雌性大熊猫发情期尿中17β—雌二醇与孕酮水平的变化及其与配种的关系

本文用放射免疫法测定了3头雌性大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)发情期尿中17β-雌二醇与孕酮水平的变化。大熊猫的发情行为与尿中17β-雌二醇浓度的变化密切相关。发情期中,随着孕酮水平下降的同时雌二醇水平却迅速上升并达峰值(28.2—65.5毫微克/毫克肌酐),然后再下降到基础水平。性活动最强烈的日期发生在17β-雌二醇最高峰值的当天或峰后一天。在雌二醇峰后,尿中孕酮水平逐步升高,发情后期的孕酮平均值显著高于发情前期(P<0.01)。本实验中,3头大熊猫均妊娠,说明自然交配或人工授精的适宜时间可根据雌性大熊猫尿中17β-雌二醇的监测予以确定。     

小熊猫妊娠期粪便中孕酮、雌二醇的水平变化

2000年3—8月在成都动物园和成都大熊猫繁育研究基地,用放射免疫分析法测定了6只雌性小熊猫粪样中孕酮（P）和雌二醇（E2）的水平变化,同时对其繁殖行为进行了观察。研究结果表明,交配后的雌体粪样中E2浓度下降至基础水平,P浓度在30d后上升至150ng／g以上;怀孕雌体在妊娠期粪样中P水平在200ng／g以上,P峰值可以达500ng／g以上;假妊娠者粪样中P水平一般不超过150ng／g,P峰值在200ng／g以下;雌体产前半个月孕酮迅速下降,E2缓慢上升,产后P保持在基础水平。这意味着可通过测定粪便中P水平进行早孕诊断、产期预测和真假妊娠判断。根据行为观察和粪样激素分析可知,雌兽妊娠期为123—128d（X=124,N=5）,产仔率为1．8／胎（N=5）。     

普通小球藻引发水中17β-雌二醇的光降解

研究了普通小球藻引发水中17β-雌二醇(E2)的光降解,结果表明,在250W高压汞灯(HPML,nm)的照射下,藻浓度为4．0×10^10个·L^-1时,17β-雌二醇的光降解率可达37％．藻浓度为4．2×10^10个·L^-1时,17β-雌二醇浓度在1．5×10^-5-6．0×10^-5mol·L^-1范围内,其光降解速率与初始浓度成正比,反应是假一级．另外,还研究光强、藻悬浮液浓度和17β-雌二醇初始浓度等对此反应体系的影响。     

人胎盘雌二醇 17β-脱氢酶的染料凝胶亲和层析

利用染料凝胶亲和层析及DEAE-Sepharose离子交换层析改进了雌二醇17β-脱氢酶的提纯方法,提纯的酶的质量有所改进,制备步骤简便,且凝胶层析柱可以反复使用。     

17β-雌二醇对雄性剑尾鱼精巢和肝发育的影响

用组织学的方法研究了50μg/L 17β-雌二醇(E2)持续50 d暴露对剑尾鱼(Xiphophorus helleri)精巢和肝组织结构变化的影响.结果显示,剑尾鱼受E2暴露后,精巢内的精小囊数量减少,精原细胞发育停滞,精子数量稀少甚至没有;肝细胞胞质内出现脂肪空泡和脂肪沉积等脂肪肝症状.结果表明,E2具强雌激素效应,对剑尾鱼精巢和肝组织的损伤具有时间效应,随着暴露时间延长其损伤更严重,但都在其耐受范围之内,未造成鱼体的死亡.精巢组织结构损伤可作为检测水环境雌激素污染生物标记.     

大熊猫生殖生物学研究:Ⅰ.大熊猫发情期血清和尿液中促黄体素、孕酮和17β-雌二醇含量的变化

作者用放射免疫法和生物测定法对4只大熊猫发情期血清和尿液中的促黄体素、孕酮和17β-雌二醇的含量进行分析。结果表明:3只大熊猫在发情高峰期均出现雌二醇和促黄体素高峰;LH峰值出现在E_2峰值之后。根据雌兽在发情期血清和尿液中这二种激素含量的变化可为选择人工授精的最佳时间提供可靠的理论依据。     

17β-雌二醇对雄性剑尾鱼生长发育的影响

用组织学的方法研究了50μg/L 17β-雌二醇(E2)持续50d暴露对剑尾鱼精巢、肝脏和鳃组织结构变化的影响,结果显示,剑尾鱼受E2暴露后,精巢内的精小囊数量减少,精原细胞发育停滞,精子数量稀少甚至没有;肝细胞胞质内出现脂肪空泡和脂肪沉积等脂肪肝症状;鳃丝和鳃小片出现不同程度的肿胀、增生、融合现象.结果表明,E2具强雌激素效应.对剑尾鱼精巢、肝脏和鳃组织的损伤具有时间效应,随着暴露时间延长其损伤更严重,但都在其耐受范围之内,未造成鱼体的死亡.精巢组织结构损伤可作为检测水环境雌激素污染生物标记.     

17β-雌二醇诱导斑点叉尾鮰雌性化研究

研究以人工配合饲料为17β-雌二醇(17β-estradiol, 17β-E₂)载体, 对斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)开口仔鱼连续饲喂27d进行雌性性别诱导, 探究斑点叉尾鮰XY雄鱼雌性化的合适17β-E₂剂量。60日龄测量并统计各组试验鱼的生长数据、存活率, 解剖观察性腺结构, 结合遗传性别鉴定结果计算性逆转率, 并通过组织切片分析各组试验鱼中XX和XY雌鱼卵巢发育情况。270日龄检测XY雌鱼和对照组雌鱼的鳃、心脏、肝脏、肾脏、卵巢和肌肉等组织中17β-E₂含量。研究进一步地采用qRT-PCR检测270日龄雌雄性别分化基因foxl2和dmrt1在XX和XY雌鱼卵巢中的表达水平。结果显示: 各组XY雌鱼的比例和卵母细胞数量均随17β-E₂剂量的提高而增加, 且核仁数量也随之增多, 而核质比相应减小; 各组XY雌鱼的体重和体长随着17β-E₂剂量的提高先增加后减小, 但存活率没有显著性变化; 各组XY雌鱼与对照组雌鱼的鳃、心脏、肝脏、肾脏和肌肉组织中17β-E₂含量均无显著性差异, 卵巢中17β-E₂含量与添加剂量呈正相关; 雌性性别分化基因foxl2在XY雌鱼中的表达量显著升高, 雄性性别分化基因dmrt1在XY雌鱼中的表达量显著降低。研究建立了17β-E₂诱导XY雄性斑点叉尾鮰雌性化方法, 为后续全雄斑点叉尾鮰新品种的培育奠定基础。     

17β-雌二醇对不同性腺发育时期鲤鱼生长激素分泌的影响

目的　以不同性腺发育阶段的雌性鲤鱼为材料 ,采用脑垂体碎片离体灌流孵育的方法 ,研究 17β 雌二醇对由神经内分泌因子—促性腺激素释放激素和促甲状腺素释放激素诱导的生长激素分泌的调节作用的季节性变化特点。方法与结果　用 10 - 8mol L和 10 - 1 0 mol L 17β 雌二醇对鲤鱼脑垂体碎片进行 10～ 12h的过夜孵育后 ,性腺处于退化期和发育期的的鲤鱼脑垂体对浓度依次为 10 - 9,10 - 8和 10 - 7mol L的促性腺激素释放激素类似物的脉冲刺激的反应性显著大于对照组 ,但在成熟期 17β 雌二醇作用组的反应性与对照组无显著性差异 ;经过同样浓度的 17β 雌二醇预孵育后 ,鲤鱼脑垂体碎片对浓度依次为 10 - 1 0 ,3× 10 - 8和 10 - 7mol L的促甲状腺素释放激素脉冲刺激的反应性也表现出季节性差异 ,反应性的增强作用表现为 :成熟期 >发育期 >退化期。结论　性类固醇激素具有调节脑垂体对刺激生长激素分泌的神经内分泌因子的反应性的作用 ,这种调节作用与鱼体的性腺发育状态有关 ,具有季节性变化的特点     

NO信号途径在17β-雌二醇抑制大鼠VSMC ET-1生成中的作用

目的:用培养的血管平滑肌细胞(VSMC)探讨17β-雌二醇抑制内皮素-1(ET-1)生成的机制。方法:分别给予不同浓度的17β-雌二醇(10-9～10-7mol/L)或加入L-NAME作用VSMC不同时间,利用放免法测定ET-1的含量;同时检测ECE-1的活性以及preproET-1mRNA的表达。结果:17β-雌二醇可抑制基础状态下VSMCET-1的生成,其作用与ECE-1活性的改变无关;L-NAME可抑制17β-雌二醇的作用;RT-PCR结果显示,17β-雌二醇可以抑制preproET-mRNA的表达,而L-NAME可逆转17β-雌二醇所致preproET-1 mRNA表达的下降。结论:在基础状态下,17β-雌二醇可抑制VSMCET-1的生成,17β-雌二醇抑制ET-1的生成与ECE-1的活性改变无关,17β-雌二醇主要通过NO信号途径减低VSMCperproET-1 mRNA表达来抑制ET-1的生成。     

恶臭假单胞菌SJTE-1中氧化17β-雌二醇的17β-羟甾类脱氢酶2及其转录调控因子AraC的鉴定

[目的]假单胞菌SJTE-1可高效转化17β-雌二醇,但其代谢机制尚不清楚。本文鉴定和表征了该菌株中参与雌二醇降解与调控过程的17β-羟甾类脱氢酶2(17β-HSD2)和转录调控因子AraC。[方法]我们通过荧光定量PCR分析了17β-hsd2和araC的转录水平;我们在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中异源表达了17β-HSD2和AraC基因,并利用金属离子亲和层析法纯化获得了重组蛋白;我们体外表征了17β-HSD2的酶学性质,利用高效液相色谱鉴定了其产物;通过电泳迁移转移法和DNase酶I足迹试验,我们鉴定了重组蛋白AraC的结合能力与结合位点。[结果]17β-HSD2和AraC可被17β-雌二醇诱导表达;蛋白序列比对结果表明17β-HSD2含有短链脱氢酶/还原酶(SDR)和β-羟甾类脱氢酶的保守结构与残基。该酶以NAD+为辅助因子,在C17位点氧化17β-雌二醇,其Km值为0.082 mmol/L,Vmax值为56.26±0.02μmol/(min·mg);5 min内可转化97.4%以上的雌二醇。转录调控因子AraC可直接结合17β-hsd2基因启动子区的特异位点;雌二醇与雌酮可解除这一结合,启动17β-hsd2基因转录;过表达AraC蛋白可抑制17β-hsd2的转录。[结论]假单胞菌SJTE-1的17β-羟甾类脱氢酶2可高效催化17β-雌二醇转化,并受到转录因子AraC的直接调控。本工作可推进细菌的雌激素降解酶学机制与调控网络研究。     

大熊猫生殖生物学研究:Ⅱ.大熊猫妊娠期尿中孕酮和绒毛膜促性腺激素样物质含量的变化

本文用放射免疫法测定了四只大熊猫在妊娠期和非妊娠期尿中孕酮和CG样物质含量的变化。结果表明:在大熊猫胚胎着床前,孕酮和CG样物质含量较低;胚胎着床后,二种激素的含量显著上升并达到高峰。雌兽妊娠期尿中孕酮和CG样物质含量的变化规律可为证实大熊猫系延缓着床型动物提供一些理论依据;同时,也为大熊猫的妊娠诊断和预测分娩提供一些参考数据。     

雌貉繁殖期血清雌二醇,孕酮水平的变化和阴道涂片的观察

本研究利用放射免疫分析法,测定了雌貉繁殖期血清雌二醇、孕酮水平的变化。分析并探讨了血清雌二醇、孕酮水平与阴道涂片中各类细胞数量比例和阴门开口宽度间的关系。结果表明,角化鳞状上皮细胞的数量比例及阴门开口宽度与血清雌二醇水平有显著的正相关。通过检测阴道涂片中角化鳞状上皮细胞的数量比例,可作为雌貉发情鉴定的方法之一。     

17β-雌二醇对大鼠海马神经元延迟整流型钾离子通道活动的影响

用膜片箝技术的细胞贴附式和内面向外式,研究17β-雌二醇（E2）对大鼠海马神经元延迟整流型K 通道的影响。结果表明,1．0和10．0nmol／LE2可分别使42pSK 通道开放概率由（67．4t18．2）％下降到（41．22±12．5）％和由（56．3±15．8）％下降到（13,2±12．6）％,通道开放频率由（43．40±6．7）Hz下降到（27．68±9．1）Hz和由（38．19±10．1）Hz下降到（15．79±3．5）Hz,通道平均开放时间缩短,平均关闭时间延长,但通道电流幅度无显著改变,提示E2对海马神经元42pSK 通道的活动具有抑制作用,这种作用可能是激素直接作用于细胞膜的结果。     

17β-雌二醇对雄性唐鱼卵黄蛋白原的诱导及性腺发育的影响

以17β-雌二醇(E2)诱导雄性唐鱼产生卵黄蛋白原(Vtg),采用SephacrylS-300凝胶过滤层析柱提纯了雄鱼整体匀桨液的Vtg。结果显示,已确定被纯化的唐鱼Vtg在4%—7.5%Native—PAGE电泳中分子量为440kD左右,能同时被考马斯亮蓝、糖蛋白、磷蛋白、脂蛋白染色方法同时染色,是一种富含糖、磷、脂的蛋白。与对照组作比较,17β-雌二醇暴露组其体重明显下降(P<0.01),精巢发育滞后。结果表明,17β-雌二醇能够诱导雄性唐鱼产生大量的Vtg,并影响到其生长及精巢发育。雄性唐鱼Vtg可作为环境雌激素监测的有效生物学标记物。     

甾类雌激素叠氮化物与雌二醇17β-脱氢酶的激光亲和反应

以雌酮为原料,经过硝化、还原、重氮化及叠氮化钠处理,得到2-叠氮雌酮、4-叠氮雌酮、2-叠氮雌二醇和4-叠氮雌二醇。本文测定这四种叠氮衍生物作为雌二醇17β-脱氢酶底物的表观条件K_m依次为;1.75×10~(-4)mol/L、2.37×10~(-4)mol/L、1.39×10~(-4)mol/L、1.97×10~(-4)mol/L。在280nm波长激光照射下,它们均使雌二醇17β-脱氢酶失活,并遵循准一级动力学规律。如果这类亲和反应发生在雌激素依赖性肿瘤细胞内的雌激素酶或受体上,使酶或受体失去活性而不能发挥其正常的生理功能,可能会抑制肿瘤细胞的生长。用320nm波长激光照射时,四种化合物都没有使酶失活的作用。     

17β-雌二醇及其受体调节剂对去卵巢大鼠子宫钙黏蛋白和连环蛋白表达的影响

目的：探讨17β-雌二醇（Est）及其受体调节剂对去卵巢大鼠子宫钙黏蛋白和连环蛋白表达的影响。方法：大鼠卵巢切除后隔日皮下注射17β-雌二醇以及17β-雌二醇合并他莫昔芬（Tam）的芝麻油溶液,21d后取子宫组织,用免疫组化法及蛋白免疫印迹法检测不同处理组上皮钙黏蛋白（E-eadherin）、α-连环蛋白（α-catenin）、β-连环蛋白（β-catenin）的表达。结果：①钙黏蛋白和连环蛋白在卵巢切除组中具有较高表达,显著高于假手术组;17β-雌二醇可下调钙黏蛋白和连环蛋白的表达。②他莫昔芬对Est（0．1mg／kg）引起的钙黏蛋白、连环蛋白表达下调表现为拮抗作用,而对Est（1．0mg／kg）则表现为协同作用。结论：17β-雌二醇可下调大鼠子宫钙黏蛋白和连环蛋白的表迭但无剂量效应,该作用可能部分通过雌激素受体起作用。