红掌遗传转化受体系统的建立Ⅰ离体高效培养体系的建立

以红掌叶片和叶柄为材料,研究了影响红掌愈伤组织的诱导和分化的因素.结果表明,基因型对愈伤组织诱导有显著的影响,Pink Champion愈伤组织诱导率最高,为90%.基本培养基对愈伤组织诱导影响显著.在改良MS培养基上,愈伤组织诱导率为85%,出愈伤多,质量高.消毒时间和接种方式对愈伤组织诱导率亦有显著影响.初展开叶片用氯化汞消毒8-10min,背面向下接入培养基,愈伤组织诱导率高.外源激素对愈伤组织的诱导和芽分化影响显著.单独使用BA不能诱导红掌叶片产生愈伤组织,高浓度BA、低浓度2,4-D时,愈伤组织诱导率高.在MS+BA0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+CM 5%培养基上,芽分化率为97.5%,平均芽分化数为4.5个/块,芽粗壮.将分化出的芽转入1/2 MS+NAA 0.2 mg·L-1+AC 1 g·L-1培养基上诱导生根,生根率达100%.通过上述研究建立了红掌离体高效培养系统.     

草莓遗传转化研究进展

草莓是一种重要的小型浆果,近年来育出很多优良品种,种植面积逐渐扩大.然而仍有很多因素限制了草莓生产的发展.基因工程技术为植物育种、种质资源开发利用等领域开辟了新的途径,可以获得常规育种难以或无法得到的新类型.本文综述了近年来国内外在草莓抗病虫、抗逆、抗除草剂、品质特性、耐贮运性等基因工程的研究进展以及基因型、试管苗生理状态、共培养时间、侵染时间和菌液浓度、抗生素等因素对草莓遗传转化的影响.对草莓转基因研究中存在的主要问题和今后的研究方向及应用前景进行了探讨.     

草莓叶片再生芽及遗传转化系统的建立

本文从五个草莓品种中筛选了再生频率高的品种Ｍ１４,并进一步提高其再生频率至１００％,单叶盘再生芽数至１０．０个;石蜡切片法观察其芽多起源于愈伤组织,少数由叶细胞脱分化后直接形成;该再生体系用于根癌农杆菌菌株ＥＨＡ１０５介导的基因转化,并以１４．５％频率得到抗卡那霉素的抗性芽,初步鉴定是转化芽。上述结果表明频率稳定的草莓品种Ｍ１４叶片再生芽及遗传转化系统已经形成,并可以用于转基因研究。     

"全明星"草莓叶片遗传转化体系的建立

采用根癌农杆菌介导法进行nptⅡ基因对全明星草莓叶片的遗传转化研究,对转化过程中的一些因素进行了探讨：全明星叶片对卡那霉素的敏感实验,得出最适筛选浓度为30mg／L,羧苄青霉素的最适抑菌浓度为450mg／L;50μmol／L乙酰丁香酮(AS)的加入可提高GUS的瞬时表达率;10～15min是最适合叶片侵染的时间;共培养3d对叶片转化较适宜,得到抗卡那霉素的抗性芽的频率为1．1％,初步鉴定是转化芽。为草莓的遗传转化奠定基础。     

新疆杨高效遗传转化系统的建立

选择新疆杨(Populus alba L.var．pyramidalis Bge．)为遗传转化受体材料,为建立根癌农杆菌介导新疆杨高效遗传转化系统,从预培养时间、侵染时间、共培养时间、添加乙酰丁香酮(AS)的时机、共培养培养基中添加乙酰丁香酮浓度、侵染菌液的制备方法、外植体继代方式等7个方面优化筛选。结果显示较合适的转化系统为：预培养8h,农杆菌菌液(OD600=0．4)侵染15min,共培养5d,侵染菌液的最优制备方法是液体培养活化农杆菌2次加离心收集菌体重悬,共培养培养基中添加乙酰丁香酮80μmol／L。新疆杨叶盘转化频率可达38．10％。     

保加利亚尖椒再生及遗传转化条件的优化

为了提高辣椒子叶不定芽的伸长率和遗传转化效率,本研究以保加利亚尖椒子叶为外植体,通过正交试验分别对影响保加利亚尖椒子叶不定芽伸长的激素组合以及遗传转化参数进行了优化。结果表明:诱导不定芽伸长的最佳激素组合为0.2mg/LIAA+1.0mg/LGA3+0.1mg/LPBU,不定芽伸长率最高为60%;以5mg/L潮霉素为选择压,预培养时间为4d、共培养时间为2d、侵染时间为20min时,诱导的抗性不定芽比率最高。本研究建立的辣椒再生及遗传转化体系为辣椒转基因研究奠定一定的基础。     

草莓高效离体叶片再生体系的建立

以草莓'明宝(Meiho)'和'红颊(Benihope)'的叶片为外植体,研究了不同基本培养基、暗培养时间、植物生长调节剂、叶龄、不同放置方式对其不定芽再生的影响.结果表明:各品种叶片不定芽离体再生的最佳条件不同.'明宝'叶片的最佳不定芽再生培养基为MS+2.5 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L 2,4-D,叶片再生的最佳叶龄为30～40 d,再生率可达82.8%;'红颊'叶片的最佳不定芽再生培养基为MS+2.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L 2,4-D,叶片再生的最佳叶龄在10～20 d,再生率可达79.8%.2个品种叶片暗培养14 d可以提高不定芽再生率;叶片正放比反放再生效果好;添加8 mg/L AgNO3和1 000 mg/L活性炭可有效提高再生率.     

简化高效外殖体遗传转化系统的建立

本文报道了一种简化的,高效的叶盘、茎盘,叶柄等外殖体的转化方珐。利用带mini—Ti的致癌土壤农杆菌(Agrobacterium-tumefaciens)与外殖体短时间的共培养,在含有100μg／ml卡那霉素的台适培养基上筛选到频率达40％以上的转化植株。转化的细胞再生的植株茎、叶等各部分外殖体均有抗卡那霉素的特性,DNA—DNA分子杂交的结果表明转化的植株的DNA中含有npt基因的同源区。转化的植株具有正常的形态,能够正常开花、结实。白花授粉子一代的植株的特性表明外源基因能够通过种子传递。本文讨论了影响转化的因素。     

草莓叶片再生芽及遗传转化系统的建立

本文从五个草莓品种中筛选了再生频率高的品种M14,并进一步提高其再生频率至100%,单叶盘再生芽数至10.0个;石蜡切片法观察其芽多起源于愈伤组织,少数由叶细胞脱分化后直接形成; 该再生体系用于根癌农杆菌菌株EHA105介导的基因转化,并以14.5%频率得到抗卡那霉素的抗性芽,初步鉴定是转化芽。上述结果表明高频率稳定的草莓品种M14 叶片再生芽及遗传转化系统已经形成,并可以用于转基因研究。     

液泡转化酶反义基因对番茄的遗传转化

以'中蔬4号'番茄的子叶为试材,通过农杆菌介导法遗传转化,将液泡转化酶反义基因导入再生植株,经PCR和Southern斑点杂交检测证明,5株转化植株基因组中整合有目的基因.遗传转化最佳条件为:在附加1.5 mg/L 6-BA和0.1 mg/L IAA的MS培养基上再生培养,外植体预培养2 d,菌液浓度OD600=0.5,侵染时间5 min,共培养2 d.遗传转化后,对整合有目的基因的再生番茄叶片液泡转化酶活性测定,表明液泡转化酶活性明显受到抑制.获得的转基因植株为进一步研究液泡转化酶基因的功能奠定了基础.     

草莓开花期发生霜害的温度

用人工霜箱对草莓(Fragaria ananassa)叶片和花托进行模拟春霜实验.结果表明草莓叶片有忍耐胞间结冰的能力,最低叶温-6.4℃以上,结冰持续90分钟以内的叶片解冻后还能存活.花托不能忍耐胞间结冰,是通过保持过冷却状态以回避结冰伤害.花托温度越低,发生霜害的累积百分率越大,半开花的花托温度降到-5.4℃时累计有50%发生结冰而造成霜害.盛开的花及鲜重大的花发生霜害的温度较高.     

Mn-SOD基因导入黄瓜的遗传转化体系

黄瓜是我国栽培面积最大的喜温蔬菜之一。在生产上,高温干旱等环境胁、迫因子严重危害黄瓜的产量和品质,甚至导致绝收。任安芝等综述了SOD与水分、盐分、低温和大气污染等逆境胁迫之间的关系,认为:各种逆境胁迫引起的活性氧代谢平衡失调、生物膜结构破坏是导致植物遭受逆境伤害的机理之一。通过基因工程提高植物体内抗氧化酶活性及增加抗氧化代谢的水平是增强植物抗逆性的有效     

Establishment of a Genetic Transformation System and Its Application in Thermoanaerobacter tengcongensis

The whole-genome sequence of Thermoanaerobacter tengcongensis,an anaerobic thermophilic bacterium isolated from the Tengchong hot spring in China,was completed in 2002.However,in vivo studies on the genes of this strain have been hindered in the absence of genetic manipulation system.In order to establish such a system,the plasmid pBOLOl containing the replication origin of the T.tengcongensis chromosome and a kanamycin resistance cassette,in which kanamycin resistance gene expression was controlled by the ttel482 promoter from T.tengcongensis,was constructed and introduced into T.tengcongensis via electroporation.Subsequently,the high transformation efficiency occurred when using freshly cultured T.tengcongensis cells without electroporation treatment,suggesting that T.tengcongensis is naturally competent under appropriate growth stage.A genetic transformation system for this strain was then established based on these important components,and this system was proved to be available for studying physiological characters of T.tengcongensis in vivo by means of hisG gene disruption and complementation.     

黄瓜‘新津春四号’遗传转化体系的建立

对根癌农杆菌介导‘新津春四号’黄瓜(Cucumbis sativus L.)遗传转化的影响因素进行了研究。结果表明,黄瓜叶片适宜的潮霉素(Hygromycin,Hyg)筛选浓度为40 mg L-1;500 mg L-1羧苄青霉素(Carbenicillin,Carb)可有效抑菌。预培养2 d有利于转化;共培养2 d有利于提高转化频率并避免农杆菌的过度生长;添加150μmol/L乙酰丁香酮(Acetosyringone,AS),农杆菌浸染液pH5.7、浓度0.8,浸染时间8 min为最佳遗传转化条件。再生植株经gus基因的瞬时表达检测及PCR检测证明hpt基因已成功转化。     

地被菊的再生与转化系统的建立

文章初步建立了地被菊品种‘早小春’组织培养植株再生系统和农杆菌介导的稳定转化系统。幼蕾管状花瓣诱导培养获得再生植株的最适培养基为MS+2.0mg·L-1ZT+0.5mg·L-12,4-D,愈伤组织诱导率可达95%以上,不定芽的分化率达到87%以上。以再生植株叶片为外植体进行遗传转化实验的结果表明:用MS液体培养基稀释的农杆菌液效果最佳,以感染8min左右,共培养3d为宜。同时附加40mg·L-1卡那霉素和500mg·L-1头孢霉素是地被菊转化的最佳条件。     

短小芽孢杆菌作为芽孢杆菌属基因工程受体菌的研究

以质粒pUB110 DNA转化B. pumilus 289原生质体,转化频率为10~(-3)—10~(-9)与B.tubtilis 168系统相当;但B.pumilus 289原生质体的再生频率(0.3—12.0％)略低于B.subtilis 168(1.53—24.16％);在无选择压力条件下质粒pUB110在B.pumilus 289中经过45个世代周期,自发丢失率小于3％,同于B.subtilis 168系统。外源基因在B.pumilus 289中经25个世代周期丢失率低于5％,而在B.subtilis 168系统中则高达24％;外源基因的表达水平亦高于B.subtilis 168系统。因此,B.pumilus 289是一个值得进一步开发的基因工程受体系统。     

农杆菌介导的河北杨遗传转化体系的建立

以兼具生态和能源植物功能的木本模式植物——杨树(河北杨)为材料,研究了携带促生长基因(35S-DAS5)的根癌农杆菌载体介导的河北杨遗传转化若干因素对转化效果的影响。结果显示,较适宜的转化系统为预培养2-4 d,农杆菌菌液(OD600值为0.4)侵染20 min,共培养4 d,在含30 mg/L卡那霉素(Km)的培养基上诱导不定芽,生根培养基中Km的适宜浓度为10 mg/L。     

农杆菌介导的橡胶草遗传转化体系的建立

以橡胶草为试验材料,利用农杆菌介导法进行遗传转化研究。结果表明：50 mg/L的卡那霉素(Kan)对橡胶草的抗性芽具有很好地筛选效果,生根筛选时,Kan的适宜质量浓度为35 mg/L;最佳抑菌抗生素为羧苄青霉素（cb）,适宜质量浓度为500 mg/L,获得35株抗性试管苗,通过GUS染色及分子生物学检测,最终获得6株转基因植株,转化率为17.1%。可见,获得的橡胶草转基因植株,为橡胶草后续的遗传转化研究奠定了基础。     

葡萄遗传转化研究进展

本文从目的基因、遗传转化途径、再生系统以及筛选和鉴定四个方面评述了近10年来葡萄遗传转化的研究进展。与其它植物相比,葡萄遗传转化较困难,迄今为止仅获得了较少的转基因植株。葡萄再生频率低和葡萄组织对卡那霉素选择的敏感均是遗传转化困难的关键所在。