香蕉条斑病毒PCR检测方法的正交优化

香蕉条斑病毒引起的香蕉条斑病,对香蕉生产的危害越来越严重,因此对该病毒的检测也变得很重要.而PCR法已广泛用于植物病毒的检测,所以控制PCR的反应条件对结果的准确性有很大影响.由于在检测过程中使用的是较为敏感的简并引物,因此对PCR反应条件的要求较高.本文采用L9(34)正交设计对PCR体系的反应条件进行了优化.最终获得最佳反应条件为Mg2+ 1.5 mmol/L,dNTP 0.15 mmol/L,Primer0.5μmol/L,TaqDNA聚合酶1.5 U.通过最佳反应条件对采集回来的其他带BSV的植株叶片和吸芽的总DNA进行PCR扩增,其结果均表现为比较稳定.     

球茎甘薯花托及花柄切口直接出芽的研究

培养球茎甘蓝的带有花托、花柄和子房的外植体。在附加ＢＡ和ＧＡ３的培养基上,花托部位直接出芽;在附加不同浓度ＢＡ的培养基和附加ＢＡ和ＧＡ３的培养基上均诱导花柄切口直接出芽,在附加ＢＡ和ＮＡＡ的培养基上,花托花柄切口剧烈增生愈伤组织,组织细胞学观察了芽的发生过程,结果表明;花托芽是由靠近维管束的多个皮层薄壁细胞恢复分理解能力形成,并与母体建立维管联系;花柄切口出芽是由皮层几个相靠近的薄壁细胞恢复分裂能     

球茎甘蓝花托及花柄切口直接出芽的研究

培养球茎甘蓝（ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｕｌｏｒａｐａ）的带有花托、花柄和子房的外植体。在附加 Ｂ Ａ 和 Ｇ Ａ３ 的培养基上,花托部位直接出芽;在附加不同浓度 Ｂ Ａ 的培养基和附加 Ｂ Ａ 和 Ｇ Ａ３ 的培养基上均诱导花柄切口直接出芽,在附加 Ｂ Ａ 和 Ｎ Ａ Ａ 的培养基上,花托花柄切口剧烈增生愈伤组织。组织细胞学观察了芽的发生过程,结果表明：花托芽是由靠近维管束的多个皮层薄壁细胞恢复分裂能力形成,并与母体建立维管联系;花柄切口出芽是由皮层几个相靠近的薄壁细胞恢复分裂能力共同形成,与母体没有维管联系;花托增生愈伤组织也是皮层薄壁细胞剧烈分裂的结果。     

正交设计优化电转染CHO细胞的方法

目的:探讨细胞电穿孔转染的优化方法。方法:按照L9(34)正交表安排各因素水平的细胞电敏感性实验,以台盼蓝染色计数确定细胞存活率,最接近50%存活率为最优方案,根据最优方案将CHO-dhfr-细胞与DNA混匀电穿孔转染以验证正交设计结果。结果:CHO-dhfr-细胞电转染的优化参数为低离子强度Tris-Cl缓冲液、750 V/cm、50μF、电击2次、间隔1 min,各因素对转染的影响大小依次为缓冲液、电场强度、脉冲次数、电容。结论:确定了电穿孔法转染CHO-dhfr-细胞的方法,为进一步应用该细胞株表达重组蛋白打下了基础。     

正交法优化香蕉豆乳饮料配方的研究

以香蕉泥、豆浆、牛奶、糖为主要原料通过正交试验确定主要配方,对产品进行稳定性、乳化性、香味等综合品质的调配,制作出一种香味浓郁、口感爽滑的香蕉豆乳饮品,丰富了我国的大豆蛋白饮品市场。     

应用正交设计法优化长柄双花木不定芽生长条件

通过正交设计方法L9(34)研究了培养基中的植物生长调节剂6-BA、NAA、GA对长柄双花木(D isanthuscercidifolavar.longipesH.T.Chang)不定芽生长速率的影响。实验结果表明:最优水平组合为6-BA 0.5 m.gL-1 GA 1.0 m.gL-1。BA对实验结果的影响达到极显著水平(p≤0.01),该因素不同水平间差异达到极显著水平(p<0.01)。     

出芽短梗霉产聚苹果酸发酵条件的优化

【背景】出芽短梗霉可发酵葡萄糖生成聚苹果酸,但存在转化率和转化效率低等瓶颈,阻碍其实现商业化生产。【目的】通过优化发酵培养条件,提高出芽短梗霉的聚苹果酸产量、糖酸转化率和生产强度。【方法】采用单因素试验优化适宜出芽短梗霉BK-10菌株产生聚苹果酸的培养条件,通过Plackett-Burman法对培养基组分筛选显著性影响因素,并对其培养基中无机盐进行正交试验优化,最后进行5 L发酵罐验证。【结果】最优培养基配方和培养条件:100 g/L葡萄糖,1.5 g/L尿素,0.20 g/L KH_2PO_4,0.20 g/L ZnSO_4,0.05 g/L MgSO_4,0.75 g/L KCl,30 g/L CaCO_3,0.01%吐温-80,发酵温度26°C,250 mL摇瓶装液量50 mL。【结论】通过优化,聚苹果酸的糖酸转化率达到0.71 g/g,生产强度达到0.89 g/(L·h),较优化前分别提高了18.33%和71.15%,为发酵葡萄糖合成聚苹果酸进而生产L-苹果酸工艺的工业化生产奠定经济性基础。     

正交设计优化彩色辣椒离体再生条件的研究

目的：优化彩色辣椒的离体再生条件。方法：以彩色辣椒无菌苗的幼叶、叶柄、茎段和茎尖为外植体进行愈伤组织的诱导,采用正交试验设计,研究6-BA、NAA和IBA对芽分化的影响,并进行了生根培养。结果：幼叶的愈伤组织诱导率高于其它外植体,在最适诱导培养基MS＋6-BA（2.0mg/L）＋NAA（0.2mg&#183;L-1）上,达96.7%;筛选出高效芽分化的培养基为MS＋6-BA（3.0mg&#183;L-1）＋NAA（0.5mg&#183;L-1）＋IBA（0.1mg&#183;L-1）,分化率达93.3%;适于生根的培养基为1/2MS＋NAA（0.2mg&#183;L-1）,生根率达90%,根粗壮、较长,侧根多。结论：筛选出了彩色辣椒离体再生的适宜外植体和培养条件,为彩色辣椒离体快繁提供参考。     

一株香蕉枯萎病拮抗菌HQB-1的分离鉴定及其发酵条件优化

【背景】香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense,Foc)引起的一种真菌毁灭性土传病害,近年来施用生防菌被认为是一种有效的防治手段。【目的】从香蕉根际土壤中分离筛选具有良好防效的生防菌,并通过优化培养基及发酵条件,提高生防菌数量及抑菌效率。【方法】以福建省漳州蕉园中根际土壤为样品,以香蕉枯萎病致病菌(4号生理小种)为指示菌,通过稀释涂布、平板对峙法筛选得到一株具有较强抑菌活性的拮抗菌株HQB-1。通过形态观察、生理生化检测及16SrRNA基因序列分析,初步鉴定其种属,并采用单因素试验及正交设计优化菌株的发酵培养基及发酵条件。【结果】初步鉴定HQB-1菌株为Burkholderiastagnalis;最适培养基为:牛肉膏5.0 g/L,酵母浸粉10.0 g/L,NaCl 5.0 g/L;最佳发酵条件为:温度27°C,pH 7.0,转速200 r/min,接种量1%,培养时间36 h。【结论】使用该条件培养获得的有效活菌数及抑菌率较优化前明显提高,其中OD600由优化前的1.251提高至1.881,抑菌率由优化前的9.18%提高至34.60%。     

云南松SSR-PCR反应体系的建立与优化

为了建立适宜云南松SSR-PCR的反应体系和扩增程序,利用近缘种火炬松的引物,采用正交设计L16(45)对云南松SSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了适于云南松的SSR反应体系.在10μL的反应体系中,模板DNA的用量为30.0 ng,Taq DNA聚合酶的用量为1.0 U,Mg2+的浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.4 mmol/L,引物的浓度为0.2 μmol/L.扩增程序为:94℃预变性4 min;94℃变性45 s,48℃退火30 s,72℃延伸30 s,30个循环;72℃延长10 min,4℃保存.最后利用1个居群对该体系进行稳定性验证,结果可用于云南松SSR标记的研究.     

一株脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件优化研究

通过利用溴甲酚紫显色培养基初筛和酶活测定法复筛得到产脂肪酶的一株细菌HP2,经形态学观察和生理生化测定初步鉴定该菌株为不动杆菌属。并对该菌株的摇床培养产酶条件进行了初步研究,采用正交试验对HP2菌株发酵产脂肪酶的条件进行了优化,得到最佳发酵条件为初始pH为7.7,培养温度为35℃,接种量(V/V)为1.5%,发酵周期为48 h,酶活力达到129.7 U/mL。     

黑曲霉纤维素酶高产固态培养基的快速优选研究

研究采用正交设计,对影响黑曲霉 Ｆ_２７产纤维素酶的 １０个营养因素在较少水平下进行初选,从中选出对产酶影响显著的４个因素．在此基础上采用均匀设计,在较多水平下进行较少次数的试验,将试验结果用微机逐步回归处理,得到最优回归方程,由回归方程计算出预测极值点和预测极值、优化出高产纤维素酶固态培养基配方．经试验验证,试验实测值和预测值基本相符, ＣＭＣａｓｅ活力平均达 ３７０５Ｕ／ｇ, ＦＰＡ活力平均达 ７．４Ｕ／ｇ．表明对于多因子试验,应用正交设计结合均匀设计的试验方法是快速、简便、可行的．     

大桑菊合剂的提取工艺研究

目的：大桑菊舍刺为医院制剂,由桑叶、菊花、薄荷、连翘、鱼腥草等中药经乙醇提取制成,为完善大桑菊合剂的制备工艺,对该制剂的制备工艺进行初步的研究。方法：①实验设计：以加水量、提取时间、提取次数和醇沉浓度为考察因素,各因素均取3水平,采用正交试验L4（3^4）优选制备工艺。②含量测定方法：以大桑菊饮合剂中总黄酮的含量为指标,以芦丁为标准品,利用紫外分光光度计于503nm下测定吸光值,计算样品中总黄酮的含量,以此作为筛选大桑菊合剂最佳制备工艺的重要指标。结果：最佳制备工艺为不浸泡,加8倍水,提取3次,每次1小时。结论：经正交设计优化的大桑菊合剂的中药制备工艺合理、可行。     

黄绿木霉菌产纤维素酶条件优化

利用正交设计方法研究了温度、接种量、pH值、装液量等不同发酵条件对黄绿木霉菌产纤维素酶的影响,研究结果表明,在这些因素中影响该菌株产纤维素酶的最主要因素为温度,而其他三个因素对该菌株产纤维素酶影响比较小.研究中得出该菌株最适产酶条件为发酵5d,28℃、初始pH为6、接种量为8%、装液量为40 mL(150 mL三角瓶),摇床转数为170 r/min.     

黄绿木霉菌产纤维素酶条件优化

利用正交设计方法研究了温度、接种量、pH值、装液量等不同发酵条件对黄绿木霉菌产纤维素酶的影响, 研究结果表明, 在这些因素中影响该菌株产纤维素酶的最主要因素为温度, 而其他三个因素对该菌株产纤维素酶影响比较小。研究中得出该菌株最适产酶条件为发酵5d, 28℃、初始pH为6、接种量为8%、装液量为40 mL (150 mL三角瓶), 摇床转数为170 r/min。     

人源性流行性出血热病毒的形态特征

本文报道流行性出血热病毒(汉坦病毒)H-114株的电镜形态。发现形态发生以内质网膜和胞浆膜芽生为主。病毒颗粒为圆形或卵圆形。具有双层膜结构,大小为90～120nm。提出了汉坦病毒形态发生的理论观点。     

均匀设计和正交设计在黄芪活性成份提取中的应用比较

以黄芪为例,分别用均匀设计法和正交设计法考察黄芪提取工艺过程中的优选方法,分析讨论了这两种设计的特点,得出在多水平多因素的条件下,均匀设计更具有优势;并根据两种实验设计方法的特点,讨论了两种方法在中医药研究中联用的可行性．