肥大细胞标本的快速简易制作方法

肥大细胞是大多数脊椎动物疏松结缔组织中常见的细胞 ,常成群地沿着小血管分布。该细胞胞质内充满着粗大的嗜碱性颗粒 ,其颗粒具有水溶性 ,用碱性染料染色时呈现异染性。通常在制作肥大细胞标本时先取皮下组织或肠系膜进行铺片 ,风干后经过固定液固定 ,再用甲苯胺蓝、硫堇等染色方法显示胞质内颗粒 ,然后再经脱水 ,透明和封片等常规操作程序完成标本制作。近年来 ,笔者根据该细胞胞质内嗜碱性颗粒具有异染性和水溶性特点 ,采用以酒精为溶剂的甲苯胺蓝染色液对风干后肥大细胞铺片标本不经固定而直接染色 ,染色后只经一道酒精洗去浮液 ,风干后…     

脱细胞牛颈静脉内皮细胞黏附实验研究

目的:探讨去细胞处理后牛颈静脉血管片表面改性方法,增加内皮细胞在材料表面的黏附生长.方法:选取三种表面预衬组分:纤维连接蛋白(Fibronectin)单纯组,纤维连接蛋白+Ⅳ型胶原+明胶混合组,磷酸缓冲液空白组,采用物理包裹法.剪取多步骤去垢剂-酶消化法脱细胞处理的牛颈静脉片,无茵下静态培养7天,标本血管片表面细胞记数,切片染色,扫描电镜检测,比较不同组分预衬对细胞黏附生长的影响.结果:混合组在选取时间点表面细胞数目最多,单纯组次之.第7天HE染色结果显示混合组细胞连接成片,呈单层排布;单纯组表面细胞少量细胞黏附;对照组基本无细胞.扫描电镜显示:单纯组血管片表面细胞稀疏,细胞间无桥接,与下方的纤维结构联结不明显,数目较少;混合预衬组铺连成片,细胞间长梭形有桥接和突起,与去细胞的血管片纤维之间形成连接.结论:去细胞处理的牛颈静脉血管片可生长内皮细胞.经过纤维连接蛋白单独预衬处理的血管片表面,可增强内皮细胞黏附和贴壁生长,三组分混合预衬增强细胞黏附性及贴壁生长方面效果更好.     

糙皮侧耳染色体计数和担孢子形成过程中细胞核行为的研究

糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌褶经有丝分裂阻断剂预处理、原生质体铺片和Gie-msa 染色并结合苏木精染色后,经过多次反复实验观察,证明糙皮侧耳的染色体条数为 9(n=9);糙皮侧耳从菌褶分化完成到子实体完全成熟的过程中,不断有少量新的双核担子产生,发生核配直到释放担孢子。其减数分裂同步性不高。减数分裂后,4个子核分别进入4个担孢子中,留下中空的担子。     

胚胎小肠Cajal细胞的发育研究

目的研究人胚胎小肠cajal细胞的发育变化规律。方法采用全层铺片结合切片的免疫细胞化学技术。结果Cajal细胞呈酪氨酸激酶受体(Kit)和波形蛋白(vinlentin)免疫反应阳性。在胚胎发育早期,cajal细胞较少,为单层,稀疏分布于肌间神经丛周围,细胞为梭形,可见两个短而小的突起,未见分支;随着胎龄的增加,Cajal细胞数量增多,胞体增大,突起伸长,并出现分支。此时,肌间神经丛周围的Cajal细胞出现两层,其长轴彼此垂直,分别平行于环行肌和纵行肌。与此同时环行肌层内亦可见少许Cajal细胞;出生前,肌间神经丛部位的Cajal细胞接近成熟,两层细胞的突起进一步增多、伸长,彼此间形成与成人相似的完整的细胞网络。此时深肌丛附近亦可见少量Cajal细胞。结论人的小肠Cajal细胞发育有一定的时间顺序,即肌间神经丛周围最先出现,肌内次之,深肌丛较晚,出生前肌间神经丛周围的Cajal细胞已经接近成熟。这种发育演变若发生异常,可能导致某些胃肠动力障碍性疾病。     

糙皮侧耳染色体计数和担孢子形成过程中细胞核行为的研究

糙皮侧耳（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）菌褶经有丝分裂阻断剂预处理、原 生质体铺片和Ｇｉｅ－ｍｓａ染色并结合苏木精染色后,经过多次反复实验观察,证明糙皮侧耳的染色体条数为９（ｎ＝９）;糙皮侧耳从菌褶分化完成到子实体完全成熟的过程中,不断有少量新的双核担子产生,发生核配直到释放担孢子。其减数分裂同步性不高。减数分裂后,４个子核分别进入４个担孢子中,留下中空的担子。     

低温冻存对兔脂肪间充质干细胞部分生物学特性的影响

目的：研究低温冻存对兔脂肪间充质干细胞部分生物学特性的影响。方法采用组织块法分离培养兔脂肪间充质干细胞。用倒置显微镜观察原代细胞的细胞形态,流式细胞仪检测兔脂肪间充质干细胞的免疫表型。取第3代兔脂肪间充质干细胞置于-196℃液氮保存半年,37℃复苏并传至第7代。实验分为两组,实验组为冻存复苏后传至第7代的兔脂肪间充质干细胞,对照组为未冻存的第7代兔脂肪间充质干细胞,用MTT绘制其生长曲线;添加成脂、成骨诱导液进行诱导,油红O、茜素红染色和碱性磷酸酶活性检测分别进行鉴定。结果体外培养的兔脂肪间充质干细胞呈梭形纤维样细胞形态,生长力旺盛。流式细胞仪检测显示,第3代兔脂肪间充质干细胞强表达CD44、CD90,阴性表达造血细胞相关的表面标志CD45。两组细胞生长曲线呈典型的“S”形,无统计学差异（P＞0.05）;成脂诱导14 d后,油红O染色呈阳性;成骨诱导2周时茜素红染色阳性,ALP表达活性随成骨诱导时间延长不断增加且无统计学差异（ P＞0.05）。结论冻存后的兔脂肪间充质干细胞体外生长及多向分化潜能未发生显著变化。     

蛙肠系膜平铺片的制作

单层扁平上皮分布在心脏和血管等处的内表面, 肠系膜的间皮也是单层扁平上皮。用蛙肠系膜来制作单层扁平上皮平铺片,取材容易,操作简单,效果好。 1 处死动物用双毁髓法处死青蛙。 2 取材将蛙腹面朝上,置于解剖盘中,剪开腹部皮肤和肌肉。首先从胃幽门下部剪断,再从直肠下部剪断,然后剪断肠系膜根,把小肠和肠系膜全部剥离取出。沿肠系膜缘将肠和肠系膜分离,在培养皿中,用质量分数0．8％的生理盐水将肠系膜洗干净,剪一小方块材料置于洁净的载玻片中央。并用解剖针将其展平。     

大鼠肠系膜动脉的立式包埋及内皮损伤的评估方法

目的建立一种新的小血管立式包埋方法,并通过对内皮损伤的定量分析来评估血管的功能。方法 (1)肠系膜动脉的分离:首先游离大肠小肠部分至体外,暴露出肠系膜动脉,随后用剪刀游离出带有少量组织的肠系膜动脉,最后在镜下剔除黏连组织;(2)肠系膜动脉的立式包埋;(3) HE染色、免疫荧光染色观察肠系膜动脉的结构和内皮损伤程度。结果大鼠肠系膜动脉立式包埋及血管内皮评估方法,能够快速、有效地得到良好形态的大鼠肠系膜动脉切片,并给出小血管病变的病理学研究方法。结论本方法能够降低病理切片的制作难度,为血管病变的研究提供了可借鉴的研究方法,可以进一步推广至其它动物或临床病人的小血管研究。     

远缘杂交的分子基础——DNA原位杂交

打破生物间界线,实现远缘杂交,存在着整体、细胞和分子的障碍。如果远缘生物间遗传分子的结构与功能存在不同程度的不亲和性,那末即使克服了整体的不育或利用细胞融合等技术达到远缘杂交,其最终起决定作用的仍是遗传分子,DNA分子间将反映出相应的不同程度的排斥分离现象。因此往往出现后代的疯狂分离、部分或全部异源染色     

中华绒螯蟹肠道内间质样细胞的显微和超微结构观察

目的探究中华绒螯蟹(Eriocher sinens is)肠道中是否存在间质样细胞。方法通过对中华绒螯蟹中肠和后肠进行全层铺片和肠cajal间质细胞(interstitial cells of cajal,ICC)特殊染色法碘化锌-锇酸(zinc iodide-osmium,ZIO)染色,并结合后肠透射电镜观察中华绒螯蟹后肠ICC样细胞分布及形态。结果光镜检查结果显示:中华绒螯蟹间质样细胞常分布在中肠和后肠的黏膜下层。这些细胞形态相似,多为圆形或卵圆形,胞体直径约为10μm左右,呈灰黑色,常成群呈块状或片状分布,在后肠中的分布更为密集。电镜检测结果显示:这些细胞分布于黏膜下层、肌层与肌层之间和肌肉束边缘。后肠中间质样细胞多为梭形及纺锤形,也有不规则型,常有两个或两个以上突起,与邻近的细胞连接方式多为缝隙连接。此外,本研究还在后肠肠道固有膜层、肌层间和黏膜下层发现了大量颗粒细胞的分布。结论本研究通过传统的特异性ZIO染色和超微形态的观察初步发现中华绒螯蟹肠道内有ICC样细胞的分布。