沙田柚花粉发育过程中同工酶的变化研究

分析了沙田柚花粉在发育过程中３ 种酶的同工酶的活力及类型的变化。结果表明, 过氧化物酶活力在单核期达到最大, 在四分体期与单核期所具有的一条染色较深的快速酶带在双核期消失。α－ 淀粉酶活力在成熟期达到最大, 谱带上也表现出在成熟期有酶带的增多。分析酯酶酶谱, 可见其在各个发育时期均有明显的特征带, 这些特征带可作为花粉发育各时期的生化指标。     

中华大蟾蜍卵母细胞发育过程中乳酸脱氢酶同工酶表现

近年来国外已有人用LDH同工酶研究硬骨鱼胚胎发育中基因表达情况。我们研究了蟾蜍成体几个主要器官(肝、脑、肾、脾、心肌、皮肤和骨骼肌等)的LDH特征酶谱和卵母细胞几个发育时期的酶谱差异。采用聚丙烯酰胺盘状电泳,结果表明成体各主要器官酶谱多为A基因占优势,仅肾例外,为A_4、D-4远高于其它谱带。心肌为另一情况,除靠近阴极的A_4区带活性稍低外,其余酶活差别不大。半年左右多次重复,器官酶谱无甚差异。与     

基于LC-MS/MS策略建立水牛卵母细胞蛋白质表达谱的方法研究

本研究采用了LC-MS/MS策略对如何建立水牛卵母细胞蛋白质表达谱进行了探讨,为后续研究不同时期的水牛卵母细胞和早期胚胎卵裂分化过程中蛋白质组变化建立研究平台。本实验收集水牛GV期和MⅡ期卵母细胞各500枚,去除透明带后将两个时期的细胞混合后提取蛋白质,蛋白质酶解后通过强阳离子交换色谱预分离多肽混合物,预分离后的馏分采用EASY-n LC结合LTQ-Orbitrap质谱鉴定蛋白质表达谱。通过SEQUEST检索,共鉴定出574种蛋白质,生物信息学分析表明,有明确分子功能相关的蛋白质有487种,与组成细胞成分相关的蛋白质有476种,与生物学进程相关的蛋白质有490种,初步建立了一套获得水牛卵母细胞蛋白质表达谱的方法。结果表明建立的LC-MS/MS策略方法适合于水牛卵母细胞蛋白质组学的研究,卵母细胞蛋白质表达谱数据为今后研究水牛不同时期的卵母细胞和早期胚胎卵裂分化过程中蛋白质组学奠定了方法与理论基础。     

小麦与玉米及鸭茅状摩擦禾远缘杂交的胚发育过程中同工酶和蛋白质的变化

通过比较小麦与玉米及鸭茅状摩擦禾属间杂交获得的胚与小麦正常自交的胚之间在不同发育时期过氧化物酶和酯酶的同工酶谱,发现过氧化物酶同工酶表现出时空顺序的特异性变化。在同一发育时期,远缘杂交的具胚子房和无胚子房之间存在过氧化物酶同工酶谱的差异,这可能涉及到与胚发育相关的同工酶的出现。远缘杂交的具胚子房和正常自交的小麦子房之间也有一定的酶谱差异。同时,同一材料还表现出不同发育时期的过氧化物酶酶谱差别。在远缘杂交后的胚发育期间,酯酶同工酶的时空表达不如过氧化物酶显著。此外,对远缘杂交后的胚中的水溶性蛋白质进行了SD S-PAGE分析,初步的分析结果表明,可能存在与胚发育相关的蛋白质。     

罗氏沼虾个体发育早期的同工酶研究

采用聚两燃酰胺梯度凝胶电泳技术,对罗氏沼虾个体发育早期9个时期的八种同工酶系统（EST、ALP、AMY、GDH、MDH、LDH、SOD、ME)进行研究,结果表明：SOD、ME在早期发育过程中酶谱相对稳定,SOD表现为三条谱带,ME表现为两条谱带;面EST、ALP、AMY、GDH、MDH、LDH则随发育其酶谱表现出明显差异,酶谱渐趋复杂。     

蟾蜍种间核移植胚胎发育早期LDH同工酶的表现

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,对中华大蟾蜍(Bufo bufo比gargarizans)与花背蟾蜍(Bufo raddei)种间核移植胚胎发育早期六个不同阶段中全胚胎的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行了分析。酶谱比较的结果表明:在正、反种间移核胚胎中,供体核LDH基因的活动开始表现于尾芽胚期;此前,杂种胚胎中LDH同工酶谱类型与受体一致。     

小麦不同发育时期酯酶、过氧化物酶同工酶酶谱 的比较研究

休眠干种子,浸种8小时和24小时萌动胚酯酶酶谱的特点是:酶带数较多,并且活力高的酶带基本上都集中在快带区与慢带区。一叶期、二叶期、三叶期酶谱的特点是酶带数大为减少,并且活力较低,在慢带区变化尤大。分蘖期是研究的九个发育时期中,酶带最少而且酶活力最低的一个发育时期。剑叶期酶谱与分蘖期相似,但酶带数和酶活力都有所提高。开花后15—18天的乳熟种子的酶谱有较大变化,酶带数显著增多,酶活力增强;并且在这一发育时期,不同材料间的差异容易显示出来。过氧化物酶同工酶酶谱,在不同发育时期是有差别的,但差异不及酯酶大。休眠干种子和浸种8小时种胚的过氧化物酶酶带数目较少而且活力低。但浸种24小时,酶带数显著增多而且活性较强,显色较深。一叶期、二叶期,三叶期的酶带数都比较多而强,至分蘖盛期酶带数有所下降,剑叶期又有所提高,乳熟期种子出现酶带数和酶活性都比较多而强。     

老龄小鼠卵母细胞发育过程中组蛋白乙酰化修饰的改变

分别取年轻C57/B6雌性小鼠(3-4周龄)与老龄C57/B6雌性小鼠(40-42周龄)不同发育时期的卵母细胞,利用免疫荧光技术观察其组蛋白不同赖氨酸位点乙酰化的变化,并用RT-PCR法检测年轻小鼠与老龄小鼠卵母细胞不同发育时期Hdac1与Hdac3(组蛋白去乙酰化酶)mRNA的相对表达量。结果显示:(1)年轻小鼠和老龄小鼠卵母细胞组蛋白H4/K12、H4/K16、H4/K5及H3/K14的乙酰化水平均随发育进程逐渐升高,在完全生长期乙酰化水平达到峰值,至MⅡ期,除H4/K12外,其它三个位点的乙酰化全部消失;与年轻小鼠相比,完全生长期时老龄小鼠卵母细胞组蛋白乙酰化水平较低;(2)在完全生长期之前,年轻小鼠和老龄小鼠卵中Hdac-1与Hdac-3 mRNA的表达量呈逐渐降低趋势,但老龄小鼠在MⅡ期有所升高。与年轻小鼠相比,老龄小鼠完全生长期前各时期卵母细胞中Hdac1 mRNA的表达量均极显著降低(P<0.01);而Hdac3 mRNA的表达量二者之间无显著差异。结果表明:老龄小鼠卵母细胞中组蛋白乙酰化和组蛋白去乙酰化酶表达出现了异常变化。     

中华绒螯蟹不同发育时期胚胎及流产胚胎的同工酶变化

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对中华绒螯蟹(Erlocheir sinensis)不同发育时期胚胎及流产胚胎的6种同工酶(乳酸脱氢酶、醇脱氢酶、苹果酸脱氢酶、酯酶、淀粉酶和过氧化物酶)进行了研究。结果表明,不同发育时期胚胎的乳酸脱氢酶、醇脱氢酶、苹果酸脱氢酶、酯酶及淀粉酶酶谱表现出一定差异。受精卵中未检测到乳酸脱氢酶同工酶活性,卵裂期和囊胚期出现4条酶带,无节幼体及溞状幼体期只有2条酶带;醇脱氢酶同工酶在中华绒螯蟹胚胎发育的各阶段均有表达,但表达的酶带数和活性有区别;在受精卵和溞状幼体期无苹果酸脱氢酶酶带显示,卵裂期酶带数最多,酶活性相对也最强,以后随着发育的进行,酶带数和酶活性都有减弱的现象;酯酶同工酶的变化较为复杂,特别是囊胚期,酯酶酶带突然全部消失;淀粉酶有两种类型：α-淀粉酶和R-淀粉酶。从受精卵发育到幼体其酶带数不增反减。不同发育阶段均检测不到过氧化物酶的活性。第二次抱卵胚胎的酶活性和酶带数低于或有别于第一次抱卵的卵裂期胚胎。流产胚胎中醇脱氢酶、乳酸脱氢酶、淀粉酶与第一次抱卵胚胎不同发育时期的酶谱相比略有变化,而苹果酸脱氢酶、酯酶酶带数迅速减少。     

番茄属(Lycopersicon)四个种的过氧化物酶同工酶分析

本文报告了应用连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳对番茄属Lyco-persicon的四个种:秘鲁番茄L.peruviaunm Mill.,多毛番茄L.hirsutum Humb.et Bonp,醋栗番茄L.pimpinellifolium(Jusl)Mill和普通番茄L.esculentum Mill.的86份材料,15个不同生育时期,不同器官以及同一器官的不同部位的过氧化物酶同工酶的分析结果。结果表明:L.Peruvianum的各个生育期和不同器官的过氧化物酶同工酶谱带叠加共有28条带,L.hirsutum有29条带,L.pimpinellifolium有28条带,L.esculentum有27条带。种间过氧化物酶同工酶谱型差异明显,种内不同生育期叠加总酶谱基本一致。在根、茎和叶中,这四个种的过氧化物酶同工酶酶谱和活性具有相似的生育期变化规律和器官分布规律.在果实发育过程中,种间过氧化物酶同工酶酶谱、活性及变化律规都不相同。本文还就同工酶谱型相似值的意义,野生资源及同工酶分析技术在番茄育种中的应用等问题进行了讨论。     

四类不同倍性鲫鱼在胚胎发育期间同工酶基因表达的比较分析

用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳比较分析了单倍体、二倍体、三倍体和复合四倍体4类不同倍性鲫鱼以及单倍体和二倍体鲤鱼在胚胎发育时期4种同工酶(EST,LDH,MDH,SOD)酶谱。结果表明,单倍体鲫鱼和单倍体鲤鱼胚胎与各自的二倍体胚胎相比,同工酶酶谱看不出差异;天然三倍体银鲫胚胎的MDH和SOD同工酶酶谱与二倍体鲫相似,但EST和LDH同工酶比二倍体增多了酶带,有的酶带如EST5和EST6还可在鲤鱼胚胎中找到相应的表达产物,提供了天然雌核发育三倍体银鲫杂交起源的证据;复合四倍体由于含有鲤鱼的一个外来基因组,其胚胎的基因表达有些与杂种类似,在所分析的4种同工酶酶谱中,都可观察到来自鲤鱼基因的影响。此外,在由源于不同复合四倍体个体的卵子发育形成的胚胎间,还观察到同工酶基因表达的异质性。     

大蒜苗端和花序发育与过氧化物酶变化的相互关系

利用联苯胺组织化学染色、石蜡切片法和聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法,研究大蒜苗端和花序中形态解剖结构在不同发育阶段的变化,与过氧化物酶及其同工酶变化的相互关系。发现同工酶谱的变化与发育变化密切相关：营养生长时期有４条谱带（ＰⅠ、ＰⅡ、ＰⅢ、ＰⅣ）,成花转化期ＰⅢ、ＰⅣ带相继消失,花序发育时期出现了一条新的谱带（ＰⅤ）。酶的高活性部位集中在原形成层细胞中和生长分化区域的细胞壁上。探讨了过氧化物酶与个体发育     

草鱼同工酶发育遗传学研究——Ⅱ.早期发育过程中的同工酶分析

采用淀粉凝胶电泳技术研究了草鱼早期发育过程中(受精后0—200小时)6种同工酶系统(LDH、MDH、GDH、ADH、IDH、EST)的表达谱式。除了ADH以外,其余5种同工酶系统均具有明显的发育变化谱式。根据早期发育过程中同工酶的变化谱式及其组织分布,草鱼的同工酶可分为三大类型:(1)在未受精卵及早期发育过程中一直存在,并常有较广泛的组织分布;(2)未受精卵及早期发育过程中均不存在,一般仅分布于少数几种组织中;(3)未受精卵及胚胎发育早期不存在,直到早期发育过程中某一特定时期才开始出现。     

金鱼(Carassius auratus L.)同工酶的发生遗传学研究 Ⅱ.金鱼胚胎发育不同时期乳酸脱氢酶同工酶分析

采用垂直平板淀粉胶电泳方法,对西吉彩鲫、红高头金鱼胚胎发育不同时期乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行分析比较。研究结果表明,在游动期以前,各个发育阶段的LDH同工酶谱带基本相似。而在游动期以后,随着肝组织的形成,LDH同工酶谱带开始增加,出现了偏向负极的显示肝组织特征的谱带。这表明,细胞分化期间,LDH同工酶的特异性在一种或多种细胞类群中存在。组织和器官的分化与某些基因的活动有关。西吉彩鲫、红高头金鱼在胚胎发育时期LDH同工酶谱带差异不明显,从整个发育时期LDH同工酶发展趋势上看十分相似。这也为金鱼起源于野生的红、黄色金鲫提供了直接的根据。     

He-Ne激光处理不同时期蚕豆幼苗对抗氧化系统的影响

采用功率为3.50 mW/mm2的He-Ne激光处理不同时期蚕豆,研究其四叶期叶片中丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性及同工酶谱的变化。结果表明,与对照相比,He-Ne激光处理不同时期蚕豆,MDA含量均显著降低,且各处理间没有显著差异;SOD、POD、CAT酶活性有不同程度提高。SOD、POD同工酶的酶谱在浸种24小时和胚芽露头期经激光处理后改变,在一叶期处理后没有改变;CAT同工酶谱没有变化;在一叶期处理的三种同工酶谱都没有改变。     

南方鲇的繁殖生物学研究：性腺发育及周年变化

依形态学特征将南方鲇性腺的发育分为６个时期,据组织学特点将雌雄性细胞的变化各分为６个时相,幼鱼的精原细胞经历时间比卵原细胞长;发育的早期和中期,精母细胞的发育速度不同步,但到晚期则趋于同步化,３时相卵母细胞仍有卵黄核,大,小核仁数随卵母细胞的发育而变化,精孔细胞和卵胶膜源于滤泡细胞,雌雄鱼成熟年龄均为３龄,繁殖期３－５月,一次产卵类型,繁殖时不能将卵完全产出。     

欧李叶片过氧化物酶同工酶与叶果矿质元素含量变化的关系

以同一生境条件下113份燕山山脉野生欧李为试材,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,研究欧李叶片过氧化物酶(POD)同工酶与叶果中6种矿质元素的含量变化及其相关关系,为在酶水平上揭示欧李矿质营养代谢遗传差异提供理论参考。结果表明,欧李叶片过氧化物酶同工酶划分为7种酶谱类型,其中Rf 0.126和Rf 0.716酶带为共有的特征带,不同酶谱类型中单株个体间的相同酶带酶量大小以及叶果中的矿质元素含量存在明显差异,变异程度较大;相关分析结果显示,不同酶谱类型中相关酶带酶量大小与叶果中矿质元素含量变化存在显著或极显著的相关关系,表明欧李叶片过氧化物酶同工酶酶量大小变化在一定程度上反映矿质营养代谢的遗传差异和多样性。     

杉木不同无性系过氧化物酶同工酶的研究

本文对杉木（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｉａｌａｎｃｅｌｏａｔａ（Ｌａｍｂ．）Ｈｏｏｋ．）不同无性系及其不同株龄的叶和不同发育时期的雄球花进行了过氧化物酶同工酶检测。结果表明：杉木４１４号无性系叶和雄球花的过氧化物酶同工酶酶谱与其它无性系都具明显差异;同－无性系叶与雄球花的过氧化物酶同工酶酶谱存在显著差异;不同发育时期的雄球花的过氧化物酶同工酶存在顺序表达。作者认为：过氧化物酶同工酶作为种内分类的鉴定性状较为合适,而科、属、种的分类依据则应更侧重于形态特征。根据杉木４１４号无性系的过氧化物酶同工酶的特异性及其短叶、叶端钝圆和多雄花等特点,可以把它定为杉科杉属杉木物种的一个变型：多雄花杉木。     

青鱼胚胎发育中乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的研究

本文报道了LDH同工酶基因在青鱼胚胎发育过程中表达的时序。研究结果表明,LDH-B基因在整过发育过程中部处于活动状态;胚胎发育早期的LDH同工酶谱与成熟卵的酶谱相同;LDH-A_2B_2、-A_3B和-A_4三种同工酶在胚胎发育至出膜前期后才出现。     

鳙鱼同工酶发育遗传学研究

采用淀粉或聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析鳙鱼早期发育阶段(从未受精卵到卵黄吸尽期)及成体不同组织(脑、眼、心、肌、肾、肝)中六种同工酶(LDH,MDH,IDH,ADH,SDH,EST)的分化表达模式。鳙鱼同工酶基因的表达具有明显的组织特异性。早期发育阶段,ADH和SDH均无染色活性;LDH、MDH和IDH具有不同的发育变化谱式,而EST酶谱在整个早期发育阶段均无明显变化。与鲢、草鱼相比,鳙鱼早期发育过程中胚胎Ldh-A基因激活的时间被推迟。上述结果可为鳙鱼种群的生化遗传结构分析以及鳙鱼的人工育种提供基础资料。