斯氏狸殖吸虫肠上皮的光镜与电镜观察

斯氏狸殖吸虫(Pagumogonimus skrjabi(?),P.s)是人兽共患病的重要病原。本文报告P.s肠上皮光镜与电镜观察结果,以积累其形态生理和分类学方面的资料。 从陕西宁强县斯氏肺吸虫病流行区捕捉光泽华溪蟹(Sinopotamon dauidi)和陕西华溪蟹(S.shensicnse),分离囊蚴感染犬后100天剖检虫体。10％福尔马林固定石蜡切片,光镜观察;在解剖镜下用细针分离肠管中段,打开肠腔用小针固定在滤纸片上,滴生理盐水冲洗腔面,用含2.5％戊二醛的磷酸缓冲液予固定3小时,经磷酸缓冲液洗后入1％四氧化锻磷酸缓冲液后固定3小时,冼后逐级乙醇脱     

成年贵州小型猪淋巴结组织形态学观察及免疫组化研究

目的对成年贵州小型猪淋巴结进行形态学观察及免疫组化研究,为其用于建立人类免疫相关疾病模型提供参考。方法分别取24只成年贵州小型猪淋巴结组织进行固定、切片、HE染色,光镜下观察组织形态,免疫组化SP法检测CD3、CD4、CD8及CD20阳性细胞的比例和分布。结果成年贵州小型猪淋巴结皮质、髓质分布不规则,皮质、髓质并非完全倒置。皮质由淋巴小结和弥散性淋巴组织构成,髓质内可见髓索和髓窦。CD3、CD4、CD8阳性细胞主要分布在副皮质区,CD20阳性细胞主要分布在淋巴小结和髓质内。结论成年贵州小型猪淋巴结组织结构与其他哺乳动物有所不同,淋巴结内可见皮质、髓质倒置分布,但并非完全倒置。淋巴结中T、B细胞分布与人和其它哺乳动物之间没有明显的差异。     

华枝睾吸虫后尾蚴的扫描电镜观察

华枝睾吸虫后尾蚴的形态结构是研究虫体在终宿主体内发育过程的形态学基础。过去一些学者通过光镜作了比较详细的描述;在电镜方面,迄今只见Fujino et al.(1979),Lee et al.(1982)和Ho.L.Y et al.(1983)的报道。为了更全面地了解华支睾吸虫后尾蚴的形态结构,我们进一步作了扫描电镜观察。 1.材料和方法 从麦穗鱼体内分离华枝睾吸虫囊蚴,取自然逸出的后尾蚴,用生理盐水反复清洗,按常规制备电镜标本。送日立S-450型扫描电镜下观察。     

肾盂灌注冲洗对肾脏功能和结构的影响

目的:探讨经皮肾镜碎石术肾盂灌注冲洗压对肾脏结构和功能的影响。方法:建立20头活体猪高压肾盂冲洗模型,建立24F肾造瘘通道,分别在0mmHg(作自身对照,只造瘘不灌注)、150mmHg、200mmHg、250mmHg、300mmHg压力下各冲洗30分钟。术中取肾组织送病理检查,监测肾单位光镜和电镜下的形态学改变;术后5天留取尿标本,应用免疫比浊测定法(ITM)检测尿微量白蛋白(ALB)和β2-微球蛋白(β2-MG);并于术后第5天再次取肾组织行病理检查观察肾单位的形态学改变。结果:所有灌注组术后都出现尿蛋白的增高,术后第1天和术前相比,都有显著差异(P<0.01)。形态学观察:当肾盂灌注冲洗压在150-200mmHg时,光镜下观察见肾小囊腔轻度扩张,压力超过250mmHg,肾小囊腔见红细胞和蛋白渗出物,肾小管扩张。电镜下见肾近曲小管上皮细胞内空泡形成,微绒毛排列杂乱、稀疏、部分微绒毛脱落。结论:肾盂灌注冲洗安全压不应超过200mmHg。     

大黄鱼头肾巨噬细胞体外模型的构建

通过优化Percoll密度梯度离心技术,从大黄鱼 (Larmichthys crocea) 头肾组织中分离纯化巨噬细胞,并优化细胞培养条件。对所分离细胞进行形态学分析、普通光镜和电镜超微结构观察以及细胞功能验证实验。实验结果表明:细胞单层置于22℃无CO2恒温培养箱中,于L15培养基中培养5d后仍保持较高的活力。普通光镜和电镜观察到大黄鱼头肾巨噬细胞具有伪足发生和较强的吞噬能力、胞浆中富含线粒体以及吞噬小泡。巨噬细胞与不同浓度(0、0.1、1、20 μg/mL)的脂多糖(LPS,Escherichia coli 055:B5)分别孵育3h和24h。施加LPS刺激后,细胞呼吸暴发活性随LPS浓度以及孵育时间变化而变化。孵育3h后,0.1 μg/mL LPS协同PMA可显著诱导巨噬细胞活性氧中间体(ROI)的产生。孵育24h后,所有处理组LPS协同PMA显著抑制细胞ROI的生成(P 0.05)。未添加PMA时, 经1 μg/mL LPS孵育3h和24h后的巨噬细胞细胞ROI的生成量显著降低(P 0.05), 其他LPS处理组间细胞ROI的生成量无显著差异。       

肾盂灌注冲洗对肾脏功能和结构的影响

目的：探讨经皮肾镜碎石术肾盂灌注冲洗压对肾脏结构和功能的影响。方法：建立20头活体猪高压肾盂冲洗模型,建立24F肾造瘘通道,分别在0mmHg（作自身对照,只造瘘不灌注）、150mmHg、200mmHg、250mmHg、300mmHg压力下各冲洗30分钟。术中取肾组织送病理检查,监测肾单位光镜和电镜下的形态学改变;术后5天留取尿标本,应用免疫比浊测定法（ITM）检测尿微量白蛋白（ALB）和β2-微球蛋白（β2-MG）;并于术后第5天再次取肾组织行病理检查观察肾单位的形态学改变。结果：所有灌注组术后都出现尿蛋白的增高,术后第1天和术前相比,都有显著差异（P〈0.01）。形态学观察：当肾盂灌注冲洗压在150-200mmHg时,光镜下观察见肾小囊腔轻度扩张,压力超过250mmHg,肾小囊腔见红细胞和蛋白渗出物,肾小管扩张。电镜下见肾近曲小管上皮细胞内空泡形成,微绒毛排列杂乱、稀疏、部分微绒毛脱落。结论：肾盂灌注冲洗安全压不应超过200mmHg。     

羧甲基壳聚糖促进小鼠皮肤毛囊再生修复的组织形态学研究

目的:观察羧甲基壳聚糖(CMC)促进小鼠皮肤毛囊再生修复的组织形态学结构变化,并与新生小鼠皮肤毛囊的组织形态学结构对比。方法:通过切除皮肤组织建立小鼠背部皮肤组织全层缺损模型,随机分为4组:CMC组、清得佳组、生理盐水组与空白对照组,除空白对照组外其余3组每天分别连续给药,第21天处死;为评估造模后小鼠皮肤毛囊组织的再生修复程度,另取新生小鼠36只,每日处死3只;应用Image J技术观察并测量各组小鼠皮肤组织创面修复率;HE染色后光镜下观察新生小鼠皮肤组织厚度、毛囊及"腺泡样"结构数量;对比分析各组小鼠模型第21天和新生小鼠皮肤毛囊的组织形态学结构。结果:第3天和17天各组小鼠模型皮肤创面再生修复率:CMC组为33.07±9.52%和96.75±2.11%,清得佳组为24.18±6.14%和92.22±0.62%,生理盐水组为21.06±11.59%和87.38±2.79%,空白对照组为8.66±2.27%和85.15±1.34%;采用线性模型重复度量方差分析法,对CMC组与清得佳组、生理盐水组和空白对照组小鼠皮肤创面第17天再生修复率比较存在显著性差异(F=11.970,17.666,8.828,P0.05)。新生小鼠皮肤厚度、毛囊及"腺泡样"结构数量随小鼠日龄增长而增加(r=0.983,0.922,P0.05)。与新生小鼠皮肤毛囊的组织形态学结构相比,第21天CMC组、清得佳组、生理盐水组及空白对照组小鼠模型皮肤组织再生修复程度分别相当于新生小鼠皮肤毛囊发育后期、中期、初期及瘢痕组织。结论:CMC具有促进皮肤毛囊组织形态学结构再生修复的重要作用。     

骨骼肌临时装片制法

材料取猪膈肌。在实验前 3～ 4 d取新鲜的猪膈肌 ,剪成小块置烧杯中 ,放入甘油浸泡 ,使材料透明即可用来观察。实验时取一小块放在载玻片上 ,然后用解剖针顺着肌纤维分离 1～ 2根肌纤维 ,首先在低倍镜下观察 ,当清楚地看到肌纤维时 ,然后滴 1滴 1%醋酸 1～ 2 min后 ,即可观察。由于猪的膈肌肌纤维长而粗 ,经甘油浸泡后在光镜下观察肌纤维非常清楚 ,并可清楚地看到明暗相间的横纹及周边的细胞核。骨骼肌临时装片制法@程辉$梁山县大路口乡中学!山东梁山272607     

鹌鹑、红嘴鸥、黑翅长脚鹬胚胎期 小肠黏膜表面形态结构

应用扫描电镜观察了鹌鹑（Coturnix coturnix）、红嘴鸥（Larus ridibundus）、黑翅长脚鹬（Himantopus himantopus）胚胎期小肠黏膜的形态变化。鹌鹑与红嘴鸥胚胎发育过程中,小肠黏膜形态结构可分为3个阶段。第一阶段为鹌鹑卵孵育第10 ~ 11天、红嘴鸥卵孵育第13 ~ 14天（相当于胚胎发育60%的阶段）,小肠黏膜为山脊状纵行皱襞;第二阶段为鹌鹑卵孵育第12 ~ 13天、红嘴鸥卵孵育第15 ~ 16天（相当于胚胎发育70%的阶段）,小肠黏膜为“W”形板状皱襞;第三阶段为鹌鹑卵孵育第14 ~ 17天、红嘴鸥卵孵育第17 ~ 22天（相当于胚胎发育到80% ~ 100%阶段）,小肠黏膜为指状绒毛。黑翅长脚鹬卵孵育第10天（相当于胚胎发育到60%的阶段）,小肠黏膜为山脊状纵行皱襞;从卵孵育第12天（相当于胚胎发育到70%的阶段）一直到孵出小肠黏膜均为“W”形板状皱襞。初步判断3种鸟小肠黏膜形态发生这种有规律的变化可能是鸟类对其祖先系统发育的重演。     

人脑胶质瘤小型猪原位移植模型的建立及评估

目的利用免疫抑制剂处理小型猪,建立人脑胶质瘤小型猪原位移植模型,为胶质瘤药物筛选和影像学研究提供与人体相近的实验工具。方法人胶质瘤细胞U87-MG移植于裸鼠皮下,待形成肉眼可见肿瘤后备用。选择小型猪联合口服免疫抑制剂环孢素软胶囊(20 mg/kg)和他克莫司胶囊(0.01 mg/kg)进行免疫干预。3 d后,取裸鼠皮下新鲜的U87-MG肿瘤组织,将其修剪为1 mm3组织块,通过立体定向仪和套管针将肿瘤组织移植于经免疫抑制剂处理的小型猪大脑纹状体,持续使用免疫抑制剂21 d,进行核磁共振成像,确认肿瘤的位置。必要时处死动物并解剖,取肿瘤组织固定,进行HE和IHC染色以确定肿瘤的组织形态。结果 12头猪进行了原位移植,3周后,核磁检测确认11头猪成像,肿瘤发生率达到90%以上,胶质瘤猪原位移植模型肿瘤组织HE染色结果、生长特征均符合肿瘤特征;人线粒体抗体染色显示其为人源性组织,胶质瘤特异性标志物GFAP表达阳性。结论联合环孢素软胶囊和他克莫司免疫抑制处理,通过移植肿瘤组织成功建立人脑胶质瘤小型猪原位移植模型。     

西藏小型猪肾脏应用组织学特点

目的研究西藏小型猪肾脏的组织结构,为其在生物医药领域中的应用提供形态学依据。方法取西藏小型猪肾脏标本投入10%中性福尔马林溶液固定24 h以上,修块,冲洗,脱水,透明,包埋,常规石蜡切片,HE染色,光镜观察拍照。结果西藏小型猪的肾与人肾一样呈长而扁的菜豆形,是表面光滑的多乳头肾,肾的表面有致密的结缔组织构成的被膜,肾实质可分为皮质和髓质,由数百万个肾单位和泌尿小管组成,其间由少量结缔组织、血管和神经等构成肾间质。结论西藏小型猪的肾脏结构比犬和猴更接近于人类,在异种器官移植、药物临床前安全性评价等生物医药领域中具有重要应用前景。     

β-淀粉样肽诱导小胶质细胞培养上清致海马神经元损伤模型的建立

目的：建立β淀粉样肽（Aβ1-40）诱导激活小胶质细胞的上清致海马神经元损伤的细胞模型,并初步研究神经元损伤的机制。方法：用不同浓度的可溶性Aβ1-40诱导激活小胶质细胞,光镜下观察不同时间点的细胞形态,ELISA检测其分泌的肿瘤坏死因子仪;用激活后的小胶质细胞条件培养基刺激海马神经元,光镜下观察细胞形态,Western blot检测刺激后海马神经元内诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和硝基酪氨酸（NT）的表达水平,ELISA检测海马神经元内胱冬蛋白酶-3（caspase-3）活性来评价神经元的损伤程度。结果：终浓度为10μmol／L的Aβ1-40与小胶质细胞孵育24h后,取上清液加到培养的海马神经元,孵育24-72h,海马神经元较对照组形态有明显变化;经Western blot检测,神经元内iNOS、NT表达明显增加;ELISA检测神经元内caspase-3活性明显增高。结论：小胶质细胞被Aβ1-40激活后,其释放物有明显的致神经元损伤效应,表明建立了神经元损伤模型。     

小鼠早期肺腺癌模型的病理学研究

目的研究小鼠早期肺腺癌的病理学表现,重点观察肿瘤生长类型和肿瘤-支气管关系。方法 KM小鼠10只每周皮下注射诱癌剂亚硝基胍(MNNG,浓度2.0 mg/m L)0.2 mg,连续4周。喂养至第100天时处死,解剖肺叶并肉眼计数肿瘤,甲醛固定后,随机选择100个肿瘤石蜡包埋、3μm切片、HE染色、光镜下观察和测量肿瘤的组织病理学类型、大小、形态、边缘、生长方式以及与支气管的关系。结果肉眼共见187个肿瘤,随机选取的100个病理证实均为肺腺癌。肿瘤大小0.19~1.33 mm,平均0.48 mm。镜下见三种生长方式:匍匐性、膨胀性和混合性,数量分别为6个、28个和68个;平均大小分别为0.34、0.54 mm和0.47 mm。100个肿瘤中96个与支气管形成直接关系,其中13%和96%的肿瘤分别与通气支气管和换气支气管有关。肿瘤中心部、周边部和外周部支气管的显示率分别为19%、49%和96%;平均直径分别为67、91μm和110μm。肿瘤生长遇支气管阻挡或沿支气管间扩展可形成分叶(33%)或毛刺(35%)。结论小鼠早期肺腺癌生长方式及肿瘤-小支气管关系的病理学研究有助于我们加深对人早期肺腺癌相应CT表现的认识。     

柴胡解毒汤对人肝星状细胞LX-2增殖及凋亡的影响

目的:观察柴胡解毒汤含药血清对人肝星状细胞LX-2增殖、凋亡情况的影响,探究其抗肝纤维化作用的可能机制。方法:将Wistar大鼠分为实验组与对照组,分别以柴胡解毒汤、生理盐水灌胃5天后取血制备大鼠含药血清与正常血清。同时复苏人肝星状细胞LX-2后进行细胞培养和细胞传代。当肝星状细胞数量达到预定值时,将肝星状细胞分为对照组和药物组。观察LX-2细胞在与含药血清孵育24 h、36 h、48 h、72 h后,用CCK-8比色法测定细胞的增殖抑制率。用流式细胞术(Annexin V-FITC,PI染色法)检测细胞凋亡的概况。结果:柴胡解毒汤含药血清在给药24 h后可抑制LX-2细胞的增殖,36 h、48 h、72 h的增殖抑制率分别为0.37%、0.46%、0.44%,并可诱导LX-2细胞发生凋亡,48 h、72 h凋亡概率分别为(9.80±0.95)%、(36.40±5.09)%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:柴胡解毒汤具有抑制LX-2细胞增殖、诱导LX-2细胞发生凋亡的能力,这可能是柴胡解毒汤抗纤维化作用的机制之一。     

黄颡鱼性腺分化的组织学观察

运用组织学方法,观察黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)性腺分化过程.结果表明,在水温(20±1)℃条件下,卵巢分化时间明显早于精巢.卵巢分化最早发生于孵出后13 d左右,其主要标志为原始性腺横切面上出现一个组织突起,进而形成卵巢腔;精巢分化的最早标志为精小叶和输精管的形成,开始于孵出后55 d.在发育早期,雌性生殖细胞的活动及分化明显早于雄性生殖细胞.孵出后25 d,卵原细胞开始通过有丝分裂快速增殖,孵出后34 d左右进入成熟分裂阶段;精原细胞在孵出后55 d时才开始大量增殖,成熟分裂最早发生于孵出后64 d.     

减数分裂联会复合体的制备技术

在生物减数分裂制片中 ,镜下只能看到同源染色体 ,而联会同源染色体的 SC却无法看到 ,本室改进后的微铺展——硝酸银染色技术制备的 SC片 ,在光镜下可以清晰地观察到 SC这一特殊结构。现以小白鼠精母细胞 SC样品制备为例 ,方法如下 :取性成熟的昆明种雄性小鼠 ,颈椎断离处死 ,取两侧睾丸 ,用 2 .2 %柠檬酸钠洗去脂肪等污物 ,去除白膜 ,在 0 .9%的生理盐水中剪碎 ,制成细胞悬液 ,在一牙科蜡 (或涂有石蜡的平面 )上滴加一直径约 1cm的 0 .4 %KCl液珠。取少量细胞悬液滴加在液珠面上 ,在表面张力的作用下 SC则铺展开 ,用涂有 0 .3% Formv…     

一种用于染色体观察的改良绒毛细胞直接制备法

为弥补羊水检查时间过晚之不足,1984年 Simoni利用绒毛标本直接制备法观察染色体获 得成功,此后,即日益为人们所注目。我们改良 了绒毛细胞直接制备方法,以胶原酶代替乙酸 处理,对绒毛细胞直接制备法（简称乙酸法）和 改良法（简称胶原酶法）进行了比较。大致过程 如下： 取妊娠6-7周人流绒毛组织50mg左 右,严格挑选后,生理盐水洗净,移人含最终浓 度0.5,ug/ ml秋水仙素的RPMI 1640培养液中 孵育1小时（pH7.2, 370C),然后分成两份。一 份按乙酸处理法进行制片：(1)去除培养液,加 3m11.5外拘椽酸钠溶液低渗15分钟;(2）加人 数滴3:1的甲醇：冰乙酸预固定10分钟;(3）吸 弃固定液,重复固定巧分钟;(4)吸弃固定液, 加入1m160并乙酸水溶液,处理2分钟,即追加 纯甲醇2ml; (5)吸取细胞悬液于离心管内离心 (1500-1800rpm); (6）冰水滴片,风干,Giemsa 染色。另一份按改良的胶原酶法制备染色体,大 致如下：(1)弃培养液加人15ng/ml胶原酶4ml, 孵育15-20分钟（370C); (2）加人4m1生理盐 水,离心（1000rpm),分钟,弃上清液,经0.75% 氯化钾4 ml低渗20分钟（370C),用甲醇冰醋 酸固定液lml预固定后,依上法离心,弃上清 液;(3）甲醇冰醋酸（3:1)重复固定15分钟,混 匀后自然沉降,吸上层细胞悬液离心,如此重复 二次后,再固定15分钟,气干法制片。28例实 验结果见表1,无论是可数分裂相,还是完整分 裂相出现率,胶原酶法均比乙酸法为高,二者间 有显著差异。     

猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白诱导上皮细胞融合和凋亡

猪链球菌2型（SS2）溶菌酶释放蛋白(MRP)的致病作用迄今不明,为此,以Hep2细胞为上皮细胞体外模型,将纯化的MRP溶液和细胞共孵育,光镜观察,发现MRP可诱导细胞发生两种典型形态学变化：一是诱导细胞融合形成多核巨细胞,随后巨细胞发生凋亡;二是诱导单个细胞凋亡。透射电镜观察和流式细胞分析确证MRP具有诱导上皮细胞凋亡的功能,凋亡率达18%。证明MRP可单独作为SS2的毒力因子。     

骨膜游离移植修复犬股骨颈骨折

目的　探讨犬自体髂骨骨膜游离移植治疗股骨颈骨折的效果。方法　选用毕格犬 7只 ,共 14个髋关节 ,制成股骨颈骨折模型 ,骨折经螺钉固定后 ,取髂骨骨膜移植于骨折处。于术后 1个月和 3个月X线拍片并取髋关节标本观察。结果　术后 1个月 :X线见骨折线模糊 ;肉眼观察 :移植的骨膜与股骨颈生长在一起 ;镜下观察 :骨膜内毛细血管大量增生 ,大量类骨质及软骨细胞生成。术后 3个月 :X线见骨折愈合 ;肉眼观察 :骨膜移植处有大量骨组织生长 ,填满了骨折端 ;镜下 :骨膜内血管网非常丰富 ,大量骨细胞生成 ,新生骨小梁深入到股骨颈原有骨小梁中并与之融合。结论　犬自体髂骨骨膜游离移植可以成活和成骨 ,能重建股骨颈血运 ,促进骨折愈合。     

人外周血单核巨噬细胞诱导、培养及鉴定

在重组人粒.巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)作用下体外诱导培养人外周血单核巨噬细胞,并进行鉴定和功能检测.Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMc),含10%胎牛血清的RPMll640培养基和rhGM-CSF培养7d.光镜、扫描电镜及透射电镜观察细胞形态,鸡红细胞吞噬试验检测吞噬功能,流式细胞术检测单核巨噬细胞表面特征性标志CDl4等生物学技术鉴定贴壁细胞性质.获得的贴壁细胞具备巨噬细胞的形态学特征及免疫表型.有吞噬功能,纯度较高.人外周血单核细胞在rhGM-CSF诱导下向巨噬细胞分化,具有生物学活性,纯度较高.是一种简单易行的体外诱导培养巨噬细胞的方法.