蓝藻病毒（噬藻体）的研究进展

蓝藻（Ｂｕｌｅｇｒｅｅｎａｌｇａｅ）是一类原核生物,具有细菌的一些特征,因此又常称为蓝细菌（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）,相应地,把感染蓝细菌的病毒称为噬藻体（Ｃｙａｎｏｐｈａｇｅ）［１～２］,这是由于噬藻体与噬菌体非常相似的缘故。除蓝藻外,所有...     

蓝藻病毒(噬藻体)的研究进展

蓝藻(Bule-green algae)是一类原核生物,具有细菌的一些特征,因此又常称为蓝细菌(Cyanobacterium),相应地,把感染蓝细菌的病毒称为噬藻体(Cyanophage)[1～2],这是由于噬藻体与噬菌体非常相似的缘故.除蓝藻外,所有其它的藻类均是真核生物,通常将感染真核藻类的病毒称作"藻病毒"(Phycovirus)[3],它们的绝大多数是多角体的粒子(Polyhedral particles),只有个别如珊瑚轮藻(Chara corallina)病毒是杆状的[4].真核藻类病毒和病毒类粒子(VLPs)前文有过综述[4],蓝藻病毒或噬藻体则完全不同于真核藻类的病毒,二者是藻类病毒的重要组成部分,蓝藻病毒的研究情况有必要专门介绍.     

感染丝状蓝藻的噬藻体的裂解周期和释放量的测定

近年来,随着浮游病毒的认识的深入,人们认识到浮游病毒对水体中初级生产力的影响是巨大的[1],其主要证据就是发现噬藻体在海洋蓝藻的种群控制上发挥着重要作用[2]. 噬藻体的释放量和裂解周期是衡量噬藻体感染力的重要指标,很多重要的生态指标如病毒在生态系统中对宿主的致死率、病毒种群得以维持的阈浓度等都需要使用病毒的释放量和裂解周期来加以推算[3,4], 因此准确地测定这两个基本参数是十分重要的.在自然界,很多丝状蓝藻,如颤藻、鱼腥藻、螺旋藻、席藻等是能够形成水华的,其中有些还具有产毒的功能[5].丝状蓝藻的形态特征有别于单细胞蓝藻, 在被噬藻体感染时,丝状蓝藻的感染周期和光合生理也与单细胞蓝藻有较大的差异[6],因此研究裂解丝状蓝藻的噬藻体的方法可能不同于感染单细胞的噬藻体.本次试验以一种感染丝状宿主的噬藻体为材料,探讨了确定其裂解周期和释放量的研究方法.     

感染丝状蓝藻的噬藻体的裂解周期和释放量的测定

近年来 ,随着浮游病毒的认识的深入 ,人们认识到浮游病毒对水体中初级生产力的影响是巨大的[1] ,其主要证据就是发现噬藻体在海洋蓝藻的种群控制上发挥着重要作用[2 ] 。噬藻体的释放量和裂解周期是衡量噬藻体感染力的重要指标 ,很多重要的生态指标如病毒在生态系统中对宿主的致死率、病毒种群得以维持的阈浓度等都需要使用病毒的释放量和裂解周期来加以推算[3,4 ] ,因此准确地测定这两个基本参数是十分重要的。在自然界 ,很多丝状蓝藻 ,如颤藻、鱼腥藻、螺旋藻、席藻等是能够形成水华的 ,其中有些还具有产毒的功能[5] 。丝状蓝藻的形态特征…     

噬藻体PP对野生宿主——丝状蓝藻的吸附率、裂解周期及释放量的影响

研究在日光光照条件下,以自然水体中存在的丝状蓝藻作为噬藻体PP的野生宿主,用离心法测定了噬藻体PP对野生宿主藻的吸附率,用一步生长曲线法获得了噬藻体PP对野生宿主藻的裂解周期及释放量。结果表明:噬藻体PP对野生宿主藻在60min时能够达到的吸附率为1.79‰,吸附系数为8.09%,噬藻体PP感染野生宿主藻的潜伏期介于45～75min之间,平均释放量为34.32PFU·Cell-1。上述结果一方面说明,噬藻体PP感染野生宿主藻的吸附系数、潜伏期及释放量均远小于以实验室培养的鲍氏织线藻作为宿主所得到的数据;另一方面也说明,噬藻体PP具有较强的吸附和裂解野生宿主的能力,这将有助于解释噬藻体PP在淡水富营养化水体中具有广泛分布的现象。     

噬藻体PaV-LD主要衣壳蛋白、穿孔素和内肽酶基因的克隆及表达分析

最近阐明了水华蓝藻噬藻体PaV-LD (Planktothrix agardhii Virus isolated from Lake Donghu)的全基因组序列, 这是一个含有142个ORF的双链DNA噬藻体。在此, 我们对其主要衣壳蛋白基因073R, 内肽酶和穿孔素基因123L-124L(PaV-LD基因组中两个相邻的ORF)进行了基因克隆与表达分析。将073R克隆后构建原核表达质粒pET-32a-073R, 并用IPTG进行诱导表达, 073R融合蛋白经纯化后, 进行免疫小鼠制备抗体; 通过Western blot检测经噬藻体感染宿主细胞后073R的表达时序, 结果显示在宿主细胞裂解之初, 即PaV-LD感染48h以后073R开始表达, 表明073R是一个晚期基因; 同时073R推导的氨基酸序列与34株噬藻(菌)体及2株藻病毒(感染真核藻的病毒)的主要衣壳蛋白的氨基酸序列进行序列比对, 显示073R与无尾的藻病毒衣壳蛋白亲缘关系更近。PCR扩增内肽酶和穿孔素基因123L-124L, 并构建质粒pOP123L-124L, 将其转入模式藻集胞藻PCC6803细胞中, 质粒pOP123L-124L与藻集胞藻PCC6803基因组发生重组, 形成重组藻; 测定了重组藻与野生藻的生长速率, 并绘制生长曲线; 制备超薄切片, 进一步比较和观察重组藻与野生藻的超微结构的变化。结果显示重组藻与野生藻存在生长速率与超微形态的显著差异。       

一种浓缩噬藻体的反冲超滤技术

噬藻体(Cyanophage)是一类感染蓝藻的病毒,形态上同于噬菌体,近期的研究表明,噬藻体作为水体环境中活跃的动态因子,在控制水体初级生产力和有害藻类水华(Harmful Algal Bloom,HAB)方面可能发挥着重要的作用,甚至影响水体生态系统中食物链的结构,因此研究水体中噬藻体的生理生态学特性对于了解其生态功能是非常重要的,但是由于自然水体中的噬藻体浓度往往较低,难以直接对其进行定性或定量研究,所以对天     

丝状体蓝藻藻殖段的分化及其调节机制

本文介绍了丝状体蓝藻（亦称蓝细菌）的藻殖段的分化及其调节机制。藻殖段与正常藻丝体的区别在于细胞开状、细胞内存有气囊和可移动的短而真的藻丝链等。本文对许多环境因子包括光和营养因素等促进或抑制藻殖段的分化进行一讨论;还介绍了含球藻（Ｎｏｓｔｏｃ）,单歧藻（Ｔｏｌｙｐｏｔｈｒｉｘ）和眉藻（Ｃａｌｏｔｈｒｉｘ）所具有复杂的细胞发育过程,即具气囊又可移动的藻殖段分化,异形胞分化以及营养细胞的被偿性色适应。这     

模拟生态系统中噬藻体裂解蓝藻宿主的生态学效应

实验采用模拟生态系统,研究了噬藻体裂解蓝藻宿主后营养物质循环变化的过程,以及细菌和漂浮植物对这个过程的影响。结果表明噬藻体裂解宿主所释放的营养元素在细菌的作用下迅速进入新的循环并形成新的水华,而加入浮萍则可以有效吸收水体营养,防止新的水华发生。因此推测单纯地利用包括噬藻体在内的微生物裂解藻类的方法,并非治理水华的有效方法,但如果能够结合漂浮植物等其它治理手段,则有可能同时实现水华的控制和水质的改善。     

噬藻体和蓝藻间的基因转移及协同进化作用

生物物种之间的水平基因转移广泛存在于细菌、古生菌和真核生物中,并能造成同一生境中种群的快速协同进化。噬藻体是感染蓝藻的专一性病毒,近年研究表明其在蓝藻水华生消中发挥了重要作用,使人们认识到了噬藻体的重要生态地位。综述了物种间的水平基因转移,介绍了噬藻体遗传多样性研究中常用的光合作用基因、结构蛋白基因等靶标基因所介导的基因转移以及基因转移引起的病毒和宿主的协同进化,并介绍了研究基因转移所用到的试验技术以及今后所要面临的问题。     

辛德毕斯病毒非结构蛋白nsP2在细胞内的分布

应用免疫电镜技术,直观地显示出辛德毕斯病毒的nsP2蛋白存在于细胞核中以及它在核内的分布.将含有nsP2蛋白的一段SbV的cDNA转染细胞,结果表明,单独表达的nsP2仍可进入细胞核中.     

我国现有的金鱼品种的分类及其系统发育的探讨1)

一、引言 金鱼是我国广大人民乐于饲养的一种家养观赏鱼类。它是由野生红黄色鲫鱼演变而来的。明朝李时珍在《本草纲目》中记载:金鱼“述异记载晋桓冲游庐山,见湖中有赤鳞鱼,即此也。”他还写道:“自宋始有畜者,今则处处家养玩矣。”因此可以认为金鱼起源于我国晋朝(公元265—420年间)。至今已有一千多年的历史了。 李璞(1959)报道了我国的金鱼品种已有二十余个。徐金声等(1980)报道有143个之多。耶么迄今为止我国的金鱼品种究竟有多少呢?为了弄清我国的金鱼品种资源,作者曾在北京等十七个省市的各大公园和花木公司所属鱼场作了调查。在调查过程中,我们     

基因型和培养条件对大麦花药培养的影响

不同基因型大麦(Hordeum vulgare)的花粉愈伤组织诱导率不同。带大麦黄花叶病抗性基因的品种、品系或F_1杂种的诱导率(8.83—14.21％)高于不带抗性基因的材料(1.04～6.25％)。MS基本培养基舔加2,4-D,1 mg/l,Kt0.1 mg/l,BA0.2 mg/l,生物素0.1 mg,其诱导率(平均11.0995)高于MS添加2,4-D3 mg/l和Kt0.1 mg/l的诱导率(6.33％)及MS添加2,4-D 1 mg/l和Kt0.1 mg/l的诱导率(8.21％)。接种后先15℃暗培养5天,再转入25℃暗培养,其产生愈伤组织的高峰期推迟2—4天,但诱导率却从对照的5.84％提高到11.59％;25℃暗培养与25℃光-暗交替培养,诱导率无显著差异。     

在不稳定和相对稳定培养体系中CFU-S生长的动力学观察

利用 Dexter 培养方法,我们在体外对小鼠胎肝进行了长期液体培养。根据换液后悬液细胞总数的不同,建立了不稳定和相对稳定两个培养体系,并利用12d 脾结节检测和单个脾结节转移技术,观察了体系中悬液细胞总数,CFU-S 数及其自我更新的动态变化。表明在不稳定培养体系中,悬液细胞总数和 CFU-S 数增长较快,但由于每周换液时悬液细胞的丢失,可能使体系长时间处于应激状态,其自我更新力衰减也较快。而在相对稳定体系中,由于换液时其悬液细胞的再次种入,使总数保持相对恒定,CFU-S 数的变化比较平缓,其自我更新力的衰减也相对缓慢。提示在造血细胞体外液体培养体系中存在着一种生理性反馈调节活动,但其机理有待进一步研究。     

丙型肝炎病毒核壳蛋白抗原的化学合成及其在血清学诊断中的应用

选取丙型肝炎病毒(HCV)核壳蛋白区两个可能含有优势抗原表位的19和16氨基酸的肽殴(C-19肽和C-16肽),利用固相多肽合成技术进行了化学合成。经用反相高压液相层析(HPLC)及脉冲液相多肽测序技术检定合成肽产品的纯度及序列后,以C-19和C-16肽作为包被抗原组装成检测HCV血清抗体的ELISA诊断试剂。用所组装的合成肽试剂检测中国药品生物制品检定所提供的HCV标准参比血清,并比较利用该试剂和美国Abbott实验室生产的HCV第二代EIA诊断试剂平行检测109份献血员血清的结果,表明C-19肽能够特异、重复、灵敏地检出HCV血清抗体,可以作为我国第一代HCV诊断试剂的合成肽抗原。     

鼻咽癌组织中Epstein－Barr病毒潜伏感染膜蛋白基因片段的克隆及分析

从两例鼻咽癌（ＮＰＣ）病人的活检组织切片中,用ＰＣＲ方法扩增出ＥＢ病毒潜伏感染膜蛋白（ＬＭＰ）基因的ＥｘｏｎⅠ、ＩｎｔｒｏｎⅠ、ＥｘｏｎⅡ和ＩｎｔｒｏｎⅡ共５００ｂｐ的片段,克隆入载体ｐＧＥＭ－３ｚｆ（＋）′,测定核苷酸序列,其中有一个样品所测序列段与台湾株相似,另一个样品则与Ｅ９５－８极为相似。由此可知,中国大陆南方的ＮＰＣ组织中ＥＢＶ－ＬＭＰ基因存在不同的变异。     

MORPHOLOGICAL AND PHYSIOLOGICAL EFFECTS IN PROBOSCIA ALATA (BACILLARIOPHYCEAE) GROWN UNDER DIFFERENT LIGHT AND CO2 CONDITIONS OF THE MODERN SOUTHERN OCEAN1

The combined effects of different light and aqueous CO₂ conditions were assessed for the Southern Ocean diatom Proboscia alata (Brightwell) Sundström in laboratory experiments. Selected culture conditions (light and CO_2(aq)) were representative for the natural ranges in the modern Southern Ocean. Light conditions were 40 (low) and 240 (high) μmol photons · m^?2 · s^?1. The three CO_2(aq) conditions ranged from 8 to 34 μmol · kg^?1 CO_2(aq) (equivalent to a pCO₂ from 137 to 598 μatm, respectively). Clear morphological changes were induced by these different CO_2(aq) conditions. Cells in low [CO_2(aq)] formed spirals, while many cells in high [CO_2(aq)] disintegrated. Cell size and volume were significantly affected by the different CO_2(aq) concentrations. Increasing CO_2(aq) concentrations led to an increase in particulate organic carbon concentrations per cell in the high light cultures, with exactly the opposite happening in the low light cultures. However, other parameters measured were not influenced by the range of CO_2(aq) treatments. This included growth rates, chlorophyll a concentration and photosynthetic yield (F_V/F_M). Different light treatments had a large effect on nutrient uptake. High light conditions caused an increased nutrient uptake rate compared to cells grown in low light conditions. Light and CO₂ conditions co‐determined in various ways the response of P. alata to changing environmental conditions. Overall P. alata appeared to be well adapted to the natural variability in light availability and CO_2(aq) concentration of the modern Southern Ocean. Nevertheless, our results showed that P. alata is susceptible to future changes in inorganic carbon concentrations in the Southern Ocean.     

CULTURE CONDITIONS INFLUENCE CELLULAR RNA CONTENT IN ICHTHYOTOXIC FLAGELLATES OF THE GENUS PSEUDOCHATTONELLA (DICTYOCHOPHYCEAE)1

Cell counts are the standard measure to quantify harmful algae and the basis for decisions on measures necessary to protect human health. Molecular detection methods have been developed for a range of algal species and genera, but these methods generally quantify DNA or RNA, and corresponding cell numbers are inferred based on the assumption that the cellular nucleic acid content is constant over time and in different conditions. Here, we tested this assumption for ichthyotoxic flagellates of the genus Pseudochattonella (Dictyochophyceae) under different light, temperature, salinity, and nutrient conditions. Our results show changes in cellular RNA contents of nearly one order of magnitude depending on the condition and also the time of exposure, rendering it difficult to anticipate per‐cell RNA yields even if environmental conditions are known. However, cellular RNA content was positively correlated with cell size and growth rate across our experiments, and total RNA was comparable to cell number as a predictor for total biovolume. These results demonstrate the importance of considering the variability of RNA levels for comparisons with cell counts and provide a valuable aid for the interpretation of data from RNA‐based detection methods.     

THE EFFECT OF Mn(II) ON THE AUTOINDUCING GROWTH INHIBITION FACTOR IN Deinococcus radiodurans

Decreases in cell division at the stationary phase in bacterial cultures are often due to the depletion of nutrients and/or accumulation of toxic waste products. Yet, during the stationary phase, the highly radiation-resistant bacterium Deinococcus radiodurans undergoes new rounds of cell division when Mn(II) is added to the medium in a phenomenon known as manganese-induced cell division (MnCD). When cells were cultured in medium without Mn(II)-enrichment, a heat-resistant, proteinase K-resistant factor (or factors) with a molecular mass less than 10 kD accumulated in the spent medium. Inclusion of the concentrated spent medium in fresh medium could inhibit the growth of D. radiodurans significantly, and the degree of inhibition was dose dependent. However, the relative stimulatory effect of MnCD was also dose dependent—the higher the inhibition, the stronger was the MnCD response. Previous studies have shown that nutrients were not limiting and deinococcal cells would continue metabolizing its nutrients at stationary phase. Cells became more sensitive to radiation when nutrients in the medium eventually became depleted. We speculated that D. radiodurans might produce this factor in the medium to control its population density. The reduction in cell population would conserve the nutrients that in turn might enhance the survival of the species.