AFLP标记技术在鉴定甘蓝种子真实性及品种纯度中的应用

利用AFLP方法对在农业生产上大面积推广使用的5个甘蓝杂交组合及其10个亲本共15个材料进行了分析研究,得到了清晰的DNA扩增指纹图谱.在AFLP分析中,共采用了32个EcoRI+3/MseI+3引物组合,每个引物组合扩增出的条带数在43～62条之间,平均为54.5条.并从这32个引物组合中筛选出一个引物组合,能够用来对供试5个甘蓝杂交种进行真实性及品种纯度鉴定.从而证明了AFLP技术在甘蓝种子真实性及品种纯度鉴定中的可行性.该技术应用于甘蓝种子真实性及品种纯度鉴定在国内尚属首次,其稳定性重复性好,检测分辨率高,很适合甘蓝种子真实性及品种纯度鉴定.是今后种子真实性及品种纯度鉴定的发展方向,应加大其研究力度.     

10种冬青属植物遗传多样性RAPD和AFLPs分析

采用RAPD和AFLP技术,对10种冬青属植物基因组进行DNA片段扩增,以研究该属种间遗传多样性.结果表明:在RAPD分析中,通过对100种10个碱基随机引物的筛选,发现11种引物能得到多态性较高扩增产物,11种引物共扩增出301条多态性条带,多态率为98.63%.在AFLP分析中,3对选择性引物组合均扩增出了丰富的多态性片段.利用RAPD和AFLP技术分析,结果按UPGMA类平均法进行聚类,聚类结果显示冬青和代茶冬青,木姜冬青和浙江冬青以及光枝刺缘冬青与毛枝三花冬青之间的亲缘关系最近.     

利用AFLP技术鉴定凤凰单丛古茶树种质资源

本文采用AFLP技术对34个凤凰单丛古茶树资源进行了种质鉴定分析.结果显示,筛选出多态性较高的5对引物中,引物组合E41M42、E41M39和E41M33可鉴别出供试的全部资源,鉴别效率为100%;有23份资源具有特异带,占供试材料的67.6%.由此研究表明,AFLP技术可以通过特异带、特异的谱带类型、不同引物提供谱带的组合将风凰单丛古茶树资源区分开来,这对保护凤凰单丛古茶树资源的育种产权、登录新品种、鉴定和检测其种子与苗木的真实性和纯度具有重要的现实意义.     

21个枣品种（系）的AFLP指纹分析

采用AFLP技术,利用从30对引物中筛选出的10对多态性较好的引物,对21个枣品种(系)的基因组DNA进行了分析,共扩增出条带531条,其中多态性条带216条,多态性位点百分比为40.68%.采用UPGMA法,对AFLP扩增结果进行了聚类分析,将供试品种(系)分为6类,并得到了18个品种(系)的特征性AFLP标记,可为分子水平进行枣种质鉴定提供参考.     

用SSR和AFLP技术分析花生抗青枯病种质遗传多样性的比较

由Ralstonia solanacearum E.F.Smith引起的青枯病是若干亚洲和非洲国家花生生产的重要限制因子,利用抗病品种是防治这一病害最好的措施。虽然一大批抗青枯病花生种质资源材料已被鉴定出来,但对其遗传多样性没有足够的研究,限制了在育种中的有效利用。本研究以31份对青枯病具有不同抗性的栽培种花生种质为材料,通过简单序列重复(SSR)和扩增片段长度多态性(AFLP)技术分析了它们的遗传多样性。通过78对SSR引物和126对AFLP引物的鉴定,筛选出能显示抗青枯病种质多态性的SSR引物29对和AFLP引物32对。所选用的29对多态性SSR引物共扩增91条多态性带,平均每对引物扩增3.14条多态性带;32对多态性AFLP引物共扩增72条多态性带,平均扩增2.25条多态性带。在所筛选引物中,4对SSR引物(14H06,7G02,3A8,16C6)和1对AFLP引物(P1M62)检测花生多态性的效果优于其他引物。SSR分析获得的31个花生种质的遗传距离为0.12-0.94,平均为0.53,而AFLP分析获得的遗传距离为0.06～0.57,平均为0.25,基于SSR分析的遗传距离大于基于AFLP分析的遗传距离,疏枝亚种组的遗传分化相对大于密枝亚种组。基于两种分析方法所获得的聚类结果基本一致,但SSR数据聚类结果与栽培种花生的形态分类系统更为吻合。根据分析结果,对构建青枯病抗性遗传图谱群体的核心亲本和抗性育种策略提出了建议。     

甘蓝品种'争春'和'寒光2号'的DNA指纹图谱构建

用SDS法提取甘蓝（Brassfca oleraceavat．capitata）品种‘争春’、‘寒光2号’及其各自亲本的基因组DNA,通过SRAP、RAPD两种分子标记方法,构建其DNA指纹图谱,用于种子纯度鉴定。利用30对SRAP引物组合和200个RAPD随机引物,以各品种及其亲本的基因组DNA为模板组进行筛选,结果显示：多数SRAP引物组合对模板组的扩增带型一致,少数组合扩增出差异,但未能找到具有互补差异的引物组合;通过RAPD标记方法筛选出能鉴定2个品种纯度的引物分别为S42、S103、S193和S42、S89、S151,其中引物S42对2组材料均能扩增出特异的RAPD指纹图谱,并将RAPD指纹图谱转变为相应的数字指纹。     

26种冬青属植物遗传多样性分析

以26种冬青属植物种质资源为研究材料,利用RAPD和AFLP技术对基因组DNA进行扩增,以研究其物种间遗传多样性以及亲缘关系.结果表明:在RAPD分析中,从400条10个碱基的寡核苷酸引物中筛选出反应稳定、扩增性强、重复性好的引物20个,共扩增出312条多态性条带,多态率为95.41%;聚类分析显示26种冬青属植物间,布利奥特夫人枸骨叶冬青和黄果在AFLP分析中,10对选择性引物组合均扩增出了丰富的多态性片段,共扩增出350条谱带,其中336条具有多态性,占95.96%.综合RAPD和AFLP聚类结果,枸骨、无刺枸骨和日拉斯纳尔逊枸骨的亲缘关系较近,钝齿冬青、金宝石钝齿冬青和龟甲冬青三者的亲缘关系较近,可为冬青属植物的杂交育种与种质创新提供理论依据.     

AFLP技术在天麻遗传变异研究中的初步应用

为探讨AFLP技术在天麻遗传变异研究的应用,选取11对AFLP引物对11份不同来源天麻品种之间遗传关系进行AFLP分析的结果表明,11对引物共扩增出543条扩增带,每个引物组合在个体间扩增条带的数目有33~83条,平均为49.5。采用UPGMA法聚类分析得到的天麻各品种之间遗传距离为0.0792~0.6004。UPGMA聚类图显示,11份样品分为两大组群,其中的贵州天麻一群又分为2个组群。     

向日葵品种鉴定和纯度分析的AFLP研究

从杂交油葵A15及其亲本的1/2粒干种子中提取基因组DNA,选用17对引物组合进行AFLP分析,构建了它们的指纹图谱,17对引物在A系与R系当中共扩增出1125条扩增产物,其中144条带表现出多态性,平均每对引物扩增66条带。不同引物组合产生的DNA片段数目在50-70之间,大小分布于100bp-500bp,多态性比率为12.8%。从中筛选出的2对引物E-AAC/M-CTC和E-ACG/M-CTG可将亲本和子代区分开;引物对E-AAC/M-CTC在A系中扩增出440bp,190bp,160bp3条特征谱带,在R系中扩增出380bp,350bp,225bp,180bp4条特征谱带,E-ACG/M-CTG在A系中扩增出了2条特征带480bp和265bp,在R系中扩增出490bp,220bp,205bp,125bp4条特征谱带,且上述谱带均在子代中出现,用引物组合E-ACG/M-CTG对A15,双亲以及与A15外型十分相似的10个常用油葵杂交种进行AFLP分析,不仅表现出良好的多态性,并能够清楚地将它们加以区分,以其对50粒A15杂交种子进行纯度鉴定,得到与大田纯度检测一致的结果。说明使用AFLP标记检测油用向日葵的品种和纯度是可行的,对行种子纯度和品种鉴定的方法进行了讨论。     

向日葵品种鉴定和纯度分析的AFLP研究

从杂交油葵A15及其亲本的1/2粒干种子中提取基因组DNA,选用17对引物组合进 行AFLP分析,构建了它们的指纹图谱。17对引物在A系与R系当中共扩增出1125条扩增产物,其中144条带表现出多态性,平均每对引物扩增66条带,不同引物组合产生的DNA片段数目在50～70之间,大小分布于100bp～500bp,多态性比率为12.8%。从中筛选出的2对引物E_AAC/M_CTC和E_ACG/M_CTG可将亲本和子代区分开：引物对E_AAC/M_CTC在A系中扩增出440bp、190bp、160bp 3条特征谱带,在R系中扩增出380bp、350bp、225bp、180bp 4条特征谱带,E_ACG/M_CTG在A系中扩增出了2条特征带480bp和265bp,在R系中扩增出490bp、220bp、205bp、125bp 4条特征谱带,且上述谱带均在子代中出现。用引物组合E_ACG/M_CTG对A15、双亲以及与A15外型十分相似的10个常用油葵杂交种进行AFLP分析,不仅表现出良好的多态性,并能够清楚地将它们加以区分。以其对50粒A15杂交种子进行纯度鉴定,得到与大田纯度检测一致的结果,说明使用AFLP标记检测油用向日葵的品种和纯度是可行的。对现行种子纯度和品种鉴定的方法进行了讨论。     

鼠尾草属部分物种AFLP指纹图谱构建及遗传多样性分析

为了建立适用于鼠尾草属植物的AFLP技术体系,并对鼠尾草属部分物种遗传多样性进行分析。作者经筛选得到24对有效AFLP引物组合,共检测1616个有效扩增位点;其中22对AFLP引物组合针对不同材料可检测到特异性扩增位点,每对引物检测强度从1到16个位点不等;依据AFLP数据计算的22个鼠尾草属植物材料间231个配对遗传相似系数介于0.5677～0.9898,显示了丰富的遗传多样性;系统树显示AFLP分析可以将11个鼠尾草属植物准确区分,其中种内不同居群的材料可有效聚为亚组,说明本文所构建的AFLP技术体系能够有效应用于鼠尾草属植物种间及种内鉴定、遗传多样性分析及系统发育研究中。     

金沙江干热河谷地区构树的AFLP分析

根据构树树皮颜色和斑纹色泽,将金沙江河谷两岸自然分布的构树分为4个不同类型,即红构、红花构、白花构和青构.应用AFLP分子标记技术,采用E 3/M 3引物组合,对该4个类型构树进行了分析鉴定.结果显示,9对引物组合共扩增出584条带,其中237条为多态带,多态带百分率为40.6%;9对引物组合扩增得到了4类构树各自特有的AFLP指纹图谱,并可明确区分4个类型构树;UPGMA聚类分析结果与供试材料的形态鉴别完全一致.结果表明,4个类型构树的表型差异是由遗传物质的变异而引起,从而为构树新品种的划分、鉴定和登录奠定了基础.     

鉴定烟草种质资源SSR核心引物筛选和验证

核心引物对遗传多样性分析、种质资源鉴定、品种纯度和真实性检测、指纹图谱构建等研究具有重要价值。本研究利用均匀分布于烟草24条染色体的278对SSR引物,对20份亲缘关系相对较远的烟草材料进行初步筛选,筛选出32对引物。随后再加上10份亲缘关系较近的材料（共30份）对引物进行复筛,最终确定14对为核心引物。将14对引物对39份烟草材料进行进行系谱分析、品种遗传多样性分析和农艺性状分析聚类,结果表明该套SSR核心引物适用于烟草种质资源鉴定和遗传多样性分析。     

SRAP技术研究烟粉虱遗传多样性

采用AFLP、SRAP2种标记方法分别对2个烟粉虱Bemisia tabaci Gennadius种群(一品红、甘蓝)的多态性进行分析。结果表明,(1)2种方法平均每对引物组合产生的条带数分别为29.4和21.8。(2)AFLP法每对引物组合产生10～23条多态性带,平均17.20条,多态性带的比例平均为57.93%。SRAP法每对引物组合产生5～18条多态性带,平均13.3条,多态性带的比例平均为60.59%。(3)前者的基因多样性范围为0.1503～0.2838,平均为0.2297;后者的基因多样性范围为0.0977～0.2911,平均为0.2332。证明利用SRAP技术和AFLP技术研究烟粉虱的遗传多样性是有效的。     

洋桔梗品种遗传多样性的AFLP分析

该研究以洋桔梗(Eustoma grandiflorum)2个品种‘玛丽艾基粉色’和‘圣剑白底紫边’为试材,提取叶片DNA,经过EcoRⅠ/MseⅠ双酶切、连接、预扩增、选择性扩增,建立了洋桔梗的AFLP最佳反应体系;并以64个常用引物组合进行扩增,得到154个多态性条带,从中筛选出扩增条带较多且多态性较好的4个引物组合(E-ACA/M-CTC,E-ACC/M-CAC,E-AGC/M-CTT,E-ACT/M-CAG),其多态位点百分率均值为24.36%。利用上述4个引物组合,以最佳反应体系为基础,构建了7个常见洋桔梗品种的AFLP指纹图谱,统计7个品种各4个引物组合在1 000~300bp区间7个区段的扩增条带,并将各个品种的AFLP指纹图谱转换成各品种4组7位数构成的28位特异数字指纹,极大地方便了种质比较及鉴定;7个品种间的遗传相似系数介于0.683 5~0.860 8之间,平均值为0.774 6。研究结果为进一步进行洋桔梗的种质研究及利用奠定了基础。     

东北梅花鹿居群内亲缘关系的AFLP指纹分析

用扩增片段的长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)标记分析研究了东北梅花鹿同一居群内27个个体的亲缘关系,并以此作为优良种鹿选育种的辅助手段。筛选出9对AFLP引物组合,用EcoRⅠ/MseⅠ双酶切,对27只东北梅花鹿基因组DNA进行AFLP检测,共获得15 169条扩增带,检测出多态性条带11 443,多态性比率78.43%,平均每对引物检测到1 271个多态性位点。群体内相似系数AFLP研究结果,平均为0.7841(0.6809-0.8648),27只鹿聚为Ⅰ和Ⅱ两大类群,Ⅱ大类群分为5组,说明该鹿群个体间有较丰富的遗传变异,且与人工定向选配种有关。Ⅱ-4组群体内相似系数最高,在0.82以上,个体之间遗传距离最小在0.1354-0.1563之间,与繁殖记录的亲缘关系基本一致。该研究表明AFLP指纹技术用于梅花鹿遗传多态性分析,品种鉴定及亲缘关系分析是可行的。     

野生扁蓿豆种质资源AFLP遗传多样性的分析

本研究采用AFLP标记对河北省、辽宁省、吉林省、山西省、内蒙古自治区和西藏自治区的10份野生扁蓿豆居群进行遗传多样性分析。从64对AFLP引物组合中,筛选出8对扩增条带清晰、多态性高的引物组合,8对引物共扩增出640个条带,其中多态性条带有472个,多态性位点百分率为73.8%;Nei's基因多样性指数平均为0.157,Shannon's多态性信息指数平均为0.099;居群间遗传相似系数(GS)平均值为0.827。聚类和主成分分析可将10个扁蓿豆居群聚为3大类,结果与居群的地理分布大致相符,呈一定的地域性分布规律。由此可见,AFLP分子标记研究结果能较好地揭示扁蓿豆居群间的遗传多样性。对我国各地的野生扁蓿豆资源的广泛收集、评价和基因资源的保护有重要的意义。     

AFLP 引物组合数量对准确研究竹子系统关系的影响

利用AFLP技术对26个竹子种类进行了多样性分析, 以探索引物组合数量对准确研究竹子类群系统关系的影响。实验共随机选取10对AFLP引物, 并对所得10组AFLP标记数据随机组合后进行Nei氏遗传距离/UPGMA聚类分析。每对AFLP引物 扩增数据为一组, 随着用于聚类统计的AFLP标记数据随机组合数量的增加, 26个竹子种类的聚类关系趋向一致。这提示我们,在系统学研究中, 足够数量的引物组合是获得供试材料间准确聚类关系的基础, 应采用对各AFLP引物组合数据随机累加后进行聚类分析的方法, 以聚类关系为标准来确定用于分析供试品种的最少引物组合数量。     

AFLP引物组合数量对准确研究竹子系统关系的影响

利用AFLP技术对26个竹子种类进行了多样性分析,以探索引物组合数量对准确研究竹子类群系统关系的影响。实验共随机选取10对AFLP引物,并对所得10组AFLP标记数据随机组合后进行Nei氏遗传距离/UPGMA聚类分析。每对AFLP引物扩增数据为一组,随着用于聚类统计的AFLP标记数据随机组合数量的增加,26个竹子种类的聚类关系趋向一致。这提示我们,在系统学研究中,足够数量的引物组合是获得供试材料间准确聚类关系的基础,应采用对各AFLP引物组合数据随机累加后进行聚类分析的方法,以聚类关系为标准来确定用于分析供试品种的最少引物组合数量。     

甘蓝SSR标记在近缘种青花菜的通用性及其应用

本研究对50条甘蓝SSR引物在其近缘种青花菜中的通用性进行了分析,结果表明,38对引物在青花菜上可有效扩增,扩增产物分子量在100～1500bp,有效扩增比率为76%,其中18%具有较好的多态性,揭示了两种作物基因组间存在一定的相似性。同时利用获得的多态性较好的9对引物对青花菜进行基因型鉴定和遗传多样性分析,20份青花菜基因型中共检测到51个基因位点,平均每个引物组合可扩增出5.67个条带,多态性为66.7%。多引物组合可鉴别出所有青花菜基因型。聚类分析结果表明同一来源的基因型间具有相近的遗传基础,且聚类与熟性具有一定的相关性。本研究为今后青花菜种质资源的收集、利用及分子标记辅助育种提供了新的SSR标记和参考。