BrdU抗血清制备和应用的研究——Ⅰ.高度特异的BrdU抗血清的制备与特性

半抗原BrU通过与BSA偶联制备了完全抗原,经过光吸收、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳的测定表明,核苷-蛋白质复合物符合制备的要求,每个BSA上估计大约平均有10.3个BrU。用常规免疫的方法获得兔抗BrdU的抗血清,与BrU-EA的双向扩散效价高达32。抗血清稀释128万倍时仍可见明显的ELISA阳性反应。与以前所报道的BrdU抗血清不同,该抗血清具有高水平的识别能力,已达到BrdU单克隆抗体的识别水平,无须纯化即可用于染色体及核酸的研究。     

BrdU抗血清制备和应用的研究——Ⅱ.应用BrdU抗体技术显示BrdU标记的染色体和DNA

使用高度特异的BrdU抗血清,通过酶标第二抗体和DAB-H_2O_2或AEC-H_2O_2显色法,成功地显示了CHO和人染色体的BrdU标记区域。使用同样的程序和方法亦成功地显示了硝酸纤维膜上pg水平的BrdU-DNA印迹点。     

水仙病毒血清学研究I.水仙花叶病毒抗血清的制备及其应用

经人工接种分离纯化的水仙花叶病毒（NMV）,以表现局斑的苋色藜叶片提纯材料,经聚乙二醇（PEG6000）沉淀、差速离心和蔗糖密度离心提纯后,进行6次家兔免疫注射制备抗血清。结果表明注射后3周左右效价最高,经毛细管沉淀方法测定了可达1：5,000。用琼脂扩散方法将此NMV抗血清与来自荷兰的NMV抗血清进行比较,结果发现二者的抗体性相同。应用此法制成的NMV抗血清,以琼脂双扩散、ELISA方法分别对30份水仙组培脱毒试管苗样本进行带毒率检测。结果表明所测得的平均带毒率分别为33．3×和80．0％,并用IEM测定方法验证了ELISA结果的可靠性和准确性。     

大蒜病毒检测用抗血清制备的研究

本文报告了从阿城大蒜田间感染病叶片中分离了大蒜病毒,用聚乙二醇沉淀法提取的抗原浓度高于差速离心法.制备的抗血清效价达1024以上.电镜观察粗提纯的病毒粒子,呈线状,长度为516～846nm占46.9%,1142～1525nm占40.6%.     

兔抗蜡质芽孢杆菌抗血清的制备及鉴定

近年来,用微生态制剂所产生的生物效应有利于增强动物体质,促进生长,以及防治等方面的研究成果,在国内外均有报道。Ｔｏｒｔｕｅｒｏ等进行在肉鸡日粮中添加蜡质芽孢杆菌显著提高增重和改善饲料效率。     

抗血管紧张素原多克隆抗血清的制备及鉴定

为深入研究血管紧张素原（angiotensinogen,AGT)的表达和组织分布特征,我们以原核表达的AGT蛋白C末端片段为免疫原免疫家兔,制备了针对AGT的多克隆抗血清,并对其进行了ELISA、Western印迹分析及免疫组化鉴定。结果发现,经多次免疫后获得的多克隆抗血清不仅效价高（1：25600）,而且能特异性地针对组织内源性及原核表达的AGT蛋白,同时在人和大鼠组织AGT之间会发生交叉反应。以此抗血清进行免疫组化染色,观察到人胰腺的胰岛细胞及杆内胆管上皮细胞胞浆均有AGT蛋白表达。以上结果提示,利用大鼠杆菌融合表达的AGT蛋白可有效刺激家兔产生AGT抗体。本工作为进一步研究AGT乃至局部RAS的生理、病理意义提供了重要的实验工具。     

人肝脏特异的F抗原分离纯化及其抗血清制备

取新鲜的人肝脏,充分洗涤,制备匀浆,上清液经Sephadex-G200、DE52层析,聚丙烯酰胺凝胶电泳,得到电泳纯Ｆ抗原,并免疫制备抗血清.     

黄鳝IgM的分离纯化及兔抗黄鳝IgM抗血清的制备

目的 分离纯化黄鳝血清免疫球蛋白,制备其兔抗血清,并检测抗血清的特异性。方法 用Protein A亲和层析的方法纯化黄鳝血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价,通过western blotting检测抗血清的特异性。结果 纯化了黄鳝血清免疫球蛋白,免疫双扩散法测定兔抗黄鳝免疫球蛋白血清效价为1∶32,western blotting结果显示抗血清具有很好的特异性。结论 成功纯化了黄鳝免疫球蛋白,制备了兔抗黄鳝IgM抗血清,为建立黄鳝的血清学检测系统奠定了基础。     

兔抗仿蜘蛛牵丝蛋白抗体的制备及应用

将仿蜘蛛牵丝基因s6 0 0克隆到GST融合蛋白表达质粒pGEX KG中 ,利用大肠杆菌表达系统表达并纯化了仿蜘蛛牵丝蛋白S6 0 0 ,以之作为抗原制备了兔抗血清。S6 0 0的氨基酸组分分析与理论值相吻合。蛋白质免疫印迹发现该抗血清能与天然蜘蛛丝反应 ,表明设计的仿蜘蛛丝与天然蜘蛛丝有相似的免疫原性。为了定量检测仿蜘蛛牵丝蛋白在转基因家蚕丝腺中 (或茧壳中 )的表达 ,建立了用ELISA方法定量检测茧壳中仿蜘蛛牵丝蛋白量的工作系统     

兔抗人NESTIN抗血清的制备与鉴定（简报）

Nestin belongs to the class VI intermediate filament family and it is a marker for neural progenitor cells. In this work, the 3'-terminal coding sequence(396 bp) of human nestin gene was cloned into pGEX-3X plasmid and introduced into BL21 E. coli cells. The GST-nestin protein was purified with an affinity column. Anti-human nestin antiserum was raised by immunizing a rabbit with the fusion protein. The high specificity of the antibody against human nestin was confirmed by western-blot and immunocytochemistry analysis.     

昆虫神经毒素LqhIT2的表达、抗血清制备及活性分析

根据毕赤酵母密码子偏爱性,不改变毒素蛋白质一级结构,设计合成了昆虫神经毒素LqhIT2基因,并分别克隆至大肠杆菌融合表达载体pPET30-a( )和毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K.在IPTG的诱导下,神经毒素在大肠杆菌中融合表达,表达产物经镍亲和层析纯化后,用于免疫BALB/c小鼠,制备了特异性较高的抗血清,抗体滴度超过1:128 000.利用制备的抗血清,采用斑点杂交,筛选得到了较高水平分泌表达重组LqhIT2的酵母转化子,摇瓶条件下,毒素表达量约9 mg/L.大肠杆菌表达产物没有生物活性,酵母表达产物经注射蝗虫表现出杀虫活性.     

水仙病毒血清学研究Ⅰ．水仙花叶病毒抗血清的制备及其应用

经人工接种分离纯化的水仙花叶病毒（NMV）,以表现局斑的苋色藜叶片为提纯材料,经聚乙二醇（PEG600）沉淀、差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯后,进行6次家兔免疫注射制备抗血清。结果表明注射后3周左右效价最高,经毛细管沉淀方法测定可达1：5,000。用琼脂双扩散方法将此NMV抗血清与来自荷兰的NMV抗血清进行比较,结果发现二者的抗体性相同。应用此法制成的NMV抗血清,以琼脂双扩散、ELISA方法分别对30份水仙组培脱毒试管苗样本进行带毒率检测。结果表明所测得的平均带毒率分别为33．3％和80．0％,并用IEM测定方法验证了ELISA结果的可靠性和准确性。     

兔抗人NESTIN抗血清的制备与鉴定(简报)

巢蛋白(nestin)属Ⅵ类中等纤维蛋白。最初在神经系统发育早期发现有该蛋白的表达。后在正常神经系统中发现仅在未分化的神经前体细胞中有nestin的短暂表达,分化后在神经元和神经胶质细胞中分别被NF(neurofilament,神经丝)和GFAP(Glial fibrillary acidic protein,神经胶质元纤维酸性蛋白)所代替。所以nestin的表达通常被视为神经前体细胞的标志之一。就我们所知,目前商品化nestin的抗体都是鼠抗鼠(克隆Rat401)的抗体,而人鼠之间该蛋白序列的同源性仅为50%左     

水稻CSN5B蛋白抗血清的制备及其应用

目的:克隆水稻COP9信号复合物5B亚基(CSN5B)的基因,原核表达CSN5B蛋白并制备多克隆抗体。方法:用RT-PCR技术从日本晴水稻中扩增得到CSN5B蛋白基因Os CSN5B并将其连接至p EASYTM-T5 Zero克隆载体,然后将其亚克隆至原核表达载体p ET-32a+,并导入大肠杆菌BL21plys S宿主菌中诱导表达;重组的CSN5B融合蛋白经Ni-NTA His.Bind Resin纯化后免疫兔子制备多克隆抗体,并经Western印迹分析。结果与结论:获得了CSN5B蛋白的特异性抗体,Western印迹显示CSN5B蛋白在水稻植株中呈高水平表达,为进一步探讨该基因的功能奠定了基础。     

组织型纤溶酶原激活剂抗血清的制备及初步应用

在研究t-PA过程中,区分t-PA与其它纤溶药物的较特异方法是采用抗体中和抑制试验。本文用200μg t-PA经背部皮下多点免疫家兔,待产生的抗体效价经ELISA测定达1∶1000后,经兔动脉放血收集抗血清。该血清有DE-32直接过滤法纯化,检定其纯度及特异性后,用于中和抑制试验检定t-PA的基因工程产品。结果表明本组构建表达的野生型t-PA和突变体t-PA的活性均能被兔抗t-PA抗体抑制,为特异产品。