IRSp53和MIM同源结构域IMD相互作用蛋白质的鉴定

IRSp53(胰岛素受体酪氨酸激酶底物)和MIM(肿瘤转移消失蛋白)的同源结构域(IMD结构域)在IR-Sp53/MIM家族调控肌动蛋白动态变化的过程中起重要作用.IMD结构域具有使肌动蛋白纤维成束的活性,与小分子GTPase家族Racl也存在相互作用.然而,IMD结构域是否存在其它相互作用蛋白并不清楚.本研究利用GST pull down技术结合质谱分析从大鼠小脑中筛选IMD结构域的相互作用蛋白,得到了几个候选蛋白.其中,神经发育中下调蛋白NEDD9与IRSp53及MIM在小脑中存在类似的分布,体外实验进一步证明了两者之间的相互作用,暗示NEDD9是一种新的IMD结构域相互作用蛋白质.     

P53肿瘤抑制基因的研究与进展

Ｐ５３肿瘤抑制基因的研究与进展徐清,汤雪明（上海第二医科大学细胞生物学实验室２０００２５）Ｐ５３基因是目前癌基因和抑癌基因研究中最引人注目的新星。１９８１年Ｗｅｉｎｂｅｒｙ等人首先报道人癌基因分离成功,癌基因的研究成为肿瘤研究的热点“’１１９８６年人...     

p53肿瘤抑制基因

正常细胞的增殖常取决于促进生长的原癌基因和抑制生长的肿瘤抑制基因的平衡调节。原癌基因的激活或者肿瘤抑制基因的失活都能导致细胞生长的失控。事实上,许多肿瘤的发生需要基因组中这两类基因的同时突变。虽然人们对肿瘤抑制基因的认识较细胞癌基因晚了近10年,但当今它已成为了解肿瘤起源分子     

P53基因研究新进展

肿瘤抑制基因在肿瘤发生过程中有重要作用,其中P53基因最引现人注目,P53基因的突变与人类一半以上的肿瘤发生相关,P53基因参与细胞生长的负调控,研究发生P53基因编码的P53蛋白可通过调控Cipl基因表达而调控细胞生长,即P53蛋白可刺激Cipl基因产生分子量为21kD的蛋白,这种蛋白能够有效抑制某些促使细胞通过细胞周期进入有丝分裂的酶活性,从而抑制细胞生长,这就解释了为什么正常的P53基因的缺失可导致细胞的无限生长,此外,P53基因与DNA损伤药物诱导的细胞凋亡有关,与非DNA损伤药物诱导的细胞调亡无关。     

CRISPR-dCas9调控基因转录的研究进展

CRISPR/Cas9系统已不仅仅是一种革命性的基因编辑工具,还能在各种原核和真核生物中调控基因转录。近年来,由CRISPR/Cas9衍生而来的CRISPR-dCas9系统已被用于基因成像、高通量筛选、基因调控、必需基因功能研究及表观遗传调控等多个方向。总结了近年来CRISPRdCas9系统在激活或抑制基因转录、降低脱靶效率、sgRNA与转录强度及特异性之间的联系等方面的研究进展,以期对CRISPR-dCas9系统定向调控基因转录的研究提供参考和帮助,并就其未来可能的改进进行了展望。     

P53基因的生化功能和失活机理

本综述了肿瘤抑制基因Ｐ５３研究的最新进展。Ｐ５３基因产物具有反式激活作用,能与特异ＤＮＡ顺序结合,可能参与负调控细胞生长。Ｐ５３的失活作用有多种途径,是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的基础。     

拟南芥SDIR1基因转录的选择性剪接

采用PCR及RT-PCR法分别克隆了拟南芥SDIR1基因的DNA和cDNA序列。根据序列比对分析结果,发现了3种不同的转录本,提示SDIR1基因的转录中存在选择性剪接。3种转录本的长度分别为822bp、691bp和666bp,依次命名为：SDIR1-822、SDIR1-691、SDIR1-666。与SDIR1基因的DNA序列及已报道的SDIR1cDNA序列比较,除转录本SDIR1-822包含了完整的编码序列外,其余2种转录本的编码序列都存在不同长度的缺失。其中,SDIR1-691缺失了131bp的片段：第2外显子3′端缺失33bp,第3外显子53bp全部缺失,第4外显子5′端缺失45bp;转录本SDIR1-666缺失了156bp的片段：第3外显子3′端缺失18bp,第4外显子5′端缺失138bp。进而随机挑取101个克隆子对三种转录本的表达比例进行初步分析,结果表明3种分子的比值为SDIR1-822：SDIR1-691：SDIR1-666=26.00：1.33：1.00,反映出SDIR1基因不同转录本在拟南芥中的相对表达量。     

新的肿瘤抑制基因-ARLTS1

小分子GTP蛋白涉及肿瘤发生中多条信号通路的改变。类核糖基化因子肿瘤抑制基因1（ADP-ribosylation factor-like tumor suppressorgene1,ARLTS1）,是小分子GTP蛋白Ras超家族中ARF家族的成员之一。该基因是低显性基因,可因启动子超甲基化而失调。有两种ARLTSl的多态性与肿瘤的家族风险相关。ARLTS1表达下调与部分肿瘤发生有重要关系,而恢复其表达则会诱导caspase依赖的细胞凋亡发生,并减少肿瘤的体内生长。通过基因微阵列实验发现,转导ARLTS1基因诱导细胞凋亡过程中众多涉及细胞存活、增殖和发育的信号通路。     

p53负调控前列腺癌细胞中PC-1基因的表达

在前列腺癌进展中发生的PC-1基因表达失调和p53基因突变,提示这两个事件之间可能存在的联系.用依托泊苷处理前列腺癌LNCaP细胞后,PC-1蛋白的表达受抑制;瞬时转染分析表明野生型p53负调控PC-1启动子的转录活性;缺失突变分析将PC-1基因启动子上受p53负调控的区域定位在翻译起始位点上游757 bp～323 bp之间.缺失PC-1启动子上的雄激素受体反应元件并没有消除p53对其转录活性的抑制作用;无论p53是否存在,组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理LNCaP细胞后可以导致PC-1启动子转录活性升高.因此,p53和去乙酰化酶可以独立抑制PC-1启动子活性.这些研究结果表明,野生型p53负调控PC-1基因启动子的转录活性,而前列腺癌进展过程中p53突变可能和PC-1基因的表达失调有关.     

促凋亡基因p53AIP1的研究进展

p53AIPl基因是近年发现的促凋亡基因,在p53依赖性的凋亡通路中起重要作用。p53AIPl介导线粒体凋亡途径,其表达依赖于p53蛋白的Ser^46的磷酸化。p53AIPl可直接促进凋亡,其促凋亡作用可能强于p53本身,并对p53抗性的肿瘤细胞也有作用。因此,对p53AIPl的深入研究可能会为对p53基因治疗有抗性的肿瘤患者带来新的希望。     

hMLH1、P27、P53的表达及其在宫颈癌发病中的意义

目的 了解宫颈癌中hMLH1、P27、P53表达情况及其与宫颈癌发生和发展的关系.方法 采用免疫组织化学技术SP法检测临床资料较完整的72例子宫颈鳞癌和31例慢性宫颈炎组织hMLH1、P27、P53蛋白表达.结果 （1）hMLH1在宫颈炎及宫颈癌组的表达率分别为61.3%和58.3%,差异无显著性（P＞0.05）;hM-LH1在宫颈癌各期中表达率分别为Ⅰ期60.0%,Ⅱ期52.6%,Ⅲ期33.3%,差异无显著性（P＞0.05）;hMLH1表达率与宫颈癌分级无关（P＞0.05）;（2）P27在宫颈炎及宫颈癌组的表达率分别为74.2%%和76.4%,差异无显著性（P＞0.05）;P27的表达率与宫颈癌分级和分期无关（P＞0.05）;（3）P53在宫颈炎及宫颈癌组的表达率分别为32.3%和65.3%,差异有显著性（P＜0.05）;P53在宫颈癌各级中的表达率分别为Ⅰ级36.4%,Ⅱ级73.0%,Ⅲ级67.9%,Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级的表达率差异有显著性（P＜0.05）;P53表达率与宫颈癌分期无关（P＜0.05）;（4）hMLH1表达阳性与阴性的宫颈癌中P27的表达率为94.6%和60.0%,差异有显著性（P＜0.05）;P53的表达率为62.8%和62.1%,差异无显著性（P＞0.05）.结论 P53基因突变与宫颈癌的发生和组织分化程度有关;hMLH1与P27表达缺失和宫颈癌发生的关系尚不确切.hMLH1可能使宫颈癌中P27表达上调,而对p53基因突变累积无明显抑制作用.     

骨肉瘤中P53及P21WAF1表达的生物学意义

应用免疫组化SP法观察34例骨肉瘤中P53及P21WAF1的表达情况,探讨P53及P21WAF1表达与骨肉瘸临床病理学特征之间的关系,分析P53和P21WAF1在骨肉瘤中的作用及其相关性。结果可见,在34例骨肉瘤中,18例表达P53,阳性表达率52.94%;12例表达P21WAF1,阳性表达率35.29%。P53阳性表达与性别、肿瘤分化及是否转移复发有关(P<0.05),P21WAF1与肿瘤分化有关(P<0.01)。P53在中、低分化骨肉瘤中阳性表达率较高,而在高分化骨肉瘤中阳性表达率较低(70%、28.57%);P21WAF1在高分化骨肉瘤中阳性表达率较高,而在中、低分化骨肉瘤阳性表达率较低(85.71%、0%)。P53及P21WAF1表达呈负相关性(r=-0.537,P=0.001)。在骨肉瘤组织中P53表达上调及P21WAF1表达下调与骨肉瘤的恶性进展有关。     

胃癌中P16、nm23-h1、P53表达及其与患者预后的关系

目的:探讨胃癌组织中P16,nm23-h1和P53表达情况及其与患者预后的关系。方法:应用免疫组化SABC法检测91例手术切除胃癌组织中P16,nm 23-h1和P53表达。结果:胃癌中P16,nm23-h1和P53表达阳性率分别33．0%(30/91),38．5%(35/91), 53．8%(49/91)。p16,nm23-h 1和P53在胃癌中表达与淋巴结有无转移,不同的浸润深度,TNM分期,不同组织学类型均有显著差异(P＜0．05)。而它们与肿瘤患者年龄,性别差异无统计学意义(P＞0．05)。等级相关分析结果显示P16与P53表达呈负相关(P＜0．05),P16与nm23-h1表达呈正相关(P＜0．05),P53与nm23-h1表达呈负相关(P＜0．05)。生存曲线研究结果显示P16,nm23-h1和P53表达与患者术后生存时间显著相关(P＜0．05)。结论:P16和nm23-h1在胃癌组织中低表达及P53高表达能客观反映胃癌组织分化程度,侵袭转移能力,且其与患者预后密切相关。故检测三种指标可作为正确判断胃癌患者预后,在指导临床治疗方面有一定价值。     

山奈酚对胃癌细胞PARP1以及P53基因表达的影响研究

胃癌(GC)是最常见的恶性肿瘤之一,是人类健康的主要威胁,其发病机制是一个单基因或多基因逐步突变的过程,与细胞的侵袭、增殖和转移有关,包括癌基因遗传和表观遗传的突变、肿瘤抑制基因、DNA修复途径基因、细胞周期途径基因和幽门螺杆菌感染等。而山奈酚具有多种生物学活性,能够抑制多种肿瘤细胞的细胞周期,诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞/组织的侵袭及转移。因此本研究用不同浓度的山奈酚处理胃癌细胞,并检测了胃癌细胞的形态变化情况、癌细胞凋亡相关因子P53和PARP1基因的表达水平和其对应的蛋白质表达变化。结果表明大于100μmol/L山奈酚处理后的胃癌细胞中P53基因和P53蛋白的表达水平被显著提高,而相反的PARP1基因和蛋白的表达则被显著抑制,且山奈酚处理后胃癌细胞的凋亡数目也明显增加,因此本实验结果表明,山奈酚能够有效的促进胃癌细胞凋亡的发生,以此来达到抑制癌细胞恶性增殖的作用。这一结果可以为后续针对胃癌新疗法的研究提供一些思路和理论支持。     

PC-1增强受体酪氨酸激酶家族成员EphA3在前列腺癌细胞中的转录

为了研究前列腺癌相关基因(prostate and colon gene 1, PC-1）对受体酪氨酸激酶家族分子EphA3表达的影响,用RT-PCR、实时PCR和Western印迹检测表达不同水平PC-1的前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2中EphA3的表达情况. 发现PC-1可诱导EphA3基因表达上调. 采用荧光素酶实验检测PC-1对于EphA3启动子转录活性的影响,结果显示,PC-1对转录起始位点上游916 bp的启动子活性没有影响,而可增强转录起始位点上游2011 bp启动子的活性.对EphA3启动子－916 bp～－2　011 bp区域进行生物信息学分析,结果显示,此区域包含HSF、NF-1、Nkx-2、SP1和GATA-1等多种转录因子结合位点.实验结果表明,PC-1可通过影响EphA3启动子诱导EphA3基因高表达,其调控区域位于转录起始位点上游－2　011　bp至－916 bp之间,提示PC-1可能通过影响一些结合于此区域的转录因子来影响EphA3启动子的转录活性.     

PC-1分子在细胞内定位的深入探讨

为了寻找影响PC-1分子进入细胞核的序列,将该分子不同区段分别与EGFP融合表达,通过观察绿色荧光蛋白在细胞内的分布,发现PC-1分子的第112～190区段是一独立的功能区,缺失这一区段后,分子的其余部分能够进入细胞核并在其中积累,这一区段使PC-1分子被排斥于细胞核之外,并在细胞质中浓缩成许多点状结构.运用以SOS恢复系统为基础的酵母双杂交方法,发现PC-1分子能够定位于细胞膜上,通过缺失突变发现该分子的第112～190区段是一独立的细胞膜定位信号序列,这一序列将其定位于细胞的胞膜上.     

大肠癌P21,P53蛋白表达和k—ras基因,P53基因突变研究

用免疫组化技术和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对高、中、低分化大肠腺癌、癌旁粘膜、正常粘膜及大肠腺癌型息肉的Ｐ２１、Ｐ５３蛋白表达和ｋ－ｒａｓ基因、Ｐ５３基因突变进行检测。结果,大肠腺癌Ｐ２１、Ｐ５３蛋白表达比大肠腺瘤增多,但增加不显著（Ｐ〉０．０５）,二组均比癌旁粘膜和正常粘膜Ｐ２１、Ｐ５３蛋白表达阳性率高（Ｐ〈０．０１）,大肠腺癌ｋ－ｒａｓ基因和Ｐ５３基因突变率比大肠腺瘤、癌旁粘膜和正常粘膜组显著增加     

PC-1分子转录激活功能研究

PC-1基因是在人前列腺癌细胞中克隆的新基因,表达水平随前列腺癌恶性程度增加而升高,其表达产物具有转录因子的一些特征.为研究PC-1分子的转录激活功能,首先应用酵母双杂交系统将PC-1全长以及不同区段的cDNA克隆到表达载体pAS2-1中,然后分别转化酵母细胞株CG-1945. lacZ和His3报告基因激活的检测结果表明,该分子具有转录激活活性并将该活性定位于N端的46个氨基酸区域.此外,将PC-1分子不同区段的cDNA分别克隆至表达载体pZHO1中,将它们与报告基因质粒pTRE-luc共转染哺乳动物细胞COS7和C4-2,Firefly荧光素酶相对活性的检测结果表明,该分子N端的46个氨基酸区域具有转录激活活性.