反应后的TNP-HRVsh病毒颗粒的感染力丧失达90％以上。 本文又进行了甲基乙亚胺甲酯(MEI)对HRVsh赖氨酸残基的修饰反应,修饰后的MEI-HRVsh病毒颗粒的感染力也同样丧失90％以上。 从三硝基苯磺酸修饰的病毒颗粒(TNP-HRVsh)中分离得到的RNA能与天然的HRVsh的外壳蛋白重建病毒颗粒,并具有感染力,说明修饰过程中核酸并不受影响。 进一步用同位素~(35)S,~(32)P双标记病毒,再以TNPS修饰标记的病毒,得到(~(35)S,~(32)P)-HRVsh及TNP-(~(35)S,~(32)P)-HRVsh。将两者分别接种于系统寄主青菜(Brassica chinensis)的一片叶片,一天后在非接种叶片上都可测得~(35)S,~(32)P的放射计数。其中,(~(35)S,~(32)P)-HRVsh的~(35)S/~(32)P比值降低了,而TNP-(~(35)S,~(32)P)-HRVsh的~(35)S/~(32)P比值保持不变。说明HRVsh外壳蛋白赖氨酸残基的修饰并不影响病毒颗粒进入寄主细胞,以及在寄主细胞间的转移。同位素双标记的结果表明,其感染力丧失的原因可能是由于上述修饰作用阻止了病毒在感染中所必须的脱壳过程。     

单克隆抗体亲和层析纯化长叶车前花叶病毒

长叶车前花叶病毒上海分离株(HRVsh)单克隆抗体1H2,经纯化后以溴化氰活化法偶联于Sepharose 4B上制成亲和层析柱。HRVsh感染的三生烟提取液,经一次聚乙二醇沉淀初步纯化,悬浮液上亲和层析柱,于磷酸缓冲液中吸附,蒸馏水洗脱。收集的病毒制剂接种心叶烟有感染性,电镜观察见典型的HRVsh粒子,紫外吸收光谱与常规方法提纯的病毒相似,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条带。结果表明单克隆抗体亲和层忻得到高度纯化的HRVsh。最后讨论了单克隆抗体亲和层析方法的优点。     

外壳蛋白羧端序列缺失对烟草花叶病毒侵染性的影响

对野生型烟草花叶病毒(TMV-U1)的外壳蛋白羧端序列进行系列缺失突变,观察到TMV-U1株系的外壳蛋白羧端序列缺失6个氨基酸(保留152个氨基酸),仍能较强系统侵染烟草并高水平表达外壳蛋白,且能在新生叶里复制大量完整的病毒粒子。该研究结果表明：外壳蛋白羧端6个氨基酸序列并非烟草花叶病毒感染和复制所必需,并对利用外壳蛋白羧端缺失型病毒载体表达外源多肽具有一定的启示性。     

用DNA杂交技术测定烟草花叶病毒与长叶车前花叶病毒的关系

从油菜上分离的属于烟草花叶病毒组的油菜花叶病毒15(YMV15)和从大白菜上分离到的白菜花叶病毒(ccMV)的外壳蛋白中,都含有组氨酸和甲硫氨酸,类似于长叶车前花叶病毒(RMV)。用YMV15一、RMV一和番茄花叶病毒(ToMV)突变体Nc广RNA的cDNA与Ymv_RNA、RMV—RNA和ccMV．RNA进行了同源和异源的分子杂交试验。 从分子杂交的R0t曲线和杂交产物的Tm值看,YMV-,和ccMV都不同于RMV,其饱和杂交率表明,ccMV与YMV,,有一定核苷酸序列的同源性,两者都与RMV没有核苷酸序列同源性,说明它们属于烟花叶病毒组的不同亚组。     

长叶车前花叶病毒单克隆抗体的制备及在病毒分型中的应用

应用细胞杂交技术,将长叶车前花叶病毒杭州分离株(RMVha)、烟草花叶病毒普通株(TMVc)和北京番茄株(TMVbe-t)免疫的Balb/c小鼠脾细胞与Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选测定,成功地获得了5株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株属于IgG_(2b),其余4株均属于IgG_(?),5株细胞株均制备了腹水抗体,ELISA效价最高达256000,琼脂双扩散效价达128,根据与15个不同RMV和TMV毒株的反应特性,可将5株单克隆抗体分为A、B、C三组,分别针对a、b、c三个不同的抗原决定簇。根据三组单克隆抗体反应性的差异,15个毒株可分为8个血清型,本文讨论了所获得的5株杂交瘤细胞在植物病毒的诊断、病毒病原的鉴定及病毒分型方面的应用价值。     

长叶车前花叶病毒上海分离株单克隆抗体的制备及其免疫学特性——Ⅱ单克隆抗体免疫反应方法及在株系鉴别上的应用

采用两种不同的ELISA方法比较了长叶车前花叶病毒上海分离株(RMVsh)7种单克隆抗体对完整病毒及其外壳蛋白的反应。结果表明不同的单克隆抗体在两种ELISA方法中的反应特性各异。这可能由于ELISA方法对抗原结构的影响而导致抗原抗体结合的不同。比较烟草花叶病毒群的7个分离株对RMVsh单克隆抗体和兔多克隆抗体的反应。结果表明单克隆抗体能与属于RMV的3个分离株起反应,并能将它们区分开来,与属于TMV的4个分离株均无反应。而兔多克隆抗体与这7个分离株均有较强的反应,但难以区分各株系。表明单克隆抗体在株系鉴别上具有高度的特异性。     

油菜花叶病毒(YMV_(15))的大小、形状、结构及其蛋白亚基的化学特征

在前此的工作中我们对于国内分离的四种烟草花叶病毒(TMV)毒株进行了比较研究,结果发现油菜花叶病毒YMV_(15)的性质最为特殊。在物化性质方面,YMV_(15)的分子很容易聚集成束,等电点较高。在化学结构方面,它的氨基酸组成中有组氨酸和甲硫氨     

烟草花叶病毒的普通株和油菜株RNA的体外翻译比较

对烟草花叶病毒普通株(TMVc)及另一毒株,油菜花叶病毒株(YMV15)的RNA,在麦胚无细胞提取液和兔网织红细胞裂解液中的体外翻译产物,利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,放射自显影,荧光放射自显影以及放射免疫沉淀法进行了分析。结果证明,在YMV15-RNA的体外翻译产物中检测出有与天然的YMVIr外壳蛋白分子量(16 5K)一致的,并被TMV。抗血清和金黄葡萄球菌(Staphylococus aureus)细胞悬浮液所沉淀的多肽。V8蛋白酶酶解图谱也证明该产物与天然外壳蛋白相同。而TMVc-RNA的体外翻译产物中则完全不产生其外壳蛋白(M．W．17．5K),在TMV。抗血清沉淀反应中也未见任何沉淀带产生。属于同一分类组的同一病毒的不同毒株,其翻译策略很可能不一样,对此本文进行了讨论。     

长叶车前花叶病毒(HRVsh)外壳蛋白赖氨酸残基经三硝基苯磺酸修饰后的空间结构变化

用紫外光差光谱和圆二色性光谱研究了长叶车前花叶病毒HRV_(sh)在尿素作用下以及经三硝基苯磺酸(TNBS)修饰后外壳蛋白亚基空间结构的变化。TNBS修饰一个赖氨酸残基后的HRV_(sh)外壳蛋白和HRV_(sh)完整颗粒的a-螺旋变化很小。空间结构的变化是局部的。讨论了空间结构变化与生物活力的关系。     

长叶车前花叶病毒上海分离株单克隆抗体的制备及其免疫学特性 Ⅲ 病毒抗原决定簇的单克隆抗体识别

前文分别报道了长叶车前花叶病毒上海分离侏(RMVsh)单克隆抗体的制备及根据它们在不同免疫反应中的特性,将它们分为两组,分别识别性质不同的抗原决定簇。本文采用修改的Friguet方法测定了各组内各单克隆抗体之间的增值反应(Additivity Reaction)特性,并分析了它们识别抗原决定簇的特性。村料与方法一、病毒及单克隆抗体长叶车前花叶病毒上海分离株及其单克隆抗体1H2、7H1、10H1、11H2、12H3、17H6、29H1来源、制备和特性见前文报道。二、抗原饱和曲线的测定抗原饱和曲线测定采用间接ELISA办法,抗原浓度为2μg/ml。     

芜菁花叶病毒（广州油菜株）生化性质的研究

我们对芜菁花叶病毒广州油菜株(TuMV—G.Z)进行了生化性质的研究。结果表明,纯化的病毒外壳蛋白经10％SDS-聚丙烯胺酰胶电泳出,现一个组份,其分子量为1.4×10~4d;氨基酸组份分析表明,TuMV—G.Z外壳蛋白亚基由约107个氨基酸残基组成,其中包括1个色氨酸和5个酩氨酸;DNS—C1末端法测其N端,结果显示为苏氨酸,且其氨基是游离的。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒辽宁分离物全基因组序列测定

以感病组织总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增并测定黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)辽宁分离物(CGMMV-LN)的基因组全序列。CGMMV-LN基因组全长6 422 nt,5'非编码区(noncoding region,NCR)和3'NCR分别为59 nt和175 nt。CGMMV-LN编码的4个蛋白依次是186 kD和129kD的复制酶,29 kD的移动蛋白和17.4 kD的外壳蛋白。CGMMV-LN与其他4个CGMMV分离物基因组核苷酸序列同源性为97.6%～99.3%,与同属其他3种病毒基因组核苷酸序列同源性仅为61.7%～62.8%。基于186kD复制酶和外壳蛋白氨基酸序列的同源树显示:侵染葫芦科作物的烟草花叶病毒属病毒可分为2个亚组,亚组I包括所有CGMMV分离物,亚组II包括Kyuri绿斑驳花叶病毒(Kyuri green mottle mosaic virus,KGMMV)、黄瓜果实斑驳花叶病毒(Cucumber fruit mottle mosaic virus,CFMMV)和小西葫芦绿斑驳花叶病毒(Zucchini ...     

感染普通烟草花叶病毒或油菜花叶病毒的番茄再生根的离体培养

一、感染病毒后对番茄茎段生根的影响 番茄(彼亚逊品种)出苗后约一个月,分别用汁液接种普通烟草花叶病毒(TMV)或油菜花叶病毒(YMV_(15))。两星期后,选出病状明显又生长较好的植株,用水淋净,各剪去根和顶,留下中段茎,稍加修剪并留下大致相等的叶面